Kindlin-2 RNA干扰经Wnt信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖

目的:观察Kindlin-2 RNA干扰(RNA interference,RNAi)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨相关的作用机制。方法:构建并制备Kindlin-2 siRNA慢病毒载体并感染大鼠VSMC,CCK-8和BrdU技术检测重组Wnt3a蛋白诱导的VSMC增殖情况,实时定量PCR测定VSMC中Kindlin-2、c-Myc和cyclin D1 mRNA的表达水平,免疫共沉淀了解Kindlin-2和β-catenin的关系,Western blot检测VSMC中Kindlin-2、β-catenin、磷酸化β-catenin(Ser675)、GSK-3β和磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白的表达。结果:Kindlin-2 siRNA慢病毒载体能有效感染大鼠VSMC。CCK-8和BrdU结果表明Kindlin-2 RNAi能够显著抑制Wnt3a诱导的VSMC增殖(1.12±0.14 vs. 2.25±0.15,P=0.000;0.162±0.017 vs. 0.288±0.019,P=0.000)。与阴性对照组相比,Kindlin-2 RNAi组和Kindlin-2 RNAi+Wnt3a组中Kindlin-2、c-Myc和cyclin D1 mRNA表达水平均明显下降(0.964±0.014 vs. 0.530±0.029,P=0.000;0.980±0.025 vs. 0.572±0.022,P=0.000;0.979±0.009 vs. 0.590±0.035,P=0.002和0.964±0.014 vs. 0.569±0.027,P=0.000;0.980±0.025 vs. 0.741±0.026,P=0.001;0.979±0.009 vs. 0.769±0.017,P=0.023)。免疫共沉淀证实VSMC中Kindlin-2可以与β-catenin结合,而且Kindlin-2 RNAi+Wnt3a组中Kindlin-2、磷酸化β-catenin(Ser675)和磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白的表达水平较阴性对照+Wnt3a组明显降低(0.468±0.029 vs. 0.725±0.033,P=0.001;1.058±0.109 vs. 1.478±0.045,P=0.001;0.624±0.048 vs. 0.809±0.067,P=0.020)。但各组中总β-catenin和总GSK-3β蛋白水平没有明显变化(F=0.638,P=0.647;F=0.781,P=0.563)。结论:Kindlin-2 RNAi可以通过Wnt信号通路发挥作用并抑制VSMC增殖。

4 F MPA1导管经右肘静脉完成双侧肾上腺静脉同步采血术1例

探讨4 F MPA1导管经右肘静脉行双侧肾上腺静脉同步采血术(AVS)的安全性和可行性。选择1例右肾上腺中央静脉汇入副肝静脉的原发性醛固酮增多症患者,经右上肢贵要静脉、头静脉处分别置入2个6 F鞘管,选择2根4 F MPA1导管(1根塑形成猪尾状),分别插入左右肾上腺静脉,分3个时间段同步采集双侧肾上腺静脉及外周静脉血样,检测醛固酮、皮质醇激素水平。肾上腺静脉醛固酮/皮质醇:左侧13.2,右侧2.9,左侧优势指数9.9,左肾上腺为醛固酮优势分泌侧。4 F MPA1导管经右肘静脉行同步AVS具有技术可行、导管选择简单、创伤小、安全性高、不需卧床制动等优点。

Kindlin-2 RNA干扰减轻大鼠颈动脉内膜增生

目的观察Kindlin-2 RNA干扰对球囊损伤的大鼠颈动脉内膜增生的影响。方法构建并制备Kindlin-2 siRNA和阴性对照慢病毒载体并感染球囊损伤的大鼠颈动脉,1周和4周后取损伤的颈动脉,实时定量PCR检测Kindlin-2 mRNA的表达,HE染色评估术后4周颈动脉内膜增生情况,并行免疫荧光或免疫组化检测颈动脉中Kindlin-2、α-actin、PCNA和β1整合素的表达,Masson染色了解颈动脉中胶原纤维合成情况。结果 Kindlin-2RNA干扰能明显降低1周时颈动脉中Kindlin-2 mRNA的表达水平(P<0.05),并显著抑制4周后颈动脉的内膜增生(P<0.05)。与阴性对照组相比,Kindlin-2 siRNA组术后4周颈动脉中Kindlin-2、α-actin、PCNA和β1整合素的表达水平均明显降低,颈动脉内膜和中膜胶原纤维的合成也减少。结论 Kindlin-2 RNA干扰可能通过抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质合成减轻血管内膜增生。

Kindlin-2与整合素在机体中的研究进展

Kindlin-2蛋白是Kindlin家族成员之一,属于黏着斑蛋白,含有一个典型的FERM结构域。Kindlin-2可通过FERM结构域与整合素β亚基胞内段结合,在细胞-细胞间连接、细胞-细胞外基质黏附、细胞迁移、细胞骨架重构等细胞行为以及整合素介导的双向信号转导过程中发挥重要作用,参与胚胎形成、止血、免疫反应、肿瘤转移、器官发育等过程。Kindlin-2基因缺陷将导致胚胎、心脏及血管等组织器官发育异常,且Kindlin-2在很多恶性肿瘤中表达增加,影响肿瘤细胞的侵袭性和转移能力。因此,对Kindlin-2与整合素作用机制研究的深入,不仅有助于深化对Kindlin家族蛋白和整合素的认识,还有助于Kindlin-2相关疾病的诊断和治疗。

巧克力摄入量与心力衰竭发病风险的系统评价

目的:探讨巧克力摄入量与心力衰竭(heart failure,HF)发病风险的关系,以确定巧克力摄入在预防HF方面的作用。方法:系统检索PubMed,Web of Science,Scopus,中国知网和万方数据库关于巧克力摄入量与心力衰竭发病风险关系的文献,检索截至2019年3月28日,纳入符合标准的文献研究。结果:最终纳入前瞻性试验研究5项,总样本量为106109例,结局心力衰竭事件4832例,Meta分析结果示:与未摄入巧克力组比较,低至中度摄入量巧克力(<7份/周)可以降低HF的发病风险(HR=0.86,95%CI:0.81~0.90);高摄入量组(≥7份/周)与HF的发病风险差异无统计学意义(HR=0.93,95%CI:0.81~1.06),研究结果稳定,不存在发表偏倚;对于剂量反应关系的Meta分析的结果提示:巧克力摄入量与HF发病风险存在非线性剂量反应关系(P for nonlinearity=0.004),与未摄入巧克力组比较,巧克力摄入量为1份/周与HF发病风险关系为HR=0.93,95%CI:0.88~0.97,3份/周与HF发病风险关系为HR=0.86,95%CI:0.78~0.95,7份/周与HF发病风险关系为HR=0.94,95%CI:0.85~1.03,10份/周与HF发病风险关系为HR=1.06,95%CI:0.93~1.24。结论:适量的巧克力的摄入可能与降低HF风险有关。