高迁移率族蛋白B1/Toll样受体9途径在重症急性胰腺炎肠黏膜屏障损伤中的作用及机制分析

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体(TLR) 9信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)小鼠肠黏膜屏障损伤中的作用机制。方法将20只KM小鼠随机分为对照组和SAP组,每组10只。SAP组小鼠采用雨蛙素及脂多糖联合腹腔内注射建模,12 h后取材。HE染色观察小鼠胰腺病理学变化; ELISA检测小鼠血清二氨氧化酶(DAO)和内毒素核心抗体(Endo CAb)水平; TUNEL法检测小鼠小肠黏膜凋亡变化; Western Blot检测各组小鼠小肠HMGB1、TLR9、NF-κB蛋白水平的变化。计量资料2组间比较采用t检验。结果 SAP组小鼠均造模成功。SAP组小鼠血清DAO和EndoCAb水平明显高于对照组,差异有统计学意义(12. 172±1. 356 vs 4. 341±0. 521、32. 480±3. 054 vs 13. 281±2. 105,t值分别为16. 613、14. 725,P值分别为<0. 001、0. 025); SAP组小鼠小肠黏膜细胞凋亡较对照组明显增加,差异有统计学意义(6. 25±2. 10 vs 19. 54±3. 63,t=11. 582,P <0. 05); SAP组小鼠小肠HMGB1、TLR9、NF-κB蛋白表达水平较对照组均明显升高,差异均有统计学意义(0. 590±0. 004 vs 0. 059±0. 035、0. 530±0. 043vs 0. 070±0. 023、0. 670±0. 059 vs 0. 170±0. 032,t值分别为47. 336、30. 565、23. 655,P值分别为0. 001、0. 034、0. 014)。结论 SAP小鼠小肠HMGB1表达水平升高,其可能通过激活下游TLR9信号通路,在SAP肠黏膜屏障损伤中发挥重要作用。

miR-9在阿魏酸钠改善缺氧缺血性脑损伤大鼠学习记忆中的作用

目的:探讨miR-9在阿魏酸钠(SF)改善缺氧缺血性脑损伤新生大鼠学习记忆中对海马神经元NMDAR1和NgR1的调节作用。方法:88只7日龄SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺氧缺血性脑损伤组(HIBD)、阿魏酸钠治疗组(HIBD+SF)、miR-9抑制组(HIBD+LNA-miR-9),每组各22只。假手术组仅分离左侧颈总动脉,其余组结扎左侧颈总动脉进行缺氧后制作HIBD模型。于21日龄,阿魏酸钠治疗组连续5 d腹腔注射阿魏酸钠,miR-9抑制组经左侧脑室注射一次LNA-miR-9。于30日龄行Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力。于26日龄,real time RT-PCR检测各组大鼠左侧海马神经元miR-9、NMDAR1mRNA和NgR1mRNA的表达,Western Blot检测NMDAR1和NgR1蛋白的表达。结果:Morris水迷宫实验显示:与假手术组比较,HIBD组逃避潜伏期延长(P<0.05)、在目标象限逗留时间缩短(P<0.05);阿魏酸钠治疗组、miR-9抑制组较HIBD组均有逃避潜伏期缩短(P<0.05)、在目标象限逗留时间延长(P<0.05)。real time RT-PCR、Western Blot检测显示:HIBD组NMDAR1和NgR1的mRNA和蛋白表达以及miR-9表达较假手术组均明显上调(P<0.05);阿魏酸钠治疗组、miR-9抑制组较HIBD组各指标均明显下调(P<0.05)。结论:阿魏酸钠可能通过下调miR-9来抑制NMDAR1和NgR1的表达从而改善缺氧缺血大鼠的学习记忆能力。

小肠平滑肌细胞线粒体损伤与重症急性胰腺炎大鼠肠道动力障碍的关系

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠线粒体损伤对肠道动力的影响。方法 SD大鼠20只,随机分为假手术组与SAP组。采用胰管逆行注射3.8%牛磺胆酸钠溶液制作SAP模型。造模48 h检测胰腺组织病理组织学改变及小肠推进率;透射电镜观察小肠平滑肌线粒体超微结构变化;检测小肠平滑肌组织匀浆Na^+-K^+-ATP酶活性;TUNEL检测肠道平滑肌细胞凋亡;Western-blot检测小肠caspase-3蛋白的表达。结果透射电镜显示SAP组大鼠小肠平滑肌细胞线粒体数量减少,肿胀、破裂明显,线粒体脊减少、消失;肌丝数量减少。与假手术组比较,SAP组大鼠小肠推进率下降明显(P<0.05),小肠平滑肌细胞Na^+-K^+-ATP酶活性显著降低(P<0.05),SAP大鼠小肠平滑肌细胞凋亡及caspase-3蛋白的表达明显增加(P<0.05)。结论 SAP大鼠小肠平滑肌细胞线粒体损伤导致的能量代谢障碍及细胞凋亡可能在其肠道动力下降中发挥一定的作用。

阿魏酸经BDNF-TrkB信号通路对围产期缺氧缺血后大鼠神经发生的影响

围产期缺氧缺血脑损伤(HIBD)是新生儿面临的一大挑战,是导致其神经系统损伤的主要原因之一,具有高致残率和致死率。前期研究证明,当归注射液的主要成分阿魏酸可明显抑制神经炎症和神经细胞的凋亡坏死。BDNF是一种广泛分布于中枢神经系统,对调节神经的发育有重要作用的蛋白质。酪氨酸激酶受体(TRKs)是BDNF的特异性受体。研究证实,BDNF发挥其神经生理作用是由其细胞表面TrkB受体的激活介导的,但阿魏酸是否通过BDNF-TRKs信号通路,改善缺氧缺血后神经发生的具体机制还未有研究,本课题组将7日龄SD大鼠120只随机分成4组:假手术组、HIBD组、阿魏酸治疗组,外源性BDNF干预组,每组30只。

愤怒诱导大鼠肝损伤中内质网应激相关蛋白的表达

目的:研究慢性愤怒诱导的大鼠肝损伤中内质网应激(ERS)相关蛋白的表达。方法:选择20只雄性SD大鼠,随机分为两组,各10只。实验组大鼠予应激刺激造模,对照组正常饲养,2周后同时处死两组大鼠。检测肝脏形态学变化及肝组织中GRP78、Caspas-3、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组相比,实验组可见肝细胞肿大、胞质疏松化、气球样变,胞核染加深、明显缩小伴嗜酸性变,肝小叶结构紊乱伴中央静脉缺如。实验组GRP78、Caspas-3、LC3-Ⅱ与Beclin-1的mRNA及蛋白含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论:愤怒应激能通过ERS相关途径诱导肝细胞损伤。

高氧对宫内缺氧新生大鼠海马齿状回血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨宫内缺氧对新生大鼠海马齿状回血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及高氧的调控作用。方法:将孕14 d的SD大鼠(230~260 g)15只随机分为对照组、缺氧组和高氧组,每组各5只。自孕15 d开始,缺氧组和高氧组孕鼠被放进三气培养箱中进行缺氧2 h/d,连续5 d;高氧组在每天缺氧后用高氧治疗2 h;对照组不缺氧也不用高氧治疗。3组孕鼠待其自然分娩(第21 d),在每只孕鼠所产新生鼠中随机选取4只。取大脑组织经海马冠状切面切片,常规石蜡切片,作VEGF免疫组化染色。在200倍镜下拍照、IPP 6.0软件分析VEGF阳性细胞的积分光密度(IOD)值。结果:缺氧组新生大鼠海马齿状回VEGF阳性细胞的IOD值较对照组增大(P<0.05),高氧组VEGF阳性细胞的IOD值较缺氧组增大(P<0.05)。结论:宫内缺氧可促进新生大鼠海马齿状回VEGF的表达,高氧治疗可进一步增强VEGF的表达。