Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析

建立了一种用非特异性酶链酶蛋白酶E(Pronase E)从糖蛋白上释放N-糖链的方法.以牛胰核糖核酸酶B(Ribo B)和鸡白蛋白(Chicken Albumin)为材料,用Pronase E代替N-糖苷酶F(PNGase F)释放N-糖链.当蛋白酶质量与糖蛋白质量比为1∶1时,得到只带一个天冬氨酸(Asn)的闭环N-糖链,称其为糖氨酸(gly-can-Asn),这样既为糖链引入了天然的-NH2活性基团,同时还保持了糖链原有的还原端闭环结构.以9-氯甲酸芴甲酯(Fmoc-Cl)为衍生试剂对解离后的糖氨酸进行衍生,采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI/MS)对Fmoc-Cl糖氨酸衍生物进行分析,建立了糖蛋白的Pronase E酶解、微量糖氨酸的Fmoc-Cl衍生以及糖氨酸衍生物的HPLC-ESI/MS分析方法,该方法保持了N-糖链的天然结构,便于以-NH2为功能基团进一步进行荧光标记、分离制备以及糖链与蛋白质的相互作用研究.

胡桃属植物分子系统发育和生物地理研究进展

胡桃属植物约有21种,在亚洲、欧洲和美洲均有分布,为间断分布类群。该属植物种质资源丰富,栽培历史久,具有重要的生物学意义和经济价值。综述胡桃属植物分子系统发育和生物地理方面的研究历史和进展,对美国白核桃及我国特有种麻核桃、野核桃和胡桃楸的归属及系统地位等有争议的问题进行分析,对该属植物遗传多样性、起源分布与进化历史方面的研究前景进行展望。随着分子生物技术的迅速发展,预计二代测序技术将成为研究非模式植物胡桃属系统发育和生物地理的有利工具。

环境·生物因子对番茄生长发育影响的研究进展

除了作为人类的营养来源外,番茄作为生物反应器等方面的研究日益深入,应用价值越来越受到人们的关注。因此,该研究综述了温度、水分、光照、空气、化学物质以及生物因子对番茄生长发育影响的最新研究进展,为番茄的人工栽培、种质改造及病虫害防治等工作提供参考。

东亚七筋姑的传粉生物学研究

以陕西镇坪化龙山地区的东亚七筋姑自然居群为对象,通过重力玻片法、套袋法和人工授粉对其进行连续的传粉生物学观察和研究,以明确其散粉规律和繁育系统.结果表明,东亚七筋姑的花期在五月中下旬,单花花期2～3d,整个花序的花期随花序大小的不同而异,一般为3～7d;东亚七筋姑为虫媒传粉,其访花昆虫大多为小型昆虫,主要种类有小型甲虫、蚁类和蝇类等;东亚七筋姑自花传粉是可育的,存在异花传粉,不存在无融合生殖,自然条件下结籽率为58%,人工异株异花授粉结籽率为82%.可见,东亚七筋姑的繁育系统为兼性异交类型,需要传粉者.

嗜金微生物研究概况

在广泛文献检索基础上,对嗜金微生物的种属、富集黄金的机理、工业应用价值及潜力进行了概述,为进一步对其开发利用提供科学资料。

糖组学研究技术进展

糖组学研究通常包括聚糖组的分离与纯化、糖链组的分离和富集糖链的结构解析和定量以及糖链的性质和功能研究。根据糖蛋白组、蛋白聚糖组和糖脂组生物化学性质的不同,可相应采用分步沉淀法、硼酸亲和法、二氧化钛法、亲和层析法、体积排阻法、凝胶过滤层析和柱层析法等进行分离与纯化,进而通过植物凝集素、亲水色谱和固相萃取等技术富集高纯度且特异性的糖链。通过凝集素芯片技术、各种生物质谱及其联用并辅以糖链的衍生化标记对糖链进行结构解析,并用同位素标记法和代谢标记法对糖链进行相对定量。最后,借助糖链结构解析软件工具及糖链相关数据库进行生物信息学分析,可对糖链的生物学功能进行更全面的解析。本文对复合糖的分离纯化、结构分析以及糖组生物信息研究方法进行了综述。

黑色花卉资源概况研究

在广泛检索文献的基础上,叙述了黑色花卉的概况,综述了其主要种类和利用价值,提供了深入研究开发此类植物资源的科学依据。

茯苓和茯苓皮水和乙醇提取物的利尿作用及其活性成分的分离鉴定

目的采用化学成分的提取分离与利尿活性评价相结合方法,寻找茯苓和茯苓皮利尿活性部位并确定活性部位的主要化学成分。方法口服给予生理盐水负荷正常大鼠不同剂量的茯苓和茯苓皮的水或乙醇提取物,记录6 h尿量,测定尿液的pH值及电解质Na+,K+和Cl-的含量,并采用色谱分离法对活性部位进行化学成分分离,用NMR法对分离的化学成分进行结构鉴定。结果与对照组相比,口服茯苓皮乙醇提取物150,300和600 mg·kg-1大鼠尿量分别增加29%,21%和42%(P<0.01),K+排泄量分别减少18%,22%和27%(P<0.01),各组Na+/K+比值均升高;600 mg·kg-1组大鼠尿液Na+排泄量显著增加14%(P<0.05);茯苓水提取物50,100和200 mg·kg-1,茯苓乙醇提取物62.5,125和250 mg·kg-1及茯苓皮水提取物75,150和300 mg·kg-1无利尿作用。化学成分提取与分离结果显示,茯苓皮乙醇提取物主要包含四环三萜类化合物茯苓酸、猪苓酸C、去氢土莫酸、3-表去氢土莫酸、去氢齿孔酸、齿孔酸和去氢齿孔酮酸等。结论茯苓皮乙醇提取物具有显著的利尿作用,其主要化学成分为四环三萜类化合物。

泽泻药理与毒理作用的研究进展

泽泻是中医临床常用的一味利水渗湿药,具有利水渗湿、泄热、化浊降脂等功效。在临床上,泽泻主要用于治疗水肿、小便不利、高血脂、肾结石等症,但同时也具有一定的毒性。该文在查阅相关文献资料的基础上,对泽泻的药理与毒理作用进行了总结,以期为泽泻的进一步研究及临床合理用药提供参考。

ISSR-PCR鉴别绞股蓝属7种植物

目的采用ISSR-PCR技术对绞股蓝属(Gynostemma B1.)绞股蓝G.pentaphyllum、五柱绞股蓝G.pen- tagynum、心籽绞股蓝G.cardiospermum、长梗绞股蓝G.longipes、喙果绞股蓝G.yixingense、疏花绞股蓝G.laxi- florum、广西绞股蓝G.guangxieme 7种药用植物进行DNA分子水平鉴定。方法CTAB法提取绞股蓝属植物总DNA,以57条ISSR引物进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果筛选出产物清晰稳定的14条引物,其中引物UBC-873与UBC-895具有较高的多态性条带比率,均可独立区分7种绞股蓝属植物。结论ISSR-PCR分析可有效区分鉴别常见绞股蓝属植物。

龙骨药材的鉴别及药学研究进展

在广泛检索文献的基础上,对龙骨药材的鉴别、龙骨的药学成分、药理作用及现代临床研究进行了概述,并探讨了龙骨的药学应用前景。结果表明,目前龙骨的临床作用研究主要集中在以下几个方剂:柴胡龙骨牡蛎汤、桂枝甘草龙骨牡蛎汤等,其他方剂则研究较少,对于龙骨单剂临床作用的研究还不够成熟。该研究为龙骨的深入开发利用提供了基础资料。

三棱黄酮提取及其抗HeLa宫颈癌成分的HPLC分析

以黑三棱科植物三棱(Sparganium stoloniferum)块茎饮片为材料,分别以水提醇沉、75%甲醇浸提、100%甲醇浸提、乙酸乙酯萃取4种方法制备三棱黄酮,通过比较不同黄酮提取物对HeLa细胞增殖活性的抑制效率,确定三棱黄酮抗癌有效成分的最佳提取方法,并进一步对三棱黄酮抗癌有效成分进行高效液相(HPLC)指纹图谱分析,以优化三棱黄酮抗HeLa宫颈癌有效成分的分析检测方法。实验结果显示,除乙酸乙酯萃取样品(n=6,P>0.05)外,其他制备方法所得三棱黄酮的主要成分相近,且在MTT及细胞骨架形态实验中均可显著(n=6,P<0.01)抑制所培养HeLa细胞株的增殖活性、诱导细胞的接触生长状态消失、微丝突触减少及细胞形态不规则改变,对HeLa细胞的增殖抑制作用强度依次为:水相浸膏>75%甲醇浸膏>100%甲醇浸膏;三棱黄酮水相浸膏与100%甲醇浸膏的HPLC指纹图谱共识别18个色谱峰,其中10个为共有峰,7个色谱峰表现为与抗癌活性相对应的含量变化。

胖大海药学研究概况

在广泛文献检索基础上,对胖大海的种属、成分、药理、毒理、临床应用及禁忌等方面进行了综述,为其进一步开发利用提供资料。

应用植物形态学和AFLP分子标记鉴别陕西漆树品种

应用植物形态学和AFLP分子标记,对陕西8个漆树栽培品种和6个野生居群进行了鉴别.结果表明:从26个形态性状中筛选出3个主成分,其中:第1主成分指标7个(第5小叶长/宽、花瓣长、花瓣宽、花丝长、花丝直径、花药长和宽)贡献率为30.383%;第2主成分指标5个(小叶数、复叶长、复叶柄长、第5小叶叶柄长、顶端小叶叶柄长)贡献率为19.321%;第3主成分指标2个(第5小叶顶角角度、顶端小叶顶角角度)贡献率为13.777%.筛选的8对AFLP引物组合,均可将漆树14个样品完全区分开.植物形态学和AFLP分子标记相结合,不仅可用于漆树不同品种及野生居群间的鉴别,而且可反映其相互间的亲缘关系.

不同光照强度和光质对铁线莲品种繁星(Clematis‘nelly moser’)不定芽诱导和生长的影响

以铁线莲品种繁星(Clematis‘nelly moser’)的带节茎段为材料,研究不同光照强度和光质对铁线莲不定芽繁殖的影响.以MS为基本培养基(含有0.2mg/L 1-萘乙酸和2mg/L 6-苄氨基腺嘌呤),设置光照强度梯度为0、500、2 000、3 000和4 000Lux的白光光照;用透明玻璃纸得到蓝(440nm)、绿(560nm)、红(650nm)3种光质,以白光为对照组,强度均为3 000Lux.结果表明:在光照强度为3 000Lux的白光光照下,不定芽的诱导效果最好,其诱导频率和每个外植体上不定芽的数量分别为100%和4.4,每个外植体上不定芽的平均高度为5.66cm,平均节数为4.6个;蓝光能够显著提高不定芽的诱导数量,是相同光强白光诱导数量的1.27倍,蓝光下不定芽SOD和CAT的最大值显著高于其它光质下的数值,且叶绿素a和b的比值最大.

美国黑核桃SSR反应体系优化

优化SSR-PCR反应体系是黑核桃(Juglans nigra L.)SSR基因鉴定和群体遗传等研究的基础。本研究通过对PCR反应中Mg2+浓度、牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)浓度、Taq聚合酶用量、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA量的组合以及PCR程序组合试验,确定了黑核桃SSR的最佳反应体系,即在10μL的PCR反应体系中,含10 ng模板DNA,0.1 mg.mL-1牛血清蛋白(BSA),0.25 mmol.L-1 dNTPs,1.5 mmol.L-1 Mg2+1μL 10XTaq DNA聚合酶反应缓冲液,0.5 U Taq聚合酶,1.0 mmol.L-1单对引物(0.5 mmol.L-13对引物)。SSR-PCR反应扩增程序为:94℃变性3 min;93℃变性15 s,50℃或者53.5℃退火1 min,72℃延伸30 s,32个循环;72℃后延伸10min,置4℃保存。利用此反应体系对黑核桃进行PCR扩增并电泳检测,其结果清晰、稳定、可靠,适合进一步对黑核桃群体遗传、基因型鉴定和分子生态研究。

藏药角茴香属植物药学研究概况

角茴香属主要有直立角茴香(H.erectum L.)、节裂角茴香(H.leptumHook.fet Thoms.)等,使传统的藏药植物。但其药用价值、临床应用有待于进一步深入研究。在广泛文献检索基础上,笔者对中药角茴香的化学成分、药理作用及临床应用等进展作了综述,为角茴香的利用提供了参考。

大腹皮药学研究概况

在广泛文献检索基础上,对大腹皮的药理作用、临床应用及应用注意事项等进行了概述。大腹皮具有多种明显的药理作用及药用价值,今后应该加强对其药理作用的研究,以研发出更多安全有效、质量易控的大腹皮新制剂。

三棱黄酮抗HeLa宫颈癌:降低分裂期细胞比率诱导细胞凋亡

目的:研究三棱的总黄酮(Rhizoma sparganii flavonoids,RSF)对HeLa宫颈癌细胞的毒理作用及其作用机制。方法:分别检测用含有质量浓度11.7～750μg/mL RSF的DMEM培养基培养时,组间HeLa细胞的增殖活性差异,通过免疫荧光技术、流式细胞术和核型分析方法分析RSF诱导HeLa细胞毒理的机制。结果:RSF含量高于188μg/mL的DMEM培养基可呈剂量性抑制HeLa细胞的增殖活性(P<0.01)、增加细胞凋亡小体的比率(P<0.01);与1%甲醇对照组相比,RSF-375(RSF含量为375μg/mL)与RSF-750(RSF含量为750μg/mL)药物组HeLa细胞的分裂(M)期细胞比率显著下降(P<0.01),细胞间的接触生长状态消失,体积增大;在本次实验中,RSF-375与RSF-750药物组HeLa细胞微管(a-tublin)细胞骨架形态的特异性免疫结果与对照组相比,细胞形态呈显著不规则状改变,微丝突触增多,表现为较高的迁移运动趋势。结论:RSF是三棱抗HeLa宫颈癌的有效成分,在本实验中,RSF可以通过干扰细胞有丝分裂相关的机制显著抑制HeLa细胞的增殖活性(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.01)。

基于电喷雾电离质谱的人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的N-糖链的定性定量比较

以培养的原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象,采用细胞裂解液提取总蛋白,用PNGase F酶解释放N-糖链,以微晶纤维素柱结合石墨碳柱纯化分离N-糖链,通过电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对N-糖链进行序列鉴定,以β-环糊精为内标对2种细胞系的N-糖链进行了定量比较分析.结果表明,在肝癌细胞系HepG2和正常细胞系L02中共检测到26种N-糖链,与L02相比,HepG2的大多数高甘露糖型糖链、唾液酸化糖链和岩藻糖基化糖链的数量都明显升高,其中有15种糖链在数量上具有极显著性差异(p<0.01),1种糖链具有显著性差异(p<0.05).本研究为进一步探索肝癌中各类N-糖链的表达特点及发现早期肝癌糖链标志物提供了参考.