类人胶原蛋白Ⅱ的离子交换吸附平衡研究

研究重组类人胶原蛋白Ⅱ(RHLCⅡ)在CM52树脂上的吸附平衡,考察pH值、NaCl浓度及温度对吸附平衡的影响。结果表明:当4.0<pH≤5.0时,随着pH值增大,吸附容量减小,解离系数Kd增大;当3.0≤pH<4.0时,随着pH值增大,吸附容量增大,解离系数Kd减小;随着NaCl浓度增大,吸附容量减小,解离系数Kd增大;温度对Langmuir方程参数的影响较小,温度每升高10℃,吸附容量增加3%左右,解离系数Kd的变化不显著。RHLCⅡ在CM52树脂上的吸附基本符合Langmuir方程,为离子交换法规模制备RHLCⅡ提供了理论依据。

响应面法优化一种新型类人胶原蛋白发酵培养基

目的借助于MINITAB统计学软件,采用Plackett-Burman设计和响应面优化法对基因工程菌Escherichia coliBL21发酵生产类人胶原蛋白的原始培养基进行优化研究。方法首先利用Plackett-Burman设计筛选出对类人胶原蛋白产量影响显著的3个因素,即葡萄糖甘油1∶4混合碳源、酵母粉和硫酸铵。在此基础上用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,找到后续实验的中心点。再利用Box-Behnken实验设计及响应面分析法进行回归分析,确定主要影响因素的最佳水平。结果优化后的3种主要影响成分为葡萄糖甘油1∶4,混合碳源12.24 g/L,硫酸铵7.12 g/L,酵母粉5.53g/L。结论方程拟合良好,优化后的培养基发酵产量经摇瓶和发酵罐验证,产量分别为5.91g/L和6.12g/L,较优化前分别提高了306%和296%。

阴离子交换法去除类人胶原蛋白中的内毒素

采用响应面法优化阴离子交换层析去除重组类人胶原蛋白(HLC)溶液中内毒素的工艺。利用单因素试验考察HLC质量浓度、NaCl浓度和pH值对内毒素去除率的影响,以内毒素去除率和HLC回收率为指标,对三因素进行中心复合设计,并经响应面法优化,分析得到二次多项式回归方程的预测模型。去除内毒素的最佳工艺条件为:HLC质量浓度0.95 mg/mL,pH值7.6,NaCl浓度50 mmol/L。在该条件下,内毒素的去除率及HLC回收率分别可达到97.92%和98.01%。

戊二醛聚合猪血红蛋白免疫学特性分析

目的阐明加弗氏佐剂条件下,戊二醛聚合猪血红蛋白(glutaradehyde polymerized porcine he-moglobin,pPolyHb)对不同种类动物的免疫原性,初步探讨pPolyHb与人、牛血红蛋白的抗原决定簇的异同。方法在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb多次皮下免疫小鼠、大鼠和兔子,间接ELISA法检测抗血清IgG滴度;免疫印迹法分别检测小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与猪、牛、人、小鼠、大鼠、兔子、pPolyHb和戊二醛聚合牛血红蛋白之间的交叉反应。结果在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb能够刺激动物产生较高滴度的IgG,不同种类的动物产生IgG滴度不同;小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与不同来源的血红蛋白之间的交叉反应有明显的差异。结论在有弗氏佐剂的条件下,pPolyHb有较强的免疫原性。但是,对不同种类动物免疫刺激的强弱不同;对不同种类的动物,pPolyHb刺激抗体产生的抗原决定簇可能大部分相同,但也有部分不同,由此产生的抗体也不同;pPolyHb与人和牛血红蛋白均有一些相似的抗原决定簇,但也有一些相互独立的抗原决定簇。

类人胶原蛋白-丝素蛋白血管支架的制备及性能表征

为了提高血管支架的力学性能,将生物相容性良好的新型生物材料类人胶原蛋白(基因工程技术、高密度发酵生产)与丝素蛋白以质量比9:1、7:3、5:5复合,采用真空冷冻方法制备管状血管支架。研究了不同配比血管支架材料的表面结构、表面元素组成、力学性能、降解和生物相容性。结果表明:当类人胶原蛋白与丝素蛋白的质量比为7:3混合时,类人胶原蛋白-丝素蛋白管状支架具有均匀的多孔结构,孔径为(60±5)μm,孔隙率达到85%以上;获得了较理想的力学性能:应变为50%±5%,应力为(332±16)kPa;具有相对慢的降解速率;提高了细胞的黏附与增殖,具有良好的生物相容性。

戊二醛聚合对猪、牛和人血红蛋白免疫学特性的影响

猪、牛、人血红蛋白或其相应的戊二醛聚合体分别经皮下或腹腔多次免疫小鼠,ELISA检测抗血清IgG滴度;免疫印迹法分别检测小鼠抗猪、牛、人血红蛋白或其相应的戊二醛聚合体IgG与猪、牛、人血红蛋白或其相应的戊二醛聚合体之间的交叉反应,探讨戊二醛聚合对不同种类血红蛋白免疫学特性的影响。结果表明:猪、牛、人血红蛋白的免疫原性均很弱,其相应的戊二醛聚合体免疫原性明显增强;猪、牛、人血红蛋白具有明显的抗原性差异;戊二醛聚合对这三类血红蛋白免疫学性质的影响完全不同,戊二醛聚合猪血红蛋白没有产生新的抗原决定簇,戊二醛聚合牛血红蛋白某些抗原决定簇被封闭,戊二醛聚合人血红蛋白形成了某些新的抗原决定簇。