miR-181a-5p对氧化应激诱导皮肤老化的促进作用及其机制

目的研究miR-181a-5p对氧化应激诱导皮肤老化的影响并探讨其可能的作用机制。方法取对数生长期的大鼠皮肤成纤维样细胞RS1,建立氧化应激诱导皮肤老化模型,实验分为:对照组、模型组,模型+miR-181a mimic组、模型+mimic-NC组、模型+miR-181a inhibitor组、模型+inhibitor-NC组。以CCK8法检测各组细胞活力,qPCR检测P53,衰老标记蛋白(SMP)30,Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)基因表达水平,生化试剂盒检测过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,免疫荧光法检测基质金属蛋白酶(MMP)2及COL1A1的表达。结果细胞经H_(2)O_(2)处理后,转染miR-181a mimic可使细胞活力显著降低(P<0.01),P53及SMP30表达量显著升高(P<0.01),COL1A1表达量显著降低(P<0.01),生化检测结果显示CAT、GSH-PX、T-SOD活性均显著升高(P<0.01),免疫荧光结果显示COL1A1表达抑制,MMP2表达增强(P<0.01)。而转染miR-181a inhibitor后,结果相反。结论miR-181a对氧化应激诱导的皮肤老化有促进作用,其机制可能与增强MMP2的表达、抑制COL1A1的表达有关。

miR-181a-5p在皮肤成纤维样细胞衰老中的作用和机制

目的观察miR-181a-5p在H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对细胞自噬和凋亡的影响。方法采用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导大鼠皮肤成纤维样RS1细胞6 h,构建细胞衰老模型。将细胞分为5组:H 2 O 2处理组、mimic-NC组、mimic组、inhibitor-NC组和inhibitor组,采用脂质体转染技术将miR-181a-5p mimic、inhibitor等转染入相应的细胞中。MTT法检测细胞增殖活性;qPCR检测细胞miR-181a-5p表达水平。利用流式细胞术检测细胞凋亡;利用吖啶橙染色观察细胞自噬水平;采用Western blot检测细胞LC3B、p62、Beclin-1、自噬相关基因5(autophagy related 5,ATG5)蛋白表达水平。结果与正常RS1细胞比较,H 2 O 2诱导后的RS1细胞增殖活性显著降低(P<0.05),而miR-181a-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与H 2 O 2处理组比较,mimic组RS1细胞排列紊乱,细胞轮廓不清晰,碎片较多,凋亡率显著升高(P<0.05),自噬水平降低,Beclin-1和ATG5表达显著降低(均P<0.05);inhibitor组RS1细胞轮廓清晰,过度伸展、空泡化的细胞减少,凋亡率显著降低(P<0.05),自噬水平升高,Beclin-1和ATG5表达显著升高(均P<0.05)。结论H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞miR-181a-5p表达增加,且上调miR-181a-5p表达,可抑制细胞自噬、促进细胞凋亡。