外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学效应

目的：研究外源性野生型ｐ５３基因对人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２的生物学作用。方法：将含有野生型ｐ５３基因的ｐＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体，通过ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染ＧＬＣ－８２细胞，用流式细胞仪、电镜及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，观察野生型ｐ５３基因对ＧＬＣ－８２细胞的生物学效应。结果：电镜观察可见，转染野生型ｐ５３基因，可使ＧＬＣ－８２细胞出现一些病理现象，如胞浆中有明显的空泡及线粒体肿胀；流式细胞仪分析显示，野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞周期停止于Ｇ１～Ｓ区；３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验提示，野生型ｐ５３基因能够抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ的合成。结论：这些结果阐明了野生型ｐ５３基因是抑制ＧＬＣ－８２细胞生长的部分机理。

反义P^(53)基因和mdm_2基因对肺腺癌细胞恶性表型双重抑制作用的实验研究

目的研究反义P53基因和mdm2基因对肺腺癌细胞中突变型P53的双重抑制，并观察其抑制肺腺癌细胞生长和促进恶性表型逆转作用。方法利用能表达反义产P53和mdm2基因的逆转录病毒表达载体在脂质体介导下，将PDOR－mdm2基因转染含有PDOR－FP53的肺腺癌GLG-82细胞中。经G418筛选获得GLG-82细胞同时含有反义P53基因和mdm2基因的克隆，这种双重转染的GLC－82细胞命名为PDOR－FP53／mdm2，并与导入空载体PDOR－neo和GLC-82亲本细胞作比较。通过DNA、RNA杂交观察外源基因转染细胞中表达情况，细胞生长曲线测定和3H－TdR掺入、软琼脂培养集落形成试验、流式细胞仪测定观察其对肺腺癌GLC-82细胞恶性表型的抑制作用。结果DNA、RNA杂交证实反义P53和mdm2基因转染GLC－82细胞成功并获得表达。细胞生长曲线测定和3H-TdR掺入试验结果表明，转染PDOR-PP53／mdm2基因的GLC-82细胞较转染PDOR-neo的GLC-82细胞活力减弱、增殖能力下降、DNA合成受阻、软琼脂培养集落形成率低。细胞周期分析结果显示，转染PDOR－FP53／mdm2的细胞G1期峰增高和S期峰降低，提示DNA合成减慢，细胞增殖受到抑制。结论反义P53基因和mdm2基因对肺腺癌细胞恶性表型有双重抑制作用。

肺炎支原体聚合酶链反应检测方法的实验研究和初步应用

人类原发性非典型性肺炎是一种全球性疾病,其病原体为肺炎支原体,除引起呼吸系统感染外,还可引起神经系统、心血管系统、消化系统等的病变。因而早期、快速、准确地检测肺炎支原体,具有重要的临床和流行病学意义。目前对肺炎支原体检测方法主要有分离培养法、

恶性肿瘤组织抑癌基因Rb单链构象多态性分析的实验研究

单链构象多态性（SSCP）分析已成为检测基因突变的重要手段。结合PCR技术对肿瘤组织抑癌基因Rb的存在状态进行检测，具有重要的临床基因诊断意义。该研究主要建立了PCR－SSCP—银染方法，并对获得SSCP最佳图型的实验条件进行了研究。通过PCR对Rb基因14．27两个外显子分别进行扩增，得到212和218bP的DNA片断，加热变性后，在含5％甘油的8％非变性聚丙烯酰胺凝胶（acr：bis＝49：1）以0．5×TBE，冷房中恒功率电泳，以使凝胶温度分别恒定在16℃和20℃，即可得到稳定的SSCP分析结果。

恶性肿瘤基因突变的检测及临床意义

恶性肿瘤是一种多基因异常的疾病,随着分子肿瘤学的迅速发展,肿瘤基因突变的检测对于肿瘤的研究和诊治显示出越来越重要的意义。本文扼要综述了检测肿瘤基因突变的几种技术以及在临床诊断和预后的意义。

构建由缺氧反应元件修饰的hTERT核心启动子引导FCY1基因表达的复制缺陷型腺病毒

目的 构建由缺氧反应元件串联重复体修饰的人端粒酶逆转录酶 (h TERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .方法 人工设计缺氧反应元件串联重复序列 ,克隆后插入 h TERT启动子上游并经测序证实 .将修饰后的 h TERT启动子和酵母胞嘧啶脱氨酶基因 FCY1插入穿梭质粒 ,与辅助质粒共转染 HEK2 93细胞 ,重组产生复制缺陷型腺病毒 .结果 获得了由 3倍和 6倍缺氧反应元件修饰的 h TERT核心启动子引导 FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .结论 基于 Cre重组酶 / lox P的腺病毒载体构建系统操作简便。

抑癌基因p53与癌基因mdm2在肺腺癌细胞系GLC-82中的相互作用

目的：探讨抑癌基因ｐ５３和癌基因ｍｄｍ２在肺腺癌细胞系ＧＬＣ８２中的相互关系和作用．方法：采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法，用含有野生型ｐ５３基因和ｍｄｍ２基因的ＰＤＯＲｎｅｏ逆转录病毒载体分别或共转染ＧＬＣ－８２细胞．结果：转染野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ８２细胞生长；抑制ＧＬＣ８２细胞ＤＮＡ合成；软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤性减慢，而ｍｄｍ２基因的转染可拮抗野生型ｐ５３的功能．结论：将ｍｄｍ２表达载体转染含有野生型ｐ５３基因的ＧＬＣ８２细胞后，ｍｄｍ２可部分地解除野生型ｐ５３对ＧＬＣ８２细胞生长的抑制作用．

转染p53基因对肺腺癌细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探讨转染野生型p53(wtp53)和突变型p53(mtp53)基因对人肺腺癌细胞株GLC82裸鼠移植瘤生长的影响。方法:采用脂质体介导法,分别将wtp53和mtp53基因导入人肺腺癌细胞株GLC82,在裸鼠体内、体外实验中检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果:转染mtp53基因的细胞株G418筛选的细胞集落数、3HTDR掺入实验、软琼脂平皿细胞集落数,以及裸鼠瘤组织重量和体积均高于对照组(P<0.01),而转染wtp53基因的细胞株均显著低于对照组(P<0.01),表明导入wtp53基因的细胞株瘤细胞生长速度明显低于对照组细胞株和导入mtp53基因的细胞株,即导入mtp53基因的细胞株瘤细胞生长速度最快,而导入wtp53基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论:wtp53基因能有效抑制人肺腺癌细胞生长;mtp53基因则可以明显地促进瘤细胞生长。

抗LPS mAb Fab片段cDNA的克隆及其在CHO细胞中的表达

目的构建抗LPS单克隆抗体Fab段的真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法以逆转录PCR方法扩增抗LPSmAb重链Fd和轻链cDNA,分别克隆入载体pGEM-Teasy。经测序分析后,再分别亚克隆入载体pcDNA3,构建成重组载体pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC,并以PCR方法扩增pcD-NA3-LC中包括CMV启动子、轻链序列和BGHPoly(A)在内的轻链表达序列。经适当的限制性内切酶酶切后,插入到质粒pcDNA3-Fd中Fd表达序列的前部,构建成表达载体pcD-NA3-Fab,以脂质体包裹转染CHO细胞。经G418筛选,用ELISA、免疫荧光和Westernblot鉴定阳性克隆。结果用ELISA和免疫荧光法,筛选出4株高表达Fab的细胞株。Westernblot显示,表达产物的Mr为50000。同时,ELISA结果显示,该Fab具有良好的结合LPS的活性。结论成功地在CHO细胞中表达抗LPSmAb的Fab段,为进一步鉴定其抗LPS的作用,使之成为诊断和治疗革兰氏阴性细菌感染的工具奠定了基础。

聚合酶链反应对女性淋菌性尿道炎和宫颈炎的诊断价值

报告用聚合酶链反应(PCR)诊断女性淋菌性尿道炎和宫颈炎共17例。将PCR与淋菌分离培养的结果比较,认为聚合酶链反应检测淋菌优于淋菌分离培养。其具有快速、高特异性、敏感性高等特点。

抗癌基因p53与癌基因mdm2

抗癌基因ｐ５３与癌基因ｍｄｍ２任力强（第四军医大学西京医院临床分子生物学研究室，西安７１００３２）关键词ｐ５３基因，ｍｄｍ２基因自１９７９年发现ｐ５３以来，它经历了肿瘤抗原、癌基因和抗癌基因几个阶段，实验发现这些确实也都是ｐ５３的特征，也是ｐ５３在肿...

Ras蛋白异戊二烯化修饰与抗癌药物的设计

Ｒａｓ蛋白异戊二烯化修饰与抗癌药物的设计任力强（第四军医大学西京医院临床分子生物学研究室，西安７１００３２）关键词Ｒａｓ蛋白，抗癌药物哺乳动物细胞中的ｒａｓ基因编码一种ＧＴＰ结合蛋白，由于其第１２、１３或６１位密码子处的点突变使得它有转化哺乳动物细胞...

抗癌基因p53与肿瘤的治疗

抗癌基因ｐ５３与肿瘤的治疗任力强（第四军医大学西京医院临床分子生物学研究室，西安７１００３２）关键词抗癌基因ｐ５３，肿瘤治疗ｐ５３基因是当前癌基因研究和肿瘤的基因治疗研究中最引人注目的抗癌基因之一。它在多数人体肿瘤中都发生了突变，并表达高水平的ｐ５３...

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中，ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因，研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型ｐ５３基因编码区３’端７０３ｂｐ的ｃＤ－ＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中，得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３，经热诱导表达，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达，它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备，而且也可用于对ｐ５３蛋白羧基端多肽功能的研究。

HBsAg/HCcAg融合表达细胞系的建立

目的 建立融合表达 HBV表面抗原与 HCV核心蛋白的体外培养细胞系 ,使之作为细胞杀伤实验的靶细胞 .方法 将含 HBV S和 HCV C融合基因真核表达质粒 CSpc D-NA3.1用电穿孔法转染 p81 5细胞 ,G41 8筛选后 ,再用有限稀释法进行单细胞克隆筛选 .RT- PCR与免疫荧光法分别检测基因转录与蛋白表达 .结果 HBV S基因与 HCV C基因的RT- PCR检测均为阳性 ,HBV表面抗原与 HCV核心蛋白的免疫荧光检测均为阳性 .结论 成功获得融合表达 HBV表面抗原与

朊病毒的实验室检测

朊病毒是引起人与动物传染性神经系统退化性疾病的病原体，对朊病毒的分子生物学性质及实验检测的研究，有利于加深人们对这一“非常规”病毒本质的认识和改进朊病毒的实验检测方法。本文综述了朊病毒的生物学特性及其实验检测的研究进展。