miR-221-3p在下肢缺血性疾病中的表达变化

目的探讨miR-221-3p在下肢缺血性疾病中的表达变化。方法临床试验:收集西南医科大学附属医院血管甲状腺外科2014年至2015年间55例动脉硬化闭塞症(ASO)患者和54例健康对照人群血浆,24例ASO截肢患者的正常血管及病变血管。选取3对年龄、性别相近的ASO患者和正常健康人血浆用Microarray筛选出ASO患者血浆中差异性表达在2倍以上的24种microRNA,其中miR-221-3p的表达量明显降低。用实时荧光定量PCR检测临床55例ASO患者和54例健康对照人群血浆及24例ASO截肢患者正常血管和病变血管中miR-221-3p的表达量。动物实验:选取SD大鼠,结扎组分离结扎大鼠股动脉制备下肢缺血模型,假手术组仅暴露分离股动脉不做结扎。分别于术前、术后即刻、术后7天、49天行激光多普勒扫描监测下肢皮肤血流变化。于术后7天、49天行激光多普勒扫描后处死各组大鼠,收集大鼠术侧腓肠肌及下腔静脉血,采用实时荧光定量PCR检测各组血浆和腓肠肌内miR-221-3p的表达量。结果临床试验显示:与健康对照组相比,ASO患者血浆中miR-22-3p的含量明显降低(1.078±0.119比0.617±0.121);与正常血管相比,病变血管中miR-221-3p的表达量也明显降低(1.017±0.113比0.625±0.136)。动物实验显示:与假手术组相比,结扎组7天时血浆和腓肠肌内miR-221-3p的含量明显降低(血浆1.04±0.07比0.31±0.07、腓肠肌1.01±0.07比0.64±0.09),49天时miR-221-3p的含量有所上升但仍低于对照组。结论 miR-221-3p在下肢缺血性疾病中明显降低,有望成为下肢缺血性疾病一个新的诊断方式及治疗靶点。

雄激素调控大鼠阴茎海绵体组织中eNOS表达的分子机制

目的:研究雄激素是否通过蛋白激酶B-3(AKT3)、Ⅰ类磷脂酰肌醇-3-激酶的p110催化亚单位(PIK3CA)、钙调蛋白(CALM)、小窝蛋白1(CAV1)调控大鼠阴茎海绵体组织内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的表达,并影响阴茎勃起功能。方法:8周龄健康雄性SD大鼠36只,随机均分为6组:4周对照组(A组)、6周对照组(B组)、4周去势组(C组)、6周去势组(D组)、4周去势+睾酮(T)替代组(E组)、6周去势+T替代组(F组)。C、D、E、F组切除双侧睾丸及附睾,1 d后E、F组隔日1次丙酸睾酮3 mg/kg皮下注射,其余各组等量植物油皮下注射。4周后(A、C、E组)、6周后(B、D、F组)分别检测各组大鼠海绵体内压(ICP_(max))/平均动脉压(MAP)、血清T,通过免疫组化法及Western印迹法分别测定e NOS、P-e NOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1在各组大鼠阴茎海绵体中的表达。结果:各组实验大鼠体重、MAP无显著差异。血清T值和ICP_(max)/MAP比值:去势组(C、D组)较对照组(A、B组)及去势+T替代组(E、F组)极显著降低(P均<0.01),且去势6周组(D组)较去势4周组(C组)显著降低(P均<0.05),去势+T替代组(E、F组)及对照组(A、B组)各组间无显著差异。免疫组化结果显示:e NOS、Pe NOS主要表达在血管内皮细胞胞膜和海绵窦血管腔内;AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1主要表达于血管内皮细胞胞质和胞膜,少数表达于平滑肌细胞。e NOS、P-e NOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1Western印迹结果显示:去势组(C、D组)与对照组(A、B组)、去势+T替代组(E、F组)相比极显著降低(P均<0.01),去势+T替代组(E、F组)与对照组(A、B组)相比无显著差异,且6周去势组(D组)比4周去势组(C组)表达显著降低(P均<0.05),6周去势+T替代组(F组)与4周去势+T替代组(E组)相比无显著差异,6周对照组(B组)与4周对照组(A组)相比无显著差异。结论:雄激素可能通过上调AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1蛋白的表达,磷酸化e NOS后激活e NOS,促进勃起;然而,确切的机制还应该采用AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1等的阻滞剂或者激活剂,以及采用基因转染或者基因敲除等方法,进一步明确分子机制。

经典瞬时受体电位通道1在重度子痫前期孕妇脐动脉平滑肌中的表达及意义

目的探讨重度子痫前期(SPE)孕妇脐动脉平滑肌中经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)的表达及意义。方法选取2020年1—8月在西南医科大学附属医院产科确诊为SPE和慢性高血压并发SPE(CHPE)的单胎孕妇各15例为研究对象,分别设为SPE组和CHPE组,另选取同期正常健康晚孕单胎孕妇15例为对照组。采用荧光定量PCR(qPCR)与蛋白质印迹技术分别检测3组孕妇脐动脉平滑肌中TRPC1的表达。结果SPE组与CHPE组脐动脉平滑肌中TRPC1的mRNA及蛋白表达水平均比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);但SPE组与CHPE组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论TRPC1在CHPE及SPE孕妇脐动脉平滑肌中表达上调,提示SPE疾病的发生发展可能与TRPC1的过表达有关。

耐多药大肠埃希菌整合子分布与细菌耐药关系分析

目的了解西南医科大学附属医院临床分离的大肠埃希菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因的分布,分析其与细菌耐药性的关系。方法采用K-B法(纸片扩散法)检测其对临床常用抗生素的耐药性,应用PCR(聚合酶链反应)技术检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因、可变区基因盒的分布并测序分析。结果 147株大肠埃希菌中多耐药菌株102株(69.39%)、双耐29株(19.73%)、单耐10株(6.80%)、全敏6株(4.08%),其中链霉素、萘啶酸、复方新诺明、哌拉西林耐药率高,共检测出Ⅰ类整合子98株(66.67%),耐药基因包含dfrA5、dfrA7、dfrA17、aac(6')-Ib-cr、aac(6')-Ib、aad A5、cml A1。未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。结论本院大肠埃希菌多重耐药菌常见,临床分离的大肠埃希菌的耐药性与Ⅰ类整合子的分布相关。

大肠埃希菌生物被膜对照菌株的建立

目的:建立大肠埃希菌生物被膜(bacterial biofilm,BBF)检测方法的对照菌株。方法:从临床分离大肠埃希菌90株,银染法、扫描电镜法检测BBF大小,H-score积分判断BBF阳性程度;激光共聚焦显微镜层扫BBF厚度,每个视野扫描8~32层,求平均值。每种方法以"+"作为BBF量化指标,将90株细菌BBF划分为"4+"、"3+"、"2+"、"1+"和"-"五个等级。结果 :银染法BBF染成黑色块状,其中"4+"22株,"-"7株;扫描电镜法观察BBF呈黏液样块状生长,"4+"19株,"-"8株;激光共聚焦显微镜法层扫BBF厚度,BBF"4+"16株,"-"11株。90株细菌银染法、扫描电镜法、激光共聚焦显微镜法BBF同为"4+"共10株,"-"共7株。结论:7株BBF阴性和10株BBF阳性的大肠埃希菌可用作3种方法的阴阳性对照菌株。

miR-1301-3p与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移的相关性探讨

目的:研究miR-1301-3p在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中表达的变化,分析miR-1301-3p与PTC中央区淋巴结转移的关系。方法:选取2018年08月至2019年08月在我院诊断为“甲状腺肿瘤”的患者60例,其中PTC 30例。qRT-PCR检测miR-1301-3p在良、恶性肿瘤组织,及PTC术前、术后血清中的表达。分析miR-1301-3p与中央区淋巴结转移的关系。ROC曲线分析miR-1301-3p对甲状腺肿瘤、中央区淋巴结是否转移的诊断价值。结果:miR-1301-3p在PTC组织中表达降低(P<0.0001),在PTC患者术后血清中表达上升(P=0.0455)。超声对甲状腺肿瘤的诊断效能为0.726(CI:0.627~0.810,P<0.001);miR-1301-3p对甲状腺肿瘤的诊断效能为0.788(CI:0.695~0.864,P<0.001);miR-1301-3p联合超声对甲状腺肿瘤的诊断效能为0.827(CI:0.738~0.895,P<0.001)。miR-1301-3p在有中央区淋巴结转移的PTC中表达降低。超声对中央区淋巴结是否转移的诊断效能为0.571(CI:0.410~0.723,P=0.0339);miR-1301-3p对中央区淋巴结是否转移的诊断效能为0.813(CI:0.662~0.916,P<0.001);miR-1301-3p联合超声对中央区淋巴结是否转移的诊断效能为0.872(CI:0.733~0.955),P<0.001)。结论:miR-1301-3p在PTC组织中表达降低,与中央区淋巴结转移相关;miR-1301-3p可提高超声对甲状腺肿瘤、中央区淋巴结是否转移的诊断效能,可能为PTC潜在的肿瘤标志物。

Akt1基因转染对BMSCs缺氧耐受影响的实验研究

目的探讨重组慢病毒（lentivirus,LVs）介导Akt1基因转染大鼠BMSCs能否提高细胞缺氧耐受能力,为提高干细胞移植治疗心肌梗死效果提供理论依据。方法以LVs作为转染载体,增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）为标记,构建携带Akt1基因的p LVX-EGFP-3FLAG病毒载体。取第3代3~5周龄SD大鼠BMSCs分别转染p LVX-EGFP空白病毒液（B组）和p LVX-EGFP-3FLAG病毒液（C组）,以未转染病毒的BMSCs为空白对照组（A组）。转染后2~3 d荧光显微镜观察细胞绿色荧光表达情况,并于48 h时采用Western blot法检测B、C组Akt1蛋白表达情况。将B、C组培养的BMSCs分别置于94%N2、1%O2和5%CO2缺氧箱进行缺氧干预（分别为B1、C1组）,取B1、C1组缺氧干预0、3、6、9、12 h的细胞以膜联蛋白V-FITC/碘化丙啶双染法行流式细胞仪分析细胞凋亡率和死亡率、MTT法分析细胞增殖情况、Western blot法检测凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）表达情况。结果转染后A组荧光显微镜下未见绿色荧光表达,B、C组可见明显绿色荧光,转染效率约60%;Western blot可检测到B、C组Akt1表达,且C组Akt1表达明显高于B组（t=17.525,P=0.013）。B1组缺氧干预后各时间点细胞凋亡率和死亡率均逐渐增高,差异有统计学意义（P〈0.05）;C1组细胞凋亡率和死亡率在缺氧干预后3 h短暂下降,之后逐渐增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。除0 h外,缺氧干预各时间点C1组细胞凋亡率和死亡率均显著低于B1组,差异有统计学意义（P〈0.05）。MTT法检测示,常氧条件下B、C组各时间点吸光度（A）值均显著高于缺氧条件下B1、C1组（P〈0.05）,C组各时间点A值均显著高于B组（P〈0.05）,缺氧干预后6、9、12 h B1组A值显著低于C1组（P〈0.05）。Western blot法检测示,与B1组比较,C1组缺氧干预各时间点Caspase-3表达均显著下调（P〈0.05）。结论通过重组LVs介导Akt1基因转染可通过抑制凋亡显著提高BMSCs的缺氧耐受能力,从而为改善干细胞移植治疗心肌梗死效果提供新思路。

β-catenin去磷酸化介导的Wnt信号通路功能低下在1型糖尿病大鼠创面难愈中的作用

目的探讨β-catenin去磷酸化介导的Wnt信号通路功能低下在1型糖尿病大鼠创面难愈中的作用。方法建立1型糖尿病大鼠背部皮肤缺损模型，分为对照组、糖尿病组、氯化锂治疗组及表皮生长因子（EGF）治疗组，观察各组大鼠背部创面愈合情况、β-catenin阳性细胞率、β-连环蛋白（β-catenin）、磷酸化β-catenin及血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达水平。结果与糖尿病组大鼠相比，对照组、氯化锂治疗组及EGF治疗组大鼠创面肉芽组织成熟，创面愈合时间短，愈合率高，β-catenin阳性细胞率高，且去磷酸化β-catenin及VEGF蛋白水平增高，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论1型糖尿病大鼠创面Wnt信号通路功能低下，去磷酸化β-catenin是该信号通路的关键因子，且EGF可能通过Wnt信号通路促进1型糖尿病大鼠的创面愈合。

右美托咪定对早期内毒素休克大鼠肝组织NF-κB表达及对炎症调控影响

目的研究右美托咪定(Dex)对早期内毒素休克大鼠肝组织核因子κB(NF-κB)表达及炎症因子的影响,以期为治疗脓毒症寻找新的治疗靶点。方法将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组(生理盐水组)、脂多糖(LPS)组、Dex低剂量治疗组(DL)、中剂量治疗组(DM)和高剂量治疗组(DH)。生理盐水组注射0.9%生理盐水,LPS组注射LPS复制内毒素休克大鼠模型,DL、DM和DH治疗组在注射脂多糖建模成功后立即静脉泵入Dex(6.5μg/kg),再分别以4.5、1.5和0.5μg/(kg·h)的速度持续泵入6h。各组大鼠均在6h后处死,取下肝组织,免疫组织化学和蛋白质印迹法分析NF-κB表达情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肝组织相关细胞因子,并在显微镜下观察肝组织的显微结构改变。结果免疫组织化学检测结果显示,LPS组NF-κB蛋白表达光密度D值为0.1419±0.0145,高于正常对照组的0.0983±0.0158,差异有统计学意义,P=0.001;DH组NF-κB蛋白表达光密度D值为0.1195±0.0169,低于LPS组,差异有统计学意义,P=0.044。LPS组阳性细胞百分比值为32.5273±7.4469,高于正常对照组的27.1284±4.6394,差异有统计学意义,P=0.015;DH组阳性细胞百分比值为29.3080±4.7789,低于LPS组,差异有统计学意义,P=0.044。蛋白质印迹法检测结果显示,LPS组NF-κB条带较其余各组明显增强,各治疗组中条带亮度均较弱,以DH组最明显。大鼠肝组织病理学结果显示,各治疗组与LPS组相比,DH组肝小叶结构清楚,肝细胞排列整齐,个别肝细胞内有脂滴,未见明显变性坏死肝细胞。LPS组大鼠肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)为(13.0161±1.6848)pg/mL,高于正常对照组的(4.1222±1.0950)pg/mL,差异有统计学意义,P=0.011;DH治疗组TNF-α为(7.6711±1.2539)pg/mL,低于LPS组,差异有统计学意义,P=0.001。LPS组大鼠肝组织中白介素-6(IL-6)为(6.4028±1.1904)pg/mL,高于正常对照组的(3.3250±1.2523)pg/mL,差异有统计学意义,P<0.001;DH治疗组IL-6为(3.5121±0.6538)pg/mL,低于LPS组,差异有统计学意义,P=0.015。结论高剂量Dex能使早期内毒素休克大鼠肝组织NF-κB的表达降低,并抑制炎症因子释放,减轻肝损伤,具有肝保护作用。