银杏素促进成纤维样滑膜细胞中TRAF3蛋白的表达缓解类风湿关节炎

目的探究银杏素(ginkgetin)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的潜在机制。方法通过TNF-α刺激成纤维样滑膜MH7A细胞建立炎性细胞模型,用银杏素单独处理或分别与TNF受体相关因子3(tumor necrosis factor receptor-associated factor 3,TRAF3)的小干扰RNA(si-TRAF3)和p38激动剂茴香霉素共同处理,检测细胞增殖、凋亡、炎症因子白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β分泌、TRAF3蛋白表达和p38蛋白磷酸化水平。此外,建立CIA大鼠模型并给予口服银杏素,评估大鼠关节炎指数,足爪肿胀度和滑膜组织病理学,检测滑膜组织TRAF3表达以及TNF-α、IL-6和IL-1β水平。结果银杏素上调了TRAF3表达,抑制了MH7A细胞增殖及炎症因子分泌,促进凋亡,阻断p38 MAPK信号通路。而转染si-TRAF3或添加茴香霉素处理,可逆转银杏素对MH7A细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌以及p38 MAPK信号通路的调节作用。此外,银杏素治疗降低了CIA大鼠关节炎指数、足爪肿胀度以及TNF-α,IL-6和IL-1β分泌。结论银杏素能够上调TRAF3表达,阻断p38 MAPK信号通路,抑制MH7A细胞增殖和炎症因子分泌,促进凋亡,进而减轻CIA大鼠的关节症状。

氯喹通过阻断肿瘤坏死因子受体相关因子3自噬性降解抑制类风湿关节炎滑膜细胞活化

目的本研究探讨氯喹对类风湿关节炎滑膜细胞活化的抑制作用及其分子机制。方法TNF-α预刺激MH7A细胞建立类风湿关节炎滑膜细胞活化模型,检测氯喹对MH7A细胞增殖、促炎因子IL-6和CXCL10,以及对基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)MMP-2和MMP-9的影响。检测氯喹对MH7A细胞肿瘤坏死因子受体相关因子3(TNF receptor associated factor 3,TRAF3)表达和自噬的影响,采用siRNA干扰TRAF3表达,并采用自噬诱导剂雷帕霉素诱导细胞自噬,研究TRAF3在氯喹抑制滑膜细胞活化中的作用及其机制。结果氯喹有效抑制了MH7A滑膜细胞增殖,减少了IL-6和CXCL10分泌,并降低了MMP-2和MMP-9表达。氯喹不上调TRAF3表达,但可增加TRAF3蛋白含量,并介导了氯喹对滑膜细胞活化的抑制。氯喹可抑制细胞自噬,而雷帕霉素可降低TRAF3的蛋白水平,并拮抗氯喹对滑膜细胞活化的抑制。结论氯喹可通过抑制自噬性降解,增加细胞内TRAF3蛋白含量,并通过TRAF3抑制类风湿性关节炎滑膜细胞异常活化。

青蒿素联合氯喹治疗通过阻断NF-κB通路抑制胶原蛋白诱导性关节炎小鼠的炎症反应

目的 探究青蒿素联合氯喹对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)小鼠前爪厚度、促炎酶含量、巨噬细胞浸润和分化的影响以及作用机制。方法 小鼠注射牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型,随机分为CIA组、青蒿素(33.3 mg/kg)组、氯喹(33.3 mg/kg)组和联合治疗组(各16.7 mg/kg),健康小鼠作为对照组,每组8只。治疗组灌胃给药,CIA模型组和对照组给予相同剂量的生理盐水,连续灌胃18 d。记录各组小鼠前爪厚度和关节炎评分的变化,ELISA检测小鼠血清中的免疫球蛋白含量和炎症因子含量。实时定量PCR检测小鼠前爪组织以及巨噬细胞环加氧酶2(COX2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 CD86、 CD80、 CD163、精氨酸酶1(Arg1)、 CC趋化因子受体2(CCR2)、 CCR3、 CCR4、 CCR5、白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达;Western blot法检测小鼠前爪组织和RAW264.7巨噬细胞COX2、 iNOS、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞诱发炎症,将细胞随机分为LPS组、青蒿素(20μmol/L)组、氯喹(20μmol/L)组和联合治疗组(青蒿素5μmol/L,氯喹10μmol/L)组,未处理细胞为对照组,CCK-8法检测细胞活力。结果 与对照组相比,CIA组小鼠显著增加关节炎评分和前爪厚度,上调M1分化蛋白CD86和CD80 mRNA水平,但下调M2分化蛋白CD163和Arg1/iNOS mRNA水平以及酶COX2和iNOS mRNA和蛋白水平;药物单独以及联合治疗均降低炎症评分和前爪厚度,下调CD86和CD80 mRNA水平,但上调CD163和Arg1/iNOS mRNA水平和COX2和iNOS的mRNA和蛋白水平;LPS诱导的巨噬细胞细胞活力增加,药物处理后细胞活力降低。CIA小鼠前爪组织或LPS诱导的巨噬细胞的IL-6 mRNA水平、 p-STAT3和NF-κB p65的蛋白表达量均上调,治疗则均可逆转上述作用。结论 青蒿素联合氯喹的治疗效果优于药物单药治疗的效果;青蒿素联合氯喹通过阻断NF-κB通路缓解CIA小鼠关节炎。

和厚朴酚通过上调TRAF3表达对类风湿关节炎滑膜细胞活化的影响

目的研究和厚朴酚(HNK)对类风湿关节炎滑膜细胞(FLS)活化的抑制作用及其分子机制。方法将肿瘤坏死因子(TNF)-α处理MH7A细胞建立FLS活化模型,细胞外调节激酶(ERK)抑制剂MK-8353(MK)抑制ERK激活,siRNA干扰抑制肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)表达。采用CCK-8检测细胞增殖,ELISA检测白细胞介素(IL)-6和CXC趋化因子配体10(CXCL10)分泌情况,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、TRAF3和p-ERK蛋白表达,Real-time PCR检测TRAF3 mRNA表达。结果TNF+HNK组细胞增殖较CON组和TNF组明显降低,且IL-6、CXCL10分泌和MMP-2、MMP-9蛋白表达较TNF组明显降低(P<0.05)。与CON组和TNF组相比,TNF+HNK组TRAF3 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05)。si-TRAF3组TRAF3蛋白表达较si-CON组明显降低(P<0.05),TNF+HNK+si-TRAF3组IL-6、CXCL10分泌和MMP-2、MMP-9蛋白表达较TNF+HNK组明显升高(P<0.05)。与CON组和TNF组比较,TNF+HNK组p-ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.05),TNF+HNK+MK组p-ERK1/2、TRAF3蛋白表达明显低于TNF+HNK组(P<0.05)。结论HNK可能通过激活ERK信号通路引起TRAF3表达上调,进而抑制FLS活化。