壳聚糖支架复合重组人成骨蛋白1对体外培养兔髓核和纤维环细胞蛋白聚糖合成的影响

背景:成骨蛋白1有效刺激软骨细胞蛋白聚糖和胶原蛋白合成已被证实,椎间盘内注射成骨蛋白1可增加椎间盘高度也在动物模型中得到证实。目的:体外评价重组人成骨蛋白1对培养于壳聚糖凝胶中的兔椎间盘细胞增殖和蛋白聚糖合成的作用。设计、时间及地点:成组设计,实验于2007-08/2008-02在北京军区总医院骨科实验室完成。材料:清洁级4月龄日本大耳兔5只。重组人成骨蛋白1为Sigma分装。医用级壳聚糖,脱乙酰度95.11%,黏度155mPa.s,Mr870000,由北京纵横洋洲医药生物科技有限公司提供。方法:无菌条件下取日本大耳兔椎间盘10个,分离其髓核和纤维环细胞并接种于自制壳聚糖凝胶支架,在培养液中加入重组人成骨蛋白1,并分为3组:对照组(无重组人成骨蛋白1)、100μg/L重组人成骨蛋白1组、200μg/L重组人成骨蛋白1组。主要观察指标:培养7,14,21d时对培养物DNA含量、蛋白聚糖合成量(35SO42-摄入量、硫酸盐黏多糖含量)进行检测。结果:100,200μg/L重组人成骨蛋白1组的DNA含量没有减少,对照组DNA含量逐渐下降。100,200μg/L重组人成骨蛋白1组蛋白聚糖合成量明显高于对照组,200μg/L重组人成骨蛋白1组升高更为显著。100,200μg/L重组人成骨蛋白1组在3个时间点均呈现上升趋势,培养14d和21d的差异有显著性意义(P<0.001)。结论:重组人成骨蛋白1可有效促进体外培养的兔髓核和纤维环细胞增殖及蛋白聚糖合成。