Dickkopf相关蛋白1对自发性高血压大鼠尿钠排泄的作用及机制

目的探讨Dickkopf相关蛋白1(Dickkopf-related protein 1,DKK1)在高血压中的作用及对尿钠排泄功能的影响。方法 8~10周龄雄性正常血压大鼠(Wistar-Kyoto rats,WKYs;190~210 g)、雄性原发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs;190~210g)各12只,采用Western blot检测WKY和SHR大鼠肾脏DKK1和β-catenin蛋白表达。采用完全随机的方法,将12只WKY大鼠分成WKY+DKK1组和WKY对照组(n=6)、12只SHR大鼠分成SHR+DKK1组和SHR对照组(n=6);WKY+DKK1组和SHR+DKK1组微泵泵注重组蛋白DKK1[6 ng/(g·d)]。使用无创鼠尾测压仪测血压;代谢笼收集24 h尿量;计算24 h尿钠排泄情况,并用体质量校正。采用Western blot检测肾近端小管上皮(renal proximal tubule epithelial,RPT)细胞(WKY-RPT和SHR-RPT细胞)内DKK1和β-catenin蛋白表达;重组蛋白DKK1、DKK1 siRNA(siDKK1)和β-catenin信号抑制剂(inhibitor ofβ-catenin-responsive transcription,ICRT 14)、GSK3β抑制剂(6-bromoindirubin-3′-oxime,BIO,)干预细胞后,检测DKK1、β-catenin表达或钠-钾-ATP酶活性变化。结果 SHR大鼠肾脏DKK1表达水平较WKY大鼠低,而β-catenin升高(即Wnt/β-catenin激活);SHR+DKK1组与SHR组相比,在埋泵术后第2周大鼠收缩压显著下降[(145.21±2.83)vs(156.07±3.08) mmHg,P<0.05],24 h尿量增加[(37.40±3.76)vs(27.24±2.30)mL/kg,P<0.05],24 h尿钠排泄增多[(0.79±0.09)vs(0.51±0.09)mmol/kg,P<0.05]。WKY+DKK1组与WKY组间差异均无统计学意义。SHR-RPT细胞DKK1表达低于WKY-RPT细胞,而β-catenin升高;改变DKK1含量引起β-catenin改变(即Wnt/β-catenin通路活性改变)从而影响钠-钾-ATP酶活性,且钠-钾-ATP酶活性与DKK1呈负相关。结论 DKK1至少部分通过抑制Wnt/β-catenin通路降低钠-钾-ATP酶活性,促进尿钠排泄降低血压。