伪狂犬病毒PK/gG/GFP重组转移载体的构建和表达

在构建了含伪狂犬病毒(pseudorabiesvirus,PRV)湖北株部分PK基因和gG基因转移载体的基础上,利用平端连接的方法将绿色荧光蛋白(GFP)的基因表达盒插入到缺失的部分,并在下游引入了1个多克隆位点,构建了重组转移载体KGDF.用限制性内切酶鉴定重组转移载体KGDF.根据质粒EGFP C1中的GFP基因序列设计1对引物鉴定GFP表达盒插入的正确性.用脂质体转染试剂盒将KGDF和PRVHB的基因组或病毒共转染BHK 21细胞,在荧光显微镜下将出现病变的荧光斑挑出得到重组病毒.将重组病毒扩大培养后提取基因组鉴定重组病毒中的GFP基因,并通过挑取病变的荧光斑的方法纯化重组病毒.