肠易激综合征发病机制的初步研究

肠易激综合征发病机制的初步研究第四军医大学西京医院全军消化病研究所（西安７１００３２），第一军医大学杨云生张振书宋于刚张万岱周殿元冯福才陈昱肠易激综合征（ｉｒｉｔａｂｌｅｂｏｗｅｌｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＩＢＳ）是一种肠运动功能紊乱性疾病，发...

腺病毒细菌重组系统表达Crg-2蛋白的实验研究

目的利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白。方法首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Westernblot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性。结果穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Westernblot检测有一接近Mr10000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用。结论采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg-2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2。

microRNAs与肝病的研究

近年动植物中发现一类普遍存在的非编码小RNA—microRNAs(miRNAs)。作为人体内最大的一类基因表达调控因子,miRNAs参与发育、增殖、分化、凋亡等多种重要的生物学过程,并在许多疾病过程中扮演重要角色,包括病毒复制和肿瘤的发生。miRNAs作为一类新的分子靶标,应用于疾病诊断和治疗具有广阔的前景。本文就miRNAs与肝炎病毒复制和肝癌发生的最新研究进展作一综述。

细胞凋亡与消化系疾病

细胞凋亡是不同于坏死的一种细胞死亡形式,对一些消化系疾病的转归可能起有特殊作用。本文就细胞凋亡的基本特征、分子机制及消化系疾病中的凋亡现象作简要的综述。

ERCP诊治胆胰疾病的临床应用

目的 :研究ERCP在诊治胆胰疾病中的临床应用 .方法 :对 1996 0 1/ 2 0 0 1 12我所临床应用ERCP诊治的 114 7例疾病患者进行回顾性分析 .结果 :治疗性ERCP由 1997年的 6例 (12 .4 % )上升到 2 0 0 1年的 2 6 1例 (87.6 % ) ,逐渐取代了诊断性ERCP ;ERCP在胆胰疾病诊治中的应用范围逐渐扩大 ;十二指肠乳头切开术和胆道取石术是治疗性ERCP中最多的术式 ,在胆胰疾病的治疗中占主要地位 .结论

巴豆提取物诱导小鼠小肠组织中蛋白质差异表达的初步研究

目的 建立和优化蛋白质分子差异展示的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,初步观察巴豆提取物诱导小鼠小肠组织中蛋白质的差异表达 ,为进一步筛选其中介导巴豆生物作用的蛋白质分子奠定基础。方法 应用巴豆提取物灌胃制备小鼠慢性胃肠运动增强模型 ,提取其小肠组织中总蛋白质 ,优化蛋白质分子差异展示的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,并用其分析模型动物小肠组织中蛋白质 ,双向电泳凝胶银染法显示其蛋白质的差异表达。结果 建立了小鼠慢性胃肠运动增强模型 ,优化并运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术展示出模型动物小肠组织中有差异蛋白质的表达。结论 巴豆提取物可以诱导小鼠小肠组织中蛋白质差异表达 。

胃癌及癌前病变中端粒酶活性的表达

观察端粒酶活性在胃癌及胃癌前病变细胞和组织中的表达．方法：采用蜡膜介导热启动端粒重复扩增PCR模型方法．结果：胃癌细胞株端粒酶活性3株均呈阳性，在38例胃癌中，32例端粒酶活性阳性，其中进展期胃癌为30／35，早期胃癌为2／3，而邻近胃组织为2／38，在29例胃癌前病变中，5例端粒酶活性阳性，其中不典型增生轻度、中度及重度分别为1／8，l／4和1／3，肠上度化生和胃息肉分别为1／8和1／6．结论：端粒酶的活化在胃癌的发生、形成及发展过程中可能起着非常重要的作用．

Wilson's病的病理生理学及临床特征

Wilson's病是一种较少见的常染色体隐性遗传的铜代谢疾病。由于铜转运基因 ATP7B发生突变而导致了肝的铜分泌失衡 ,铜元素在肝、脑和其他组织中蓄积导致了较广泛的肝、神经、精神和其他临床症状 。

不同mRNA差异显示法筛选胃癌细胞耐药相关基因的研究

目的 比较银染和放射自显影mRNA差异展示方法在分离、克隆胃癌细胞耐药相关基因过程中的优缺点。方法 长春新硷诱导人胃癌SGC790 1细胞 ,建立稳定的耐药细胞亚系SGC790 1/VCR。同时应用银染和放射自显影的mRNA差异展示方法筛选胃癌SGC790 1细胞和耐药细胞亚系SGC790 1/VCR之间mRNA表达的差异。结果 显示银染法省时 ,花费少 ,操作方便 ;在获得差异条带方面放射自显影法明显优于银染法 ,且其能得到较多低丰度的差异表达基因 ;而两者在二次PCR扩增 ,克隆 ,测序 ,杂交鉴定及假阳性率方面无明显差异。结论 银染mRNA差异展示法适合于高丰度差异表达基因的快速筛选 。

人核糖体蛋白S13(RPS13)编码基因的克隆及其正反义核酸转染胃癌细胞的初步研究

目的:扩增人核糖体蛋白S13(RPS13)编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,分别转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,以进一步研究RPS13基因与胃癌多药耐药的关系。方法:采用RT-PCR法扩增RPS13cDNA片段编码区全长序列,利用DNA重组技术构建正、反义真核表达载体,经脂质体介导转染胃癌细胞SGC7901及胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,筛选正、反义基因稳定转染细胞,RNA斑点杂交法检测正、反义稳定转染细胞mRNA水平的变化。结果:从高表达RPS13的SGC7901/VCR耐药细胞中提取细胞总RNA,RT-PCR法成功扩增了RPS13cDNA片段编码区全长序列,并经测序证实;目的基因按正、反两个方向亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),并经酶切鉴定证实;经脂质体介导将正义真核表达载体转染SGC7901细胞,反义真核表达载体转染SGC7901/VCR细胞,G418筛选获得稳定转染细胞;RNA斑点杂交试验证实:正义稳定转染细胞RPS13mRNA水平上调,反义稳定转染细胞RPS13mRNA水平下调。结论:成功克隆了人RPS13编码基因序列,并构建了其正、反义真核表达载体。在胃癌细胞系SGC7901及长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR中得到稳定转染细胞株,正义转染细胞中RPS13mRNA表达明显增加,反义转染细胞中表达明显受抑。

胃癌耐药相关抗体MGr1筛选文库获得的基因MGr1-Ag1在胃癌组织中表达的研究

目的:为研究肿瘤的多药耐药现象,应用胃癌耐药相关的单克隆抗体MGr1筛选肿瘤耐药细胞表达文库获得的一个稳定阳性克隆的cDNA片段MGr1-Ag1,检测MGr1-Ag1在胃癌组织中的分布及表达水平.方法:利用原位杂交技术,对MGr1-Ag1mRNA在胃癌组织中的分布进行了检测,以了解其在胃癌中的表达情况及意义.结果:MGr1-Ag1mRNA定位在胃腺体细胞的胞质中,为蓝色小颗粒,呈弥漫性分布.MGr1-Ag1mRNA在SGC7901/VCR阳性信号明显高于SGC7901,胃癌与癌旁组织相比,MGr1-Ag1mRNA的阳性表达率均有显著差异(P<0.05).MGr1-Ag1mRNA在胃癌(50.00%)、癌旁组织(71.42%)、高分化腺癌(68.75%)和中分化腺癌组织(57.14%)中的阳性表达率无显著差别,但高分化组和中分化组都与低分化腺癌组织(10.00%)差别显著(P<0.05).此外,MGr1-Ag1mRNA还分布于小肠及大肠腺体内,因例数偏少,未做统计.结论:MGr1-Ag1与胃癌的分化程度有关,随着组织的分化程度增高,MGr1-Ag1mRNA的阳性表达率增加.

mRNA差异显示研究胃癌相关基因

为了克隆与胃癌发病相关的新基因，我们以正常胃粘膜细胞ＧＥＳ和胃癌细胞系７９０１为对比材料，利用ｍＲＮＡ差异显示技术，得到两个ｃＤＮＡ片段。经分析发现，分别与Ｔｒｋ基因及白血病病毒基因有８０％和３０％的同源性及较好的读框，有可能为胃癌相关的新基因片段，已在ＧｅｎＢａｎｋ中登录：１７６１１６，１７６３８５。

免疫聚合酶链反应新技术的建立及其在消化道肿瘤血清诊断中的应用

本研究报道了以聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）的建立及在检测非核酸物质─肿瘤相关抗原的应用。首先制备了肿瘤单克隆抗体。重组ＤＮＡ联合体，（ＭＧ或ＭＣ－ＰＸＪ１９）以此将抗原抗体反应的特异性同ＰＣＲ技术的高敏感性相结合，建立了免疫聚合酶链反应技术（免疫ＰＣＲ技术），胃癌卑抗（ＭＧ系列）及结肠癌单抗（ＭＣ系列）均为本室制备。基础研究中以该技术检测胃印戒细胞癌株ＫＡＴＯⅢ上肿瘤相关抗原，并与ＥＬＩＳＡ法比较其敏感性，结果表明，ＫＡＴＯⅢ细胞数目在２０个时即可出现阳性结果，敏感性较ＥＬＩＳＡ法高出１０倍。若以０．２５％戊二醛固定相同数量（２×１０６／ｍｌ）ＫＡＴＯⅢ细胞后加入ＭＧ－ＰＸＪ１９嵌合体及单独ＭＧ分别以免疫ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ法进行检测，免疫ＰＣＲ检测结果呈阳性所需ＭＧ－ＰＸＪ１９为３．８×１０－１４ｍｏｌ，而ＥＬＩＳＡ法为３．０×１０－１１ｍｏｌ。临床研究中以该技术分别检测了４１６例胃癌、４６例结肠癌患者，其血清诊断阳性率分别为８３．３％及７２．９％，明显高于其它检测方法。将ＰＣＲ扩增产物进行定量研究表明，胃癌伴发转移者明显高于不伴有转移及早期癌肿患者。此外该方法还可用于高危人群普查，胃癌术后监测等。总之，免疫?

PI3K/Akt途径在朊蛋白介导胃癌耐药中的作用研究

目的:探讨PI3K/Akt途径在朊蛋白(PrPc)介导胃癌耐药中的作用。方法:脂质体基因转染法建立高表达PrPc的胃癌细胞亚系。Western印迹检测转染细胞中Akt蛋白的表达。噻唑蓝(MTT)比色法测定单独或联用PI3K抑制剂LY294002时转染细胞对化疗药物的敏感性。流式细胞仪检测单独或联用LY294002时转染细胞内阿霉素蓄积和潴留。结果:将PrPc正义载体pcDNA-PrP转入SGC7901,成功建立PrPc高表达胃癌细胞亚系并命名为PS;空载体转染细胞命名为BS。Western-Blot显示磷酸化Akt在PS中的表达较BS及SGC7901增高,而三者的总Akt则无差别。未经LY294002处理时,在阿霉素或长春新碱的作用下,PS的存活率分别为91.4%±3.4%和89.4%±3.8%,较BS(79.2%±4.3%和75.9%±2.1%)明显增高(均),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量分别为4.4±0.3和4.2±0.4,明显低于BS(8.2±0.5和8.0±0.3)(均);当联合LY294002处理后,PS在两种药物作用下的存活率均随着LY294002浓度的增加逐渐降低,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均),PS细胞内阿霉素蓄积量和潴留量逐渐增高,并均在LY294002为30μmol/L时接近BS(均)。结论:PrPc介导的胃癌耐药与PI3K/Akt途径活性密切相关,抑制PI3K/Akt途径活性可逆转PrPc介导的胃癌耐药。

重症溃疡性结肠炎119例临床和病理分析

目的对重症溃疡性结肠炎(UC)进行临床和病理分析并讨论其临床意义。方法重症溃疡性结肠炎患者119例,全部患者均符合2000年成都全国炎症性肠病会议修改的UC诊断标准,并经纤维结肠镜检查和X线钡灌肠检查,以及组织学检查确诊,连续粪培养2次排除细菌感染,同时排除阿米巴肠病、血吸虫病、肠道肿瘤和内分泌疾病。病变包括乙状结肠55例,降结肠31例,结肠脾曲20例和横结肠13例;临床类型包括初发型25例,慢性复发型54例和持续型40例。采取肠外静脉补充足够的营养,完全胃肠道休息,治疗4周后进行纤维肠镜检查。结果重症UC经过4周治疗后临床痊愈36例(30.3%),好转65例(54.6%),无效18例(15.1%),总有效率84.9%。初发型、复发型和持续型UC内镜下和组织学存在一定差异,但治疗总有效率无明显差异(P>0.05),分别为88.0%,87.0%和80.0%。全部患者血清AST、ALT在正常范围,血清白蛋白治疗后明显好转[g/L,(38.2±9.9)vs(22.4±8.8),P<0.01]。结论初发型、复发型和持续型UC内镜下和组织学存在一定差异,肠外静脉高营养疗法是一种有效可行的方法。

结肠生物电检测方法的研究

目的:改进结肠生物电的检测方法.方法:应用RM-6000多导生理记录仪,以自适应滤波和功率谱分析对照研究了50例受检者的结肠体表电活动及结肠腔内电活动.结果:结肠体表及腔内电活动波形清晰,呼吸干扰被有效滤除;结肠体表电的主频率为5.71±0.24周次/分钟(W),腔内电的主频率为5.79±0.24CPM,两者主频率基本一致(P=0.805).结论:自适应滤波能够有效滤除呼吸对肠道电活动检测的干扰,功率谱分析较人工阅图法较为方便、省时和准确,此方法检测结肠体表电活动可以代替其腔内电活动.

人硫氧化还原蛋白系统生物学意义的研究进展

硫氧化还原蛋白Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）是一种重要的氧化还原调节分子，广泛存在于生物体内， 与Ｔｒｘ还原酶和ＮＡＤＰＨ共同组成一个广谱的蛋白二硫键还原系统，在稳定细胞内氧化还原环境与调 节蛋白－蛋白、蛋白－核酸相互作用等方面起重要作用。人类的多种肿瘤中均存在Ｔｒｘ的异常表达； Ｔｒｘ直接应用于临床或作为抗肿瘤药物的靶分子已引起广泛关注。

胃癌研究二十年

<正>胃癌是我国最常见的恶性肿瘤。据统计,大约每2~3分钟就有一名中国患者死于胃癌。欧美等西方发达国家胃癌发病率很低,对胃癌的研究不十分重视。因此,研究胃癌成了中国医务人员义不容辞的责任。目前对胃癌的病因尚不清楚,不能针对病因进行治疗,故早期诊断成为改善患者预后的关键。但是。

幽门螺杆菌感染的黏膜损伤免疫机制和免疫治疗的研究进展

幽门螺杆菌(H.pylori)是人类最常见的致病菌之一,与胃炎、消化性溃疡和消化道肿瘤的发生密切相关。与黏膜上皮接触后,H.pylori通过一系列复杂的生物学过程导致黏膜损伤和溃疡形成。我国是H.pylori感染率较高的国家,针对H.pylori感染的黏膜损伤免疫机制,研制价廉、高效、兼具预防和治疗作用的免疫疫苗已成为现阶段的一项重要工作。本文就近年来H.pylori感染的黏膜损伤免疫机制和免疫治疗的研究进展作一概述。