牛胚胎的体外生产技术

应用体外受精技术 ,可以有效地利用淘汰的高产奶牛和屠宰的青年母牛卵巢中的未成熟卵 ,大量、廉价地实验室生产胚胎。这对加速我国高产奶牛群和良种肉牛群的繁殖 ,是一项行之有效的胚胎工程技术。借鉴国外实验室生产牛胚胎的经验和根据我们实验室的实践 ,本文比较详细地叙述了体外受精牛胚胎 (试管牛 )的生产过程 ,包括卵母细胞的获得、培养、精子获能、体外受精以及受精后的胚胎培养、超低温冷冻保存与解冻后的胚胎移植等。

人骨髓间充质干细胞在成年大鼠脑内的迁移及分化

骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)是目前备受关注的一类具有多向分化潜能的组织干细胞 ,体外可以分化为骨、软骨、脂肪等多种细胞。因此 ,MSCs是细胞治疗和基因治疗的种子细胞之一。为了探索MSCs的迁移和分化趋势 ,为帕金森病 (Parkinsondisease,PD)的干细胞治疗提供理论和实验依据 ,本实验将体外扩增并转染增强型绿色荧光蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)的人骨髓MSCs注入PD大鼠脑内纹状体 ,观察了人骨髓MSCs在大鼠脑内的存活、迁移、分化以及注射MSCs前后大鼠的行为变化。结果表明 ,人骨髓MSCs在大鼠脑内可存活较长时间 ( 10周以上 ) ;随着时间的延长 ,MSCs迁移范围扩大 ,分布于纹状体、胼胝体、皮质以及脑内血管壁 ;免疫组化法检测证实MSCs在大鼠脑内表达人神经丝蛋白 (neurofilament,NF)、神经元特异性烯醇化酶 (neuron specificeno lase,NSE)以及胶质原纤维酸性蛋白 ( glialfibrillaryacidprotein ,GFAP) ;PD大鼠的异常行为有所缓解 ,转圈数由 8 86±2 0 9r/min下降到 4 87± 2 0 6r/min ,统计学分析P <0 0 5为差异显著。以上观察结果表明 。

人骨髓间充质干细胞体外扩增和向神经细胞定向诱导分化的研究

骨髓间充质干细胞（MSC）是一类存在于骨髓中的具有多向分化潜能的干细胞，在体外不仅可以分化为间充质类细胞，而且可以分化为非间充质类细胞。研究了人骨髓间充质干细胞的体外分离、扩增和向神经细胞的定向诱导分化条件。从骨髓中分离MSC，用MesenCult培养基进行纯化和扩增培养。每扩增一代，细胞数量增加约2－3倍，在体外扩增12代后扩增约4.6×10^4倍；诱导不同扩增代数的MSC向神经细胞分化，诱导后的细胞平均有80％以上呈现典型的神经元样表型。免疫组化法检测发现，神经元样细胞强表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶，组织化学法检测观察到神经元特有结构尼氏体，表明MSC在体外具有向神经细胞分化的潜能。

人脐血间充质干细胞体外扩增和向神经元样细胞定向诱导分化的研究

目的 探讨人脐血间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)的体外分离、纯化、扩增和向神经元样细胞的定向诱导分化条件。方法 无菌条件下采集正常人脐血 ,肝素抗凝 ,用相对密度为1.0 77的淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞 ,进而获得MSC。用MesencultTM 培养基进行纯化和扩增培养。用流式细胞仪检测MSC的表面标志。取扩增 2 ,5 ,8代的MSC分别向神经元样细胞诱导 ,免疫组化和组化法检测神经元样细胞特异性标志和结构。结果 脐血MSC每扩增一代 ,细胞数量增加约 2～ 3倍。 6 .6× 10 5个人脐血原代MSC在体外扩增 10代后获得 9.9× 10 8个细胞 ,扩增约 1.5× 10 3倍。流式细胞仪检测结果显示 ,脐血MSC不表达CD34 、CD1 1a和CD1 1b,强表达CD2 9,弱表达CD71 ,与骨髓MSC表面抗原特性一致。诱导后的细胞平均有 70 %左右呈现典型的神经元样表型 ,免疫组化法检测发现不同代数的MSC诱导后均表达神经丝蛋白 (neurofilament,NF)和神经元特异性烯醇化酶 (neuron specificenolase ,NSE) ;组织化学法检测可看到神经元特有结构尼氏体。结论 脐血MSC在体外有较强的扩增能力 ,能够向非间充质类细胞分化。