用疏水色谱法复性并同时纯化重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

目的:建立一种简单、快速复性并同时纯化大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的方法。方法:研究rhGM-CSF在疏水色谱(HIC)上的复性和纯化机理,并对固定相和流动相进行选择和优化,包括固定相配基、流动相中盐的种类、流动相pH值、流动相中还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的比例,以及流动相中尿素的浓度。结果:优化后的固定相为PEG600,流动相中的盐为(NH4)2SO4,流动相pH值为7.0,流动相中添加2.0mol/L尿素、1.8mmol/L GSH和0.3mmol/L GSSG。在优化条件下,HIC可使rhGM-CSF在分离纯化的同时得到复性,比活达1.58×107U/mg,纯度为95.7%,质量回收率为56.8%。结论:建立的疏水色谱复性和纯化工艺可简化操作步骤,缩短生产周期。