人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用

目的 观察颗粒酶Ｂ（ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ）融合蛋白对转染的ＨｅＬａ细胞的作用。 方法用ＲＴ－ＰＣＲ法获取人ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ全长ｃＤＮＡ，经重组ＰＣＲ将活性型序列的５′端与一段 ＰＥ转膜肽序列融合。将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）共表达载体ｐＩＲＥＳ２－ＥＧＦＰ，转染ＨｅＬａ细胞。用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达，荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构。 结果成功地获得了野生型ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ ｃＤＮＡ及其融合蛋白基因，并构建了融合蛋白基因与ＧＦＰ基因共表达的真核载体。转染ＨｅＬａ细胞后，检测到目的蛋白的表达。荧光显微镜观察转染细胞有两种变化：一种表现为体积增大并常伴随多核现象；另一种出现细胞质和细胞核的固缩。电镜观察显示，多核巨细胞生长状态良好，固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征。结论ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ融合蛋白在ＨｅＬａ细胞中异位表达，可使转染细胞的形态发生变化，出现多核的大细胞和核固缩的小细胞。