厚叶旋蒴苣苔BcWRKY2基因5′端调控区的克隆及功能元件分析

在克隆厚叶悬蒴苣苔干旱诱导表达转录因子BcWRKY2基因的基础上,利用接头介导的PCR(LM-PCR)技术,从基因组DNA中克隆了908bp的BcWRKY2基因的上游调控区序列。序列分析显示,该启动子中存在多种非生物胁迫反应元件,如ABA反应元件ABRE、干旱反应元件DRE/C-repeat以及MYB结合位点MBS(MYB binding site involved in drought-inducibility)等。

通过原位反转录研究MADS盒基因M79的时空表达模式

通过设计可以引发特定mRNA进行转录的特异引物，采用了一种新的原位反转录的方法检测mRNA，这种原位反转录的方法是把原位杂交和反转录进行有机结合的结果，其实用性能和关键步骤都已进行优化。研究表明，只要设立合适的对照原位反转录方法，检测mRNA的灵敏度高、假阴性和假阳性率低。用这种方法对一个属于AGL2亚组的水稻(Oryza sativa L．)的MADS-盒基因M79的表达进行了分析，结果表明，在水稻从营养到生殖的各个发育阶段，M79均有表达，与平行进行的传统原位杂交的方法得到的结果类似。相对而言，原位反转录法耗时短、容易操作，可以成为一种可靠的原位定位mRNA的基本技术。

水稻中一个25 kD Bowman-Birk蛋白酶抑制剂的表达和抑制活性分析

水稻Bowman-Birk蛋白酶抑制剂(RBBI)在体外是胰蛋白酶抑制剂,有的有1个同源结构域(8kD),有的有2个同源结构域(16kD).本研究发现,在水稻体内存在带有3个同源结构域的RBBI(25kD),而且RBBI受发育和伤害调控.体外实验发现,3:13二硫键(而不是4:5二硫键)可抑制胰蛋白酶的活性;而RBBI3-1的D3结构域对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草芽孢杆菌素没有抑制活性.突变实验表明,改变D1结构域N端的P1位点(把Lys突变为Leu)并不能获得对胰凝乳蛋白酶的抑制活性,这表明RBBI3-1的D1结构域反应回环阻碍了P1位点获得新的抑制活性;而对胰凝乳蛋白酶的抑制活性可能还需要其他结构(比如3:13二硫键)的参与.