同种异体移植物处置方法影响犬前交叉韧带重建术后腱骨愈合界面的骨重塑

背景:使用同种异体移植物进行前交叉韧带重建手术后的腱骨愈合过程复杂,愈合不良易导致隧道扩大。术前移植物的处理过程可能对腱骨愈合存在一定影响,但是具体情况并不清楚。目的:探讨同种异体移植物术前处置方法对韧带重建术后腱骨愈合过程中骨重塑的影响。方法:取32只雄性比格犬,建立双侧后膝前交叉韧带断裂模型后,采用抛硬币法随机分4组进行前交叉韧重建手术:A组以新鲜自体跟腱为移植物,B组以新鲜同种异体跟腱为移植物,C组以γ射线辐照后低温冷藏的同种异体跟腱为移植物,D组以冻干后经γ射线辐照的同种异体跟腱为移植物,每组8只。术后3,6个月取股骨-移植物-胫骨复合体,行Micro CT扫描和组织切片破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶染色,扫描图像进一步行骨微观结构参数测量,并建立3D骨隧道模型测量隧道面积。结果与结论:(1)Micro CT扫描:术后3个月,D组连接密度、骨小梁数量、骨小梁厚度、骨体积与总体积比值及结构模型指数均低于A、C组(P<0.05),骨小梁分离度高于A组(P<0.05);B组接密度、骨小梁数量及结构模型指数均低于A组(P<0.05),骨小梁分离度高于A组(P<0.05),骨体积与总体积比值低于A、C组(P<0.05)。术后6个月,D组连接密度、骨小梁数量及骨体积与总体积比值均低于A组(P<0.05),骨小梁厚度及结构模型指数均低于A、C组(P<0.05),骨小梁分离度高于A组(P<0.05);B组连接密度、结构模型指数低于A组(P<0.05),骨小梁厚度低于A、C组(P<0.05),骨小梁分离度高于A组(P<0.05);(2)抗酒石酸酸性磷酸酶染色:与A组相比,B、D组破骨细胞染色更深且数量更多;C组破骨细胞在形态和数量上类似于A组,体积偏小且着色偏淡;(3)隧道面积:相同时间点下,D组股骨与胫骨隧道扩大程度最大;B组术后3个月的股骨隧道内口、术后3,6个月的股骨隧道内口与中部面积均大于A组(P<0.05),术后3,6个月的胫骨隧道内口面积大于A组(P<0.05);(4)结果显示:前交叉韧带重建术后腱骨愈合过程中骨隧道扩大现象普遍存在,移植物处置方法通过影响腱骨界面破骨细胞介导的骨吸收导致骨微观结构的改变,从而干预腱骨愈合过程中的骨重塑。

枸杞多糖对HepG2肝癌细胞自噬与细胞凋亡的影响

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对HepG2细胞自噬与凋亡的影响。方法体外培养HepG2肝癌细胞株,CCK-8法检测0、200、400、800 mg/L的LBP分别培养24、48、72 h后对细胞增殖的影响。将实验对象分为:对照组、LBP组、3-MA(3-甲基腺嘌呤)组和LBP+3-MA 4组。GFP-LC3腺病毒感染HepG2细胞,荧光显微镜观察各组自噬小体的绿色荧光颗粒的变化;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的变化。结果 LBP对HepG2细胞生长具有明显抑制作用;LBP组GFP-LC3荧光颗粒数目明显高于对照组(P<0.01);3-MA+LBP组荧光颗粒数目比LBP组明显减少(P<0.05);3-MA组和对照组相比较数目无明显变化(P>0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡率,LBP组的凋亡率明显高于对照组(P<0.05),明显低于3-MA+LBP组(P<0.05),二者具有统计学差异;3-MA组与对照组凋亡率比,二者无统计学差异(P>0.05)。结论枸杞多糖抑制HepG2细胞的增殖,并诱导细胞发生自噬和凋亡。LBP诱导的自噬作用对肝癌细胞的凋亡起保护作用,促进肝癌细胞的增殖。

枸杞多糖抑制SMMC-7721肝癌细胞的VEGF表达、迁移与侵袭

目的研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对SMMC-7721肝癌细胞迁移、侵袭影响的机制。方法运用MTT法检肝癌细胞SMMC-7721的增殖率,Transwell检测细胞的迁移力和侵袭力,应用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)小分子干扰RNA沉默VEGF表达,转染pcDNA 3.1-VEGF过表达VEGF,Western blot和qRT-PCR检测VEGF、MMP-2和MMP-9表达。结果 LBP(100、200、400μg/ml)处理可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制MMP-2、MMP-9和VEGF表达;沉默VEGF可降低SMMC-7721细胞迁移、侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9水平,过表达VEGF可逆转LBP对SMMC-7721细胞迁移和侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9水平的抑制作用。结论枸杞多糖可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与直接抑制VEGF有关。

不同基因突变的中国原发性血小板增多症患者临床特征及骨髓病理学特点

目的:探讨CALR、JAK2、MPL不同基因突变原发性血小板增多症(ET)患者的临床特征、实验室及骨髓病理学特点。方法:2015年1月-2017年12月于我院确诊的ET患者120例,其中JAK2基因突变76例,CALR基因突变40例,MPL基因突变2例,3基因突变阴性患者2例.比较JAK2基因突变ET与CALR基因突变ET临床及实验室特点,采用Nikon cclipsc显微镜进行病理切片观察,每个病理切片取10个不同高倍视野进行巨核计数,巨核细胞集簇数并测量每个高倍视野最大巨核细胞直径。结果:ET患者中,CALR突变组与JAK2突变组相比较,白细胞数、血红蛋白水平均明显降低(P=0.001,P=0.001),男性血小板数明显升高(P=0.04);每高倍镜视野中巨核细胞平均值明显降低(P=0.001),平均巨核细胞集簇数明显减少(P=0.001)。CALR突变组血栓事件显著低于JAK2突变组(7.5%vs 18.4%)(P=0.03)。结论:中国ET患者中,CALR基因突变者较JAK2基因突变者临床特征和血液病理改变存在差异,临床意义值得探索。

标准化病人的培训及其在临床教学与考核中的应用

为了满足现代医学生的培养目标,结合我院情况,探讨标准化病人(Standardized Patient,SP)作为患者、评估者和指导者所采取的培训形式,将标准化病人应用于临床教学、临床技能训练及考核中,达到提高学生临床思维能力、临床技能及沟通技巧的目的。

乳腺癌患者血清miR-135b、miR-194表达量与肿瘤恶性增殖及侵袭的相关性分析

目的探讨乳腺癌患者血清中miR-135b与miR-194的表达量,并与肿瘤的恶性增殖与侵袭进行相关性分析。方法选择2018年9月至2019年6月进行手术切除的乳腺癌患者40例,收集乳腺癌患者手术切除的乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及患者进行手术之前的血清标本,同时选取同时期进行体检的健康者40例并收集血清。采用RT-PCR法检测乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中miR-135b、miR-194、YAP1、Piwil2、EZH2、Rab11、TUG1、Gli1基因的表达量,以及乳腺癌患者、健康者血清中miR-135b、miR-194的表达量,Pearson分析乳腺癌患者血清与乳腺癌组织内miR-135b、miR-194表达水平的相关性。结果乳腺癌组织中miR-135b、YAP1、Piwil2、EZH2、Rab11、TUG1、Gli1基因的表达量均高于癌旁正常乳腺组织,而miR-194表达量低于癌旁正常乳腺组织(P<0.05);乳腺癌患者血清中miR-135b的表达量高于健康者,而miR-194表达量则低于健康者(P<0.05);乳腺癌患者乳腺癌组织与血清中miR-135b、miR-194的表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论miR-135b在乳腺癌组织及患者血清中呈现高表达,而miR-194在乳腺癌组织及患者血清中呈现低表达,并且患者血清中miR-135b高表达、miR-194低表达能够显著增强乳腺癌组织的增殖、侵袭能力,临床能够通过检测血清中miR-135b、miR-194的水平判断乳腺癌发展进程。

黄芪多糖治疗对去卵巢诱导骨质疏松大鼠骨密度、骨量和骨代谢的影响

目的探索黄芪多糖对去卵巢大鼠骨量和骨代谢以及BMP-2/Smads信号通路的影响。方法30只雌性SD大鼠进行去卵巢手术或假手术。正常饲养12周后被分为黄芪多糖组(ASNT组)、对照组(CON组)和去卵巢组(OVX组),其中黄芪多糖组每天给予400 mg/kg黄芪多糖治疗。通过骨密度、骨代谢指标、Micro-CT以及WB检测评估ASNT对骨质疏松症大鼠骨量、骨代谢以及BMP-2/Smads信号通路的影响。结果经过12周治疗,ASNT组大鼠骨密度较OVX组显著增加(P<0.05);ASNT治疗12周可以降低血清ALP和OC水平,增加血钙含量,增加股骨骨密度。经过12周治疗,ASNT组大鼠骨体积分数(BV/TV)、表面积体积分数(BS/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)较OVX组显著增加;而骨小梁间隙(Tb.Sp)较OVX组显著降低,差异比较有统计学意义(P<0.05)。WB结果表明OVX大鼠骨组织的BMP-2/Smsds信号通路受到抑制;ASNT可以通过上调BMP-2、p-Smad1和p-Smad5的表达显著激活BMP-2/Smsds信号通路传导。结论研究表明ASNT对去卵巢大鼠骨密度和骨量具有保护作用,可能和激活BMP-2/Smads信号通路有关。

急性闭合性跟腱断裂28例患者的5年随访研究

目的通过5年随访研究比较开放治疗与经皮微创治疗对于急性闭合性跟腱断裂的疗效。方法对我院2010年9月至2012年1月期间完成的28例急性闭合性跟腱断裂手术治疗的患者进行了5年的随访观察。其中男21例．女7例。经皮微创缝合患者11例；开放缝合患者17例。分别于术后6个月、1年、2年、3年、4年、5年，使用AOFAS和ATRS评分进行随访评估，并进行统计学分析。结果随访时间为60～72个月，平均61．1个月。所有患者切口均获Ⅰ期愈合，无切Ⅵ相关并发症发生；没有发生跟腱再断裂的患者。两组患者术后6个月时开放组、经皮微创组ATRS评分分别为（81．23±3．99）分和（88．27±4．27）分，两组差异有统计学意义（P〈0．05）;术后2年以后．两组每年的评分差异无统计学意义（P〉0．05）。两组患者术后6个月时开放组、经皮微创组AOFAS评分分别为（69．00±6．23）分和（79．27±4．83）分，两组差异有统计学意义（P〈0．05）。术后1年时开放组、经皮微创组分别为（85．53±4．93）分和（89．90±3．38）分，两组差异有统计学意义（P〈0．05）。术后2年以后，两组每年的评分差异无统计学意义（P〉0．05）。结论不管使用经皮微创治疗急性闭合性跟腱断裂还是使用开放治疗．术后2年均没有明显的差别。但经皮治疗患者术后2年内的评分要高于开放治疗的患者。

枸杞多糖影响大鼠背部皮瓣存活的研究

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对大鼠背部任意皮瓣存活状态及术后炎性因子、凋亡因子的影响。方法取84只SD雄性大鼠,随机平均分成4组,在大鼠背部依照样布设计4.5 cm2的任意皮瓣。对照组术后采用生理盐水灌胃(LBP0组),实验组术后用200、400、800 mg/(kg·d)LBP灌胃,分别为LBP200、LBP400、LBP800组,持续时间为2周。记录各组大鼠皮瓣术后的一般情况,包括炎性渗出、水肿、皮瓣张力、皮温及坏死。各组分别于术后0.5、1、3、5、7、10及14 d随机选取3只大鼠测算皮瓣存活面积。切取皮瓣组织样本,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测皮瓣组织中TNF-α、Caspase-3因子的mRNA表达。结果大鼠背部任意皮瓣造模后3 d,各组皮瓣创面均可见不同程度渗血及肿胀,部分皮瓣逐步出现暗红至青紫,术后7 d皮瓣坏死逐渐显现,术后10 d坏死边界渐清晰,术后2周坏死区域结痂翘起。各组大鼠术后1周内,皮瓣存活面积差异无统计学意义(P>0.05)。术后3 d,LBP800与LBP0组相比,TNF-α因子mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),且在术后10 d差异更明显(P<0.01)。术后5 d,LBP400与LBP0组相比,TNF-α因子mRNA表达量也存在差异(P<0.05);LBP800与LBP0组相比,Caspase-3因子mRNA表达量存在差异(P<0.05),且术后14 d两组差异更明显(P<0.01)。术后7 d,LBP400与LBP0组相比,Caspase-3因子mRNA表达量存在明显差异(P<0.05)。结论适宜浓度的LBP干预可显著降低皮瓣炎性反应因子及凋亡因子的mRNA表达,有助于降低皮瓣组织坏死的风险,改善皮瓣存活微环境。

腓肠神经营养皿管皮瓣联合外固定架治疗小腿GustiloⅢ型骨折15例体会

目的观察腓肠神经营养血管皮瓣联合外固定架在治疗小腿开放性骨折中的临床效果。方法2015年1月至2016年11月．应用腓肠神经营养血管皮瓣联合外固定架治疗小腿开放性骨折患者15例．其中GustiloⅢA型4例，GustiloⅢB型11例；小腿中上段6例，小腿中下段9例。一期急诊手术有限清创，修复血管、神经、肌腱，骨折临时固定，有限清除部分失活组织，待创面范围确定，二期行腓肠神经营养血管皮瓣覆盖创面，皮瓣切取面积为7．0cm×4．0cm～16．0cm×10．0cm，术后予以抗感染、抗凝、换药、功能锻炼等治疗，定期进行随访。结果术后随访10。24个月，平均16．2个月。开放性骨折断端对位及力线维持良好。骨折正常愈合．平均愈合时间为6．8个月；15例皮瓣术后成活良好，1例术后皮瓣远端因静脉回流障碍。反复出现张力性水泡．皮缘发黑、坏死，后期经游离皮片移植后创面痊愈。所有患者后期均未见骨髓炎形成．皮瓣无溃疡及慢性渗出。后期患肢功能和感觉恢复良好。结论应用腓肠神经营养血管皮瓣联合外固定架分期治疗小腿GustiloⅢ型骨折，皮瓣修复距离长、范围大，术后骨折愈合良好，可以取得良好的临床效果。

二次电切在非肌层浸润性膀胱癌中的临床研究进展

膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,经尿道电切术是非肌层浸润性膀胱癌的标准治疗方式,但经典的经尿道对肿瘤的碎片状电切,存在低估分级分期、诊断欠准确等缺陷,影响患者的治疗及预后,而二次电切提供了一种进一步准确诊断的选择。本文从二次电切概念的提出及近年来国内外相关的临床进展进行了综述,旨在提高对二次电切的认识,指导患者治疗。