山羊卵巢间质细胞对小腔卵泡发育的影响

为了能有效利用山羊小腔卵泡和研究相关小腔卵泡发育的机理,将山羊小腔卵泡与卵巢皮质间质细胞、卵泡膜细胞和卵巢髓质间质细胞体外共培养,测定培养第5天卵泡直径、培养液中类固醇激素分泌量、卵母细胞特异性分泌因子gdf9和bmp15基因的表达和卵泡颗粒细胞以及卵母细胞凋亡与抗凋亡基因表达。研究结果显示,山羊小腔卵泡与卵巢间质细胞共培养5d,卵泡直径增加明显大于小腔卵泡单独培养组(P<0.05);小腔卵泡与卵巢皮质间质细胞共培养5d后,小腔卵泡分泌的雌二醇激素的量高于小腔卵泡单独培养组(P<0.01),为413.95pg·mL-1;小腔卵泡与卵巢髓质间质细胞共培养5d后,小腔卵泡分泌孕酮的量(11.695ng·mL-1)极显著高于小腔卵泡单独培养组和其他共培养组(P<0.01),小腔卵泡与卵泡膜细胞共培养5d后,小腔卵泡分泌的孕酮的量高于小腔卵泡单独培养组(P<0.05);小腔卵泡与卵巢皮质间质细胞、髓质间质细胞以及与卵泡膜细胞共培养5d后,其卵母细胞特异性分泌因子gdf9基因和bmp15基因表达显著上调(P<0.01);与卵巢间质细胞共培养5d后,小腔卵泡内卵丘细胞和卵母细胞抗凋亡基因表达上调(P<0.05),小腔卵泡内卵丘细胞和卵母细胞抗凋亡基因表达下调(P<0.05)。表明卵巢间质细胞促进小腔卵泡的生长以及类固醇激素如雌二醇和孕酮分泌,促进小腔卵泡内卵母细胞特异性分泌的生长因子(gdf9和bmp15)基因的表达,同时抑制小腔卵泡的凋亡。尤其是卵巢卵泡膜细胞与小腔卵泡共培养后明显提高小腔卵泡的抗凋亡能力。

波尔山羊供体和受体异地饲养鲜胚移植研究

为了进一步扩大良种波尔山羊的推广,提高胚胎移植效率,该文就饲养在不同牧场间的供体和受体实现鲜胚移植进行了系统研究,得到了以下结果:①供体运输1 h、2~3 h、】4 h、0 h(对照)收集胚胎,分别得到可用胚胎数为15.8枚±4.3枚、13.0枚±5.7枚、13.8枚±6.6枚和14.2枚±6.3枚,不同运输时间回收可用胚胎数之间无显著性差异(P】0.05)。回收可用胚胎移植后,受体妊娠率分别为71.6%、67.6%、76.7%和80.7%,胚胎成羔率分别为74.1%、67.2%、69.9%和71.5%,供体不同运输时间回收胚胎移植妊娠率和胚胎成羔率无显著差异(P】0.05)。②胚胎在20℃,36.5℃和38.5℃运输2 h后移植,受体妊娠率分别为42.0%、64.5%和66.7%,胚胎成羔率分别为41.7%、63.6%和66.7%。20℃运输胚胎受体妊娠率和胚胎成羔率显著低于36.5℃和38.5℃下运输胚胎(P【0.01);胚胎在36.5℃分别运输0.5h、1h、2h后移植,受体妊娠率分别为72.5%68.7%和64.9%,胚胎成羔率分别为69.1%、67.8%和63.0%,受体妊娠率和胚胎成羔率之间无显著性差异(P】0.05)。③受体在手术前2~4h通过卡车运输到另一畜牧场,运输时间分别为0.5 h、1 h、≥2h,胚胎移植后受体妊娠率分别为61.2%、49.6%和42.0%。随着受体运输时间的延长,受体妊娠率呈下降趋势,运输时间超过2 h的妊娠率显著低于运输0.5 h的妊娠率(P【0.05)。胚胎成羔率分别为60.9%、45.6%和32.0%,随着受体运输时间的延长,胚胎成羔率显著下降(P【0.05或P【0.01)。从以上研究得出以下结论:山羊供体和受体饲养在不同饲养场,欲进行鲜胚移植,选择供体运输是最好的方法,其次为胚胎运输后移植。受体运输对胚胎移植效果(即受体妊娠率及胚胎成羔率)均有不利影响,不宜在生产中采用。

腺病毒介导O型口蹄疫病毒VP1基因在关中奶山羊乳腺上皮细胞中的表达

构建O型口蹄疫病毒抗原表位VP1的重组腺病毒载体,并在体外和体内培养试验中检测腺病毒介导VP1的表达。利用PCR技术,从原始质粒中扩增VP1基因片段,双酶切后连接载体构建重组穿梭质粒pHBAd-MCMVVP1-GFP,并经磷酸钙沉淀法携带骨架质粒按比例转染HEK293A细胞,获得P1代腺病毒颗粒,经多轮扩增后进行浓缩纯化,获得复制缺陷型腺病毒颗粒,测定病毒滴度。进行体外感染乳腺上皮细胞,通过GFP的荧光表达量确定最佳感染复数。然后用RT-PCR和Western blotting检测感染的乳腺上皮细胞中抗原表位VP1的表达。进一步用纯化的腺病毒通过乳头滴定法感染羊乳腺组织,检测其乳汁中VP1的表达。结果显示,PCR、双酶切和基因测序等结果表明基因扩增和腺病毒载体构建正确,以其感染关中奶山羊乳腺上皮细胞和乳腺组织时,均可检测到VP1蛋白表达。结果表明,成功构建了含VP1基因的重组腺病毒载体,且能够介导VP1基因在体外和体内培养试验中有效表达,为进一步研究纯化分离的VP1蛋白的抗原性并提高抗原优化技术提供基础研究。

BoLA-Ⅰ类基因在牛体细胞克隆胚早期发育中的表达

体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚,采用实时荧光定量PCR的方法检测经典BoLA-I基因和非经典BoLA-I基因在MⅡ期卵母细胞及各期胚胎中的相对表达量。结果显示,BoLA-I类基因在在牛MⅡ期卵母细胞中的相对表达量显著高于其在其他各时期胚胎的相对表达量(P<0.05);BoLA-I类基因在牛SCNT胚和IVF胚中相对表达量随胚胎发育的变化趋势类似,随着第1次及随后的卵裂,经典BoLA-I、NC1、NC2基因mRNA的表达下降到极微的水平;NC3、NC4在整个发育阶段均表达很低甚至难以检测到它们表达。结果表明,本试验通过在体外制备及培养SCNT胚胎,初步建立BoLA-I类基因在其的表达模式,为BoLA-I类基因参与母胎免疫机制的研究奠定基础,为进一步寻找评估胚胎质量的标志物提供依据。