利用等温滴定量热仪测定胰蛋白酶活性

等温滴定量热技术可以直接测量化学反应吸收或者放出的热量。酶促反应伴随着吸放热过程,因此利用等温滴定量热仪可以测量酶活性。本文详细描述了等温滴定量热仪测定酶活性的原理、方法并对胰蛋白酶的活性进行了测试,研究了温度、转速、缓冲液等条件对胰蛋白酶活性的影响,并对实验过程中常见的滴定曲线形状进行了分析,结果表明温度变化导致k_(cat)、k_(m)有明显的变化,ΔH没有明显的变化。不同的缓冲液中k_(cat)、k_(m)没有明显的变化,但ΔH有明显的变化。对酶促反应的两种方法单次注入法和多次注入法进行了对比,结果表明单次注入法操作简单,多次注入法对酶浓度的变化更为敏感。