静置培养MDCK细胞的生长及代谢动力学研究

为研究MDCK细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:MDCK细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖密度为53.8×104 upf·mL-1,倍增时间为24.2h;对数生长期Gluc和Gln的比代谢(消耗速率为-2.20 mg·(106cells·d)-1和-3.85μmol·(106cells·d)-1,Lac和NH4+的比生成)速率为2.25mg·(106cells·d)-1和2.22μmol·(106cells·d)-1。

酶解大豆蛋白的制备工艺研究及其在细胞培养中的应用研究

采用两种非动物源性蛋白酶水解大豆蛋白,以水解度为指标,对不同比例4种酶两两组合测试其水解度,选出水解最佳用酶;在单因素试验基础上,采用正交试验对酶解大豆蛋白的工艺条件进行优化,并将产物进行动物细胞的生长进行检测。结果表明:复合蛋白酶与碱性蛋白酶以等比例进行混合,其水解效果最佳;水解最佳工艺为:温度60℃、p H值7. 0和酶/底物(E/S)=1∶4(质量比),水解时间为4 h,其水解度为43. 7%。将酶解产物培养BHK-21细胞,并与Hypep1510进行对比,细胞生长状态良好,其细胞密度在120 h时最大,为3. 96×10~5cells/mL,与Hypep1510相比,最大细胞密度并无明显差异,其倍增时间为26. 2 h,高于阴性对照组与阳性对照组,且细胞形态基本未发生改变,表明酶解大豆蛋白所的产物能够缩短细胞倍增的时间,且具有一定的促细胞生长作用,为其在动物细胞大规模培养中的应用提供了理论依据。

甘肃省兰州地区贝类海鲜、蔬菜水果中诺如病毒污染监测分析

目的:掌握甘肃省兰州地区海鲜贝类、蔬菜水果等诺如病毒的污染状况,发现食品安全隐患。方法:于2017年6月—2018年3月间,在兰州地区批发市场、零售市场、超市随机抽取120个贝类、蔬菜、水果样品,基于Taq Man探针法原理,通过特异性引物、探针结合,采用实时荧光RT-PCR技术对样品进行了GI和GII基因型诺如病毒的检测。结果:诺如病毒总阳性率为4.17%,其中GI型诺如病毒基因不存在,均为GII型。结论:该研究对了解兰州地区贝类海鲜、蔬菜水果中诺如病毒污染状况,加强诺如病毒预防控制提供了科学依据。

悬浮培养型BHK-21细胞的生长规律和不同接种密度培养效果的研究

为探索悬浮培养型BHK-21细胞的生长规律和最佳接种密度,以3.0×105个/mL、4.0×105个/mL、5.0×105个/mL、6.0×105个/mL和7.0×105个/mL等5个接种密度培养了悬浮培养型BHK-21细胞,绘制了细胞生长曲线和活力变化曲线.结果显示,悬浮培养型BHK-21细胞生长曲线呈"S"型,接种培养前24 h细胞处于适应期,生长曲线上密度增长不大,期后细胞进入对数增长期,生长密度呈指数增长.以3.0×105个/mL和4.0×105个/mL接种培养的在120 h达到最大增殖密度,分别为4.65×106个/mL和5.59×106个/mL,倍增时间分别为26.9 h和26.7 h;以5.0×105个/mL、6.0×105个/mL和7.0×105个/mL接种培养的在96 h就达到最大增殖密度,分别为5.14×106个/mL、5.36×106个/mL和5.1×106个/mL,倍增时间分别为22.4 h、24.1 h和25.2 h.各组在培养的96 h以前细胞活力均在90%以上且变化较小,120 h和144 h时细胞活力开始下降,且接种密度越高活力下降越快.该细胞以4.0×105个/mL、5.0×105个/mL、6.0×105个/mL接种培养能达到较高培养密度,细胞生长快,且细胞峰值持续时间长.

静置培养BHK-21细胞生长及代谢动力学研究

为研究BHK-21细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养方法,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:BHK-21细胞生长曲线呈S型,最大增殖密度为50.3×104 upf·mL-1,倍增时间为21.1h;对数生长期Gluc和Gln的比消耗速率为-3.79mg·(106 cells)-1·d-1和-9.95μmol·(106 cells)-1·d-1,Lac和NH4+的比生成速率为2.81mg·(106 cells)-1·d-1和6.30μmol·(106 cells)-1·d-1。

我国新生牛血清^(60)Coγ-射线照射技术的研究现状

新生牛血清是医药生物技术产品重要的原辅材料,其质量是生物制品质量保证的重要环节,国内的新生牛血清用60Coγ-射线照射已有多年,但还没有形成统一的操作规范和技术标准.文章对我国新生牛血清60 Coγ-射线照射的现况进行了分析总结,同时呼吁有关部门加强监督管理和技术指导,使60Coγ-射线照射技术在新生牛血清中得到更规范的应用.

蛋白水解物在细胞培养中的应用研究

蛋白水解物即为蛋白在酶、酸、碱的作用下水解所得到的产物.蛋白水解物含有可变的侧链,这些侧链可以被分解为羧基、氨基、咪唑基及巯基等,而这些基团可以在动物细胞、微生物、昆虫细胞以及植物细胞中发挥特定的生理学作用.蛋白水解物的应用领域非常广泛,文章主要对蛋白水解物在动物细胞培养中的应用作了综述.

自噬相关蛋白参与抗病原感染机制的研究进展

细胞自噬(Autophage),是细胞在自噬相关基因(Autophagy—related gene,ATG)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。细胞自噬与细胞凋亡、细胞衰老相似,是十分重要的生物学现象,参与生物的发育、生长等多种生命过程。

兰州黑白花奶牛肾组织细胞系的建立

目的：通过体细胞分离培养和保存,在细胞水平上保存兰州黑白花奶牛的种质资源.方法：采用胰蛋白酶热消化分离培养兰州黑白花奶牛的肾组织细胞,传代扩大培养后液氮保存,对保存的细胞进行了复苏活力、形态、生长特性、微生物和内外源病毒因子检查.结果：保存的兰州黑白花奶牛肾细胞复苏活力达94%,生长良好,形态以梭形和上皮形为主,生长曲线呈近＂S＂型,最大增殖浓度3.89×105/ml,倍增时间为27.15 h,无菌、支原体和内外源病毒因子检查为阴性.结论：成功建立了兰州黑白花奶牛肾组织细胞系,使种质资源在细胞水平上得以长期保存.

环介导恒温扩增技术在食品检测中的应用

食品安全问题是每个人关注的问题,为了维护消费者的利益,提高生活质量,实现监管部门对食品质量的现场快速检测是十分有必要的。环介导恒温扩增技术以核酸为靶标进行有效扩增,具有高特异性、高灵敏度、快速且高效等特点,因此针对食品的快速检测具有一定的可操作意义。本文针对环介导恒温扩增技术的概要以及在食品领域的掺假问题、转基因成分的检测和食源性病原菌检测等方面进行了综述,以期为食品领域的现场快速检测提供一定的理论基础。

猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种猪的高致病性和高死亡率的疫病,给养猪业带来了严重损失,目前尚无特别有效的免疫预防措施,接种疫苗仍是预防本病的最重要措施。灭活疫苗安全但保护力低,弱毒活疫苗有散毒风险但是保护力相对较高,DNA疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗和基因缺失疫苗等新型疫苗研究都有较好进展。预防控制和消灭PRRS任重道远。

禽流感病毒H9N2与新城疫病毒在鸡成纤维细胞中共感染对病毒复制的影响

临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的复制情况进行了分析,设定以NDV和AIV共感染细胞后12和24h作为样品采集点,通过Western blot、间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测了两种病毒共感染与单独感染对病毒NP蛋白表达的相互影响。结果显示:Western blot分析表明共感染12和24h,NDV NP蛋白的表达分别下调了70.6%(P<0.001)和45.7%(P<0.001),AIV NP蛋白的表达分别下调了61.5%(P<0.001)和82.8%(P<0.001);免疫荧光分析显示共感染组细胞中NDV和AIV的NP蛋白丰度在感染12h时间点分别下调81.1%(P<0.001)和65.5%(P<0.001),24h时则分别下调41.2%(P<0.05)和47.4%(P<0.001);qPCR结果也证实共感染12和24h组NDV NP的mRNA表达水平分别下调了64.3%(P<0.001)和64.4%(P<0.05),AIV NP的mRNA表达水平分别下调了61.5%(P<0.001)和63.0%(P<0.001)。本研究证明AIV与NDV共感染在细胞水平上可引起病毒复制的相互抑制,为研究NDV和AIV共感染机制在细胞水平上奠定了基础。

病毒感染激活TLRs和RLRs介导的IFN信号通路研究进展

在病毒侵染机体的过程中,机体的多数组织器官可以高效产生干扰素。近些年的研究发现,能够有效识别病毒侵染机体过程中的相关模式分子(例如病毒复制中间产物双链RNA)的细胞受体是产生干扰素的主要感受器,这些细胞受体(例如Toll样受体和RIG-Ⅰ样受体)能够诱发一系列的信号级联反应,并且被激活的感受器可以启动干扰素相关基因的转录活性,从而产生特定的干扰素。值得注意的是,不同种类的病毒能够倾向性地去激活特定的细胞感受器,并且产生特定的信号转导通路。论文主要从Toll样受体和RIG-Ⅰ样受体的结构入手,讨论宿主细胞模式受体在干扰素抗病毒过程中行使的功能,并简单介绍干扰素在抗病毒过程中的信号级联反应。

BHK-21细胞库的建立及其生物学特性鉴定

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果显示,2个来源的BHK-21细胞系均呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体为21对,二倍体均占主体;外源质粒在该2株细胞系中能进行复制和表达。这可为开展BHK-21细胞系及口蹄疫疫苗的研究与开发提供基础理论依据和细胞资源。

Hi5-SF悬浮细胞系的建立及鉴定

从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进High Five细胞并对其进行驯化,获得无血清悬浮驯化株(Hi5-SF)。依据《中华人民共和国药典(2010年版三部)》对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外源因子及细胞致瘤性检测。结果发现,Hi5-SF细胞复苏活力76.3%,生长曲线呈"S"型,最大增殖密度可达3.50×10~6 mL^(-1),群体倍增时间为26.2h;细菌、真菌及支原体检查均为阴性;血细胞吸附试验、致细胞病变试验和特异性病毒荧光抗体结合物检查结果均为阴性;致瘤性检查结果也为阴性。说明该细胞株符合兽用疫苗生产用细胞质量要求,可以在疫苗研究与生产中应用。

我国BHK-21细胞悬浮培养生产口蹄疫疫苗的进展

口蹄疫疫苗生产中应用BHK-21细胞悬浮培养技术比转瓶贴壁培养在产量和质量上均有优势,该技术也已全面应用于我国口蹄疫疫苗生产中.悬浮培养技术中悬浮细胞株的驯化,个性化培养基开发和生物反应器高密度培养工艺是疫苗生产工艺的关键因素,也是未来研究的主要方向.

流感疫苗的研究进展

流感是一种严重危害人类健康的传染病,目前接种传统的鸡胚灭活疫苗仍是预防流感的主要措施.近几年,生产工艺先进、副作用小的新型流感类病毒颗粒疫苗、重组活载体疫苗、病毒核酸疫苗和广谱疫苗的研究均有突破性进展,尤其基于MDCK细胞和Vero细胞等哺乳动物细胞培养的流感疫苗在欧美国家已经上市,有替代传统疫苗的趋势.

丙型肝炎病毒对ISG产物及干扰素的影响研究进展

哺乳动物通过启动细胞内的先天免疫反应来抗击丙型肝炎病毒(HCV)的侵袭和复制。天然免疫防御系统的特点是可以通过病原体识别受体信号介导抗病毒基因产物的表达,包括干扰素和干扰素刺激基因的产生以及感染部位其他促炎细胞因子的分泌来抗击HCV的感染。HCV在人体内持续感染的能力与病毒克服宿主免疫系统的逃避机制有关,HCV还可抵御干扰素治疗的抗病毒反应。对HCV与宿主相互作用的研究揭示了HCV逃避宿主的免疫调节及宿主对HCV免疫调控的机制。论文主要论述在感染HCV的过程中ISG产物的抗病毒作用、HCV对干扰素上、下游的影响及病毒对宿主的逃避机制。

蛛丝蛋白基因重组表达研究进展

蛛丝是一种具有特殊蛋白序列结构和超强收缩性能的天然蛋白纤维,有独特力学性能和实用价值的高性能生物材料。本文概述了蛛丝蛋白的理化性能、力学性能、分子基础和基因重组表达的研究进展。

60Coγ-射线辐照新生牛血清对BHK21培养细胞的影响

目的:研究新生牛血清(newborn calf serum NBCS)γ-射线辐照后对BHK21细胞培养的影响。方法:用20kGyγ-射线辐照NBCS后培养BHK21细胞,通过连续传代培养和低密度生长曲线比较辐照前后的细胞生长效果。结果:NBCS辐照后连续传代培养10代,每代细胞生长良好,48 h内形成致密单层,与辐照前没有明显区别。NBCS辐照前后低密度培养BHK21细胞第5代平均最大增殖密度为51.35×104/ml、51.20×104/ml、倍增时间21.89 h、22.59 h;第10代为52.25×104/ml、52.73×104/ml和21.95 h、21.62 h,生长曲线基本一致。结论:NBCS 20kGyγ-射线辐照后不影响BHK21细胞的培养效果。