基因工程菌生产rhG-CSF发酵培养基的研究

在摇瓶中对工程菌DH5α pBV2 2 0生产rhG CSF的发酵培养基进行了研究 ,从几种常用的细菌培养基中筛选适合工程菌表达rhG CSF的M9培养基。利用正交试验优化出生产重组人rhG CSF的优化培养基配方 ,其中优化碳源含量为 2 %的葡萄糖 ,氮源为 2 5 %的酵母粉、3%的蛋白胨和 0 1 %的 (NH4) 2 SO4以及少量的无机盐。使用优化培养基可使rhG CSF的表达量达到33 8% ,比优化前提高了 48 9%。

纳豆激酶集成化分离技术

综述了纳豆激酶分离纯化技术的研究现状和发展趋势。通过对常规分离技术的分析,重点讨论了集成化分离技术的应用及其优势,包括集成化双水相分配技术、扩张床吸附技术以及耐盐性混合模式吸附技术等分离方法,并指出集成化分离技术在生产纳豆激酶以及其他活性蛋白方面,具有广阔的应用前景。

用重组大肠杆菌生产rhG-CSF高密度发酵的方法

目的 :优化重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)的生产工艺 ,了解菌体生长和产物合成规律 ,为rhG CSF的工业化生产提供依据 .方法 :以摇瓶发酵的研究结果为基础 ,在 5L发酵罐中 ,测定工程菌rhG CSF的生长曲线 ,根据在不同pH值、溶氧和诱导时机时工程菌生长的情况 ,研究重组大肠杆菌DH5(/pBV2 2 0生产rhG CSF分批补料培养的工艺条件 ,确定 5L发酵罐稳定的发酵工艺参数 .结果 :培养工程菌的优化条件为 :发酵前期流加 2mol/L的氢氧化钠控制pH值为 7.2 ,当开始诱导表达时 ,控制pH为 6 .8;溶氧水平控制在 5 0 %以上 ;选择菌体在对数生长中期A60 0nm值为 1 2 .0进行诱导表达 .在此优化的培养条件下 ,菌体A60 0nm值达到 (2 1 .3± 0 .9) ,细胞干质量可达 (1 2 .3± 0 .7)g/L ,细胞湿体积质量为 (4 3.8± 0 .9)g/L ,rhG CSF的表达量为 (4 1 .9± 1 .6 ) % .结论 :pH值。

同系物置换剂对反相色谱溶质保留行为的表征

以计量置换模型为根据，利用溶质的计量置换参数Ｚ，ｌｏｇＩ和溶剂表征参数ｊ研究了３种小分子同系物置换剂（有机溶剂） 对溶质色谱保留行为的影响。结果表明，随着同系物置换剂分子的增大，溶质的上述３ 种计量置换参数依次减小，并呈现出线性变化。从一个新的角度揭示了液相色谱中的同系物规律。此外，还比较了ｊ和Ｓｎｙｄｅｒ经验公式中的斜率Ｓ作为溶剂强度参数的可靠性和准确性。结果表明，ｊ

脲梯度体积排阻色谱复性并同时纯化rhSCF

目的:用脲梯度体积排阻色谱(SEC)复性并同时纯化在大肠杆菌中高表达的人干细胞因子.方法:采用脲梯度SEC,根据蛋白质与小分子物质分离过程的迁移速度不同的原理,在色谱过程中通过脲浓度的线性梯度洗脱方式脱除变性剂脲而达到蛋白复性并同时纯化.结果:用脲梯度SEC复性重组人干细胞因子(rhSCF)能够使复性蛋白的产率提高,色谱过程中洗脱长度、流速以及蛋白浓度的变化对蛋白复性效率都有不同的影响.结论:用脲梯度SEC复性rhSCF可以使复性产率提高,其质量回收率从35.2%提高到51.4%.

四氢糠醇对α-胰凝乳蛋白酶在液相色谱中复性效率的影响

用高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)研究了将四氢糠醇加入盐酸胍 (GuHCl)变性剂中或将四氢糠醇键合至硅胶基质时 ,对α 胰凝乳蛋白酶 (α Chy)复性效率的影响情况 ,并以α Chy的生物活性回收率对结果进行了表征。用尺寸排阻色谱 (SEC)与HPHIC的实验结果进行了比较 ,结果表明 ,四氢糠醇在变性剂中和键合至硅胶上时 ,均可提高α Chy的复性效率 ,但提高的程度不同。四氢糠醇在溶液中或在HPHIC固定相表面时具有辅助α Chy进行复性作用的机理可能是由于四氢糠醇与α Chy形成了复合物的形式。