DPEP1基因过表达BT549细胞株的建立和鉴定

目的探讨二肽酶1(dehydropeptidase-1,DPEP1)基因表达载体的构建及DPEP1蛋白在肿瘤细胞中的过表达情况及其影响。方法将DPEP1全长基因PCR扩增,EcoR Ⅴ和Nhe Ⅰ双酶切后克隆入带有同样双酶切pcDNA5/FRT/TO表达载体,并获取pcDNA5/FRT/T0/DPEP1,筛选阳性克隆,Sanger测序确证。扩增pcDNA5/FRT/T0/DPEP1质粒并将其转染入BT549细胞系,获得DPEP1过表达,借助Western blot、CCK-8等实验技术分析其表达及影响作用。结果成功构建了DPEP1的过表达载体,转染肿瘤细胞株,并获得DPEP1过表达蛋白,目的蛋白表达明显升高,其过表达的条带灰度约为阴性对照的20倍。结论研究的成功实施为将来阐明DPEP1基因在肿瘤中的作用及机制奠定了实验基础。