槟榔碱通过断裂转导蛋白样增强子4对裸鼠骨肉瘤细胞自噬和凋亡的影响实验研究

目的:探究槟榔碱通过断裂转导蛋白样增强子4(TLE4)对大鼠骨肉瘤细胞自噬和凋亡的影响。方法:选取SPF级裸鼠建立骨肉瘤移植瘤模型。将建模成功的60只裸鼠随机分为模型组,槟榔碱低、中、高剂量组(分别腹腔注射10、20、50 mg/kg槟榔碱),TLE4抑制剂组(腹腔注射3 mg/kg TAK-242)和顺铂组(腹腔注射2 mg/kg顺铂),每组10只,隔日注射1次,连续注射14 d。将未建模的10只裸鼠作为对照组。对照组和模型组每天注射同体积0.9%氯化钠溶液。观察移植瘤体积,取瘤体进行称重。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测骨肉瘤组织TLE4 mRNA表达,免疫组织化学染色检测病理学变化和TLE4蛋白表达。Western blot检测重组人自噬效应蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、家蚕隔离体蛋白1(p62)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果:与模型组比较,槟榔碱低、中、高剂量组以及TLE4抑制剂组和顺铂组TLE4、移植瘤体积和重量、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Bcl-2降低,Bax、Caspase-3、LC3Ⅰ升高(均P<0.05)。与槟榔碱低剂量组比较,槟榔碱中、高剂量组以及TLE4抑制剂组和顺铂组TLE4、移植瘤体积和重量、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Bcl-2降低,Bax、Caspase-3、P62、LC3Ⅰ升高(均P<0.05)。与槟榔碱中剂量组比较,槟榔碱高剂量组和TLE4抑制剂组TLE4、移植瘤体积和重量、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2降低,Bax、P62、LC3Ⅰ升高(均P<0.05)。与槟榔碱高剂量组比较,TLE4抑制剂组和顺铂组Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、LC3Ⅱ升高,P62、LC3Ⅰ、Bax、Caspase-3降低(均P<0.05)。TLE4抑制剂组和顺铂组以上指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:槟榔碱可能通过抑制TLE4表达影响骨肉瘤细胞自噬和凋亡,从而抑制骨肉瘤的生长。