负压封闭引流技术在深度烧伤创面修复中的应用

目的探讨深度烧伤创面采用负压封闭引流技术(VSD)进行皮肤修复治疗的临床效果。方法回顾性分析2017年6月至2018年6月在我院治疗的100例Ⅱ、Ⅲ度深度烧伤患者的临床资料,根据不同治疗方法分为观察组与对照组,每组50例。对照组采用削痂植皮治疗,加压包扎植新皮区;观察组行削痂植皮术联合VSD进行治疗。观察并比较2组患者的住院时间、总医疗费用、创面感染率及植皮存活率等。结果对照组与观察组细菌培养阳性率分别为78.0%和24.0%,2组比较差异有统计学意义(χ^2=29.172,P<0.001);对照组与观察组首次植皮存活率分别为74.0%与90.0%,2组比较差异有统计学意义(χ^2=4.336,P=0.037);对照组疼痛评分为(6.9±2.30)分,观察组疼痛评分为(5.7±2.12)分,2组比较差异有统计学意义(t=5.336,P<0.05);对照组患者住院时间为(31.6±7.1)d,观察组为(22.6±5.73)d,2组比较差异具有统计学意义(t=5.897,P=0.000);观察组和对照组患者住院医疗费用分别为(3.79±0.91)万元和(3.86±0.74)万元,差异无统计学意义(t=2.496,P=0.069)。结论Ⅱ、Ⅲ度深度烧伤患者采用VSD治疗有利于创面愈合,可降低感染率,减轻患者疼痛,提高植皮存活率。

衰老病理机制与川产道地药材黄连的抗衰老效应研究进展

黄连作为川产道地药材在中医药历史上有重要地位。现代药理研究证明,黄连及其提取物在抗衰老、抗炎、抗肿瘤、调血脂、降血糖、神经保护等方面具有广泛的药理作用。衰老及其相关疾病在现代医学发展中具有重要意义,黄连及其提取物在抗衰老及衰老相关性疾病方面的效应及机制的研究进展,对发掘川产道地药材黄连的治疗新功效及新靶点,为其抗衰老新用途提供理论依据,为衰老及其相关疾病的临床治疗提供现代的科学依据及临床转化可能。

基于分子机制探讨中药抗衰老

衰老是医学界一个令人费解的问题,是一个多因素过程主要表现为细胞、组织和生物体水平功能的进行性下降。同时伴随着各种年龄性及退行性疾病,如心脑血管疾病、糖尿病、呼吸系统疾病、肿瘤等。越来越多的中药被证实可从多方面调节衰老的分子机制达到延缓衰老的目的。现就抗衰老分子调控机制及代表中药进行综述,为进一步研究防治衰老提供支撑。

实时荧光重组酶聚合酶扩增在白色念珠菌检测中的初步应用

目的探讨实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)在白色念珠菌检测中的初步应用效果。方法(1)取1mL白色念珠菌标准株及阴性对照菌铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、大肠杆菌、光滑念珠菌标准株菌液,使用酵母/细菌基因组试剂盒提取DNA。分析PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA检测白色念珠菌的特异性。(2)取1株白色念珠菌标准株,以光滑念珠菌为阴性对照菌,复苏摇菌并计数,10倍倍比稀释为1×10^7~1×10^1集落形成单位(CFU)/mL,同实验(1)提取DNA,分析PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA检测白色念珠球菌的灵敏性。统计实时荧光定量PCR扩增曲线达到阈值所需循环数及实时荧光RPA出现特异性扩增曲线所需时间,并与PCR结果进行比对。统计3种方法对白色念珠菌的检出下限及检出率,分析实时荧光RPA中白色念珠菌浓度与检测时间之间的相关性。(3)取1株白色念珠菌标准株,同实验(1)提取DNA,分别行PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA,统计3种方法检测总时长。(4)取31份疑似感染白色念珠菌的临床样本和1份棉拭子取材的白色念珠菌临床样本提取DNA,进行PCR与实时荧光RPA,统计阳性检出率。分别采用酵母/细菌基因组试剂盒、chelex-100加热煮沸法、液氮反复冻融法提取上述2种方法检测均出现阳性结果的临床样本的DNA。同前行实时荧光RPA检测(以光滑念珠菌为阴性对照菌)和PCR检测,阴性对照菌同实验(1),观察2种方法检测是否出现阳性结果,并统计实时荧光RPA中扩增曲线达到荧光阈值所需时间。对数据行线性相关分析和t检验。结果(1)3种方法检测中白色念珠菌均出现阳性结果,5种阴性对照菌均未出现阳性结果。(2)白色念珠菌菌液浓度越低,实时荧光定量PCR中扩增曲线达到阈值所需循环数越多,实时荧光RPA中出现特异性扩增曲线所需时间越长,PCR中凝胶条带的亮度越弱,3种检测方法中阴性对照菌均未出现相应的阳性结果。实时荧光RPA、PCR与实时荧光定量PCR中白色念珠菌的检出下限均为1×10^1CFU/mL。实时荧光RPA中白色念珠菌浓度与检测时间呈明显负相关,r=-0.95,P<0.01。PCR与实时荧光定量PCR对1×10^1~1×10^7CFU/mL的白色念珠菌的阳性检出率均为100%。实时荧光RPA对1×101CFU/mL的白色念珠菌的阳性检出率为78%,对1×10^2~1×10^7CFU/mL的白色念珠菌的阳性检出率均为100%。(3)PCR、实时荧光定量PCR、实时荧光RPA检测白色念珠菌的总时间分别为133、93、35min。(4)实时荧光RPA对31份疑似感染白色念珠菌临床样本的阳性检出率为32.26%(10/31),低于PCR的35.48%(11/31)。11份临床样本经实时荧光RPA与PCR检测均出现阳性结果,阴性对照菌均未出现阳性结果。采用酵母/细菌基因组提取试剂盒、chelex-100加热煮沸法提取DNA进行实时荧光RPA,扩增曲线达到阈值所需时间分别为(438±13)、(462±12)s,二者相近(t=1.32,P>0.05)。液氮反复冻融法提取DNA进行实时荧光RPA,扩增曲线达到阈值所需时间为(584±15)s,明显长于另外2种方法(t=7.55、6.39,P<0.01)。结论实时荧光RPA检测白色念珠菌具有检测快速、操作简单、灵敏性高、特异性好等优点,值得临床推广应用。

重组酶聚合酶扩增在铜绿假单胞菌检测中的应用

目的 建立一种优化的重组酶聚合酶扩增（RPA）方法，用于临床快速检测铜绿假单胞菌。方法 （1）提取1株铜绿假单胞菌标准菌株DNA模板，采用PCR、实时荧光定量PCR和RPA进行检测，统计3种方法检测的加样时长、扩增时长和检测时长。（2）取1株铜绿假单胞菌标准菌株，复苏摇菌后逐次稀释为1×10^7、1×10^6、1×10^5、1×10^4、1×10^3、1×10^2、1×10^1集落形成单位（CFU）/mL 7个浓度梯度，以恶臭假单胞菌为阴性对照，分别提取DNA模板，进行RPA、实时荧光定量PCR及PCR，分析3种方法检测铜绿假单胞菌的灵敏性。（3）取1株铜绿假单胞菌标准菌株和4株阴性对照菌（金黄色葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、白色念珠菌和恶臭假单胞菌），分别提取DNA模板，行RPA、实时荧光定量PCR及PCR，分析3种方法检测铜绿假单胞菌的特异性。（4）取28株甘油保存的铜绿假单胞菌临床菌株、1株棉拭子取材的铜绿假单胞菌临床菌株，以恶臭假单胞菌为阴性对照，分别提取DNA模板，行RPA。观察上述菌株是否出现阳性扩增信号，并计算其检出率。所有实验重复3次。采用GraphPad Prism 5.01统计软件对灵敏性结果进行分析。结果 （1）RPA、PCR和实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌的加样时间均为20 min，其中PCR扩增98 min，凝胶检测20 min，共计138 min；实时荧光定量PCR扩增和检测可同步完成，需90 min，共计110 min；RPA中扩增和检测也可同步完成，需15 min，共计35 min。（2）3种检测方法中恶臭假单胞菌均未出现阳性扩增信号和凝胶阳性结果。实时荧光定量PCR和PCR中铜绿假单胞菌检测下限为1×10^1 CFU/mL，RPA中铜绿假单胞菌检测下限为1×10^2 CFU/mL。RPA、实时荧光定量PCR中，铜绿假单胞菌浓度越高，出现阈值时间越短、循环数越少，即检测到阳性扩增信号的时间越短。实时荧光定量PCR中，铜绿假单胞菌浓度为1×10^1-1×10^7 CFU/mL时，均能检测到阳性扩增信号。RPA中，铜绿假单胞菌浓度为1×10^1 CFU/mL时，其阳性扩增信号检出率为0；浓度为1×10^2 CFU/mL时，其阳性扩增信号检出率为67%；浓度为1×10^3-1×10^7 CFU/mL时，其阳性扩增信号检出率为100%。（3）RPA、PCR和实时荧光定量PCR中，铜绿假单胞菌出现阳性扩增信号和凝胶阳性结果，鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及恶臭假单胞菌4种阴性对照菌未出现阳性扩增信号和凝胶阳性结果。（4）RPA中，28株甘油保存的铜绿假单胞菌临床菌株及1株棉拭子取材的铜绿假单胞菌临床菌株均出现阳性扩增信号，恶臭假单胞菌未出现阳性扩增信号；29株临床铜绿假单胞菌阳性扩增信号检出率为100%。结论 本研究建立的优化的铜绿假单胞菌RPA快速检测方法，耗时短，灵敏性及特异性强，对临床快速检测铜绿假单胞菌感染具有重要应用价值。

四氢姜黄素对光老化小鼠皮肤的修复作用

目的:探讨四氢姜黄素对紫外线(UVA+UVB)辐射致小鼠皮肤光老化的保护作用。方法:KM雌性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、四氢姜黄素100 mg/kg组,每组10只。模型对照组与四氢姜黄素100 mg/kg组采用最小红斑剂量(100 mJ/cm^(2))递增法进行紫外线照射。实验过程中,四氢姜黄素100 mg/kg组每日给予四氢姜黄素灌胃,正常对照组、模型对照组每日口服0.5%羟甲基纤维素钠,实验持续十周。实验结束24 h后,评价小鼠皮肤外观,评价结束后将小鼠断颈处死,取背部皮肤,观察其病理学变化,并对超氧化物歧化酶(SOD)活力、羟脯氨酸(Hyp)含量进行测定。结果:与正常对照组比较,模型对照组皮肤皱纹明显加重,出现皮革样改变、红肿破溃,超氧化物歧化酶(SOD)活力显著降低(P<0.01),羟脯氨酸(Hyp)含量显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,四氢姜黄素100 mg/kg组皮肤皱纹减轻,超氧化物歧化酶(SOD)活力显著增高(P<0.01),羟脯氨酸(Hyp)含量显著增高(P<0.01)。结论:四氢姜黄素对光老化小鼠皮肤具有一定的修复作用,可能与抑制氧化应激有关。

富血小板血浆对大鼠背部超长随意皮瓣成活的影响

目的观察富血小板血浆(PRP)对大鼠背部超长随意皮瓣成活的影响。方法取16只鼠龄6~8周雄性SD大鼠(下同)全血,每只9~10mL,采用改良APPLE法制备PRP;全自动血液细胞分析仪对全血及PRP进行血小板计数,检测PRP制作成功。另取32只大鼠,按随机数字表法分为PRP组和对照组,每组16只。于每只大鼠背部制成1个矩形超长随意皮瓣并原位回植,皮瓣面积为8cm×2cm。在皮瓣两侧分别设计等距的3点,PRP组大鼠从每个注射点真皮及皮下注射0.1mLPRP,对照组大鼠注射同等体积的生理盐水。术后7d,观察大鼠皮瓣成活情况并计算皮瓣成活率。术后7d,每组处死8只大鼠,取皮瓣近、中、远端组织,苏木精-伊红染色观察皮瓣组织学变化。取术后24h(每组处死8只大鼠)、7d2组大鼠距蒂部3~4cm处皮瓣组织,实时荧光定量反转录PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子AA(PDGF-AA)和PDGF-BBmRNA表达量,硝酸还原酶法测定一氧化氮含量。对数据行t检验。结果(1)术后7d,PRP组大鼠皮瓣较干燥,未出现脓性分泌物,皮瓣远端出现痂壳附着,痂壳自然脱落后露出色泽淡红愈合皮肤;对照大鼠皮瓣可见大量炎性渗出物,皮瓣远端1/2~2/3发生坏死且形成痂壳,痂壳不易剥脱。PRP组大鼠皮瓣成活率为(67±6)%,明显高于对照组的(52±10)%,t=1.94,P<0.05。(2)PRP组大鼠近端皮瓣未见明显炎性细胞浸润,纤维组织排列整齐,较多微血管形成;中端皮瓣可见少量炎性细胞浸润,纤维组织排列稍紊乱,较多微血管形成。远端皮瓣纤维组织排列较混乱,较多炎性细胞浸润,较多微血管形成,有少量血管栓塞。对照组大鼠近、中、远端皮瓣均有大量炎性细胞浸润,纤维组织排列混乱,微血管形成较少。(3)术后24h、7d,PRP组大鼠VEGF、PDGF-AA及PDGF-BBmRNA的表达量明显高于对照组(t=6.46、5.61、2.88、10.18、6.10、7.67,P<0.001)。(4)术后24h,PRP组大鼠皮瓣组织一氧化氮含量为(5.0±0.9)μmol/g,明显高于对照组的(3.4±0.9)μmol/g(t=19.14,P<0.001)。术后7d,PRP组大鼠皮瓣组织一氧化氮含量为(3.3±0.8)μmol/g,与对照组大鼠的(3.0±0.6)μmol/g相近(t=2.93,P>0.05)。结论PRP能改善大鼠背部超长随意皮瓣的成活率,可能与PRP可通过调节血管生成相关因子,提高一氧化氮含量,抑制细胞过度凋亡,从而减轻缺血再灌注损伤,改善微循环障碍有关。

外源性高迁移率族蛋白B1对大鼠烫伤早期创面缺血带血管生成的影响

目的 观察外源性高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对大鼠烫伤早期创面缺血带血管生成的影响。方法 取36只SD大鼠，按随机数字表法分为HMGB1组和单纯烫伤组，每组18只。将定制铜质梳状模具置于100 ℃沸水中3-5 min后，置于大鼠背部20 s，造成有3个缺血带的创面。烫伤后即刻，HMGB1组大鼠从创面缺血带边缘皮下注射0.4 μg HMGB1＋0.1 mL磷酸盐缓冲液（PBS），单纯烫伤组大鼠同前注射0.1 mL PBS。烫伤后24、48、72 h，每组各取6只大鼠，采用免疫组织化学法检测烫伤后24、48、72 h创面缺血带血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达量及烫伤后48、72 h创面缺血带CD31蛋白表达量。显微镜下观察并计算烫伤后48、72 h创面缺血带组织CD31免疫组织化学切片中微血管数量。实时荧光定量反转录PCR检测烫伤后24、48、72 h创面缺血带VEGF、CD31 mRNA表达量。对数据行析因设计方差分析、t检验及Bonferroni校正。结果 （1）烫伤后24、48、72 h，HMGB1组大鼠创面缺血带VEGF蛋白表达量明显高于单纯烫伤组（t＝7.496、4.437、5.402，P〈0.05或P〈0.01）。烫伤后48、72 h，HMGB1组大鼠创面缺血带CD31蛋白表达量分别为0.038 8±0.007 9、0.057 7±0.001 2，明显高于单纯烫伤组的0.013 4±0.004 9、0.030 3±0.004 0（t＝10.257、15.055，P〈0.01）。（2）烫伤后48、72 h，HMGB1组大鼠创面缺血带微血管数明显多于单纯烫伤组（t＝3.536、4.000，P〈0.05）。（3）烫伤后24、48、72 h，HMGB1组大鼠创面缺血带VEGF mRNA表达量明显高于单纯烫伤组（t＝4.406、3.821、3.356，P〈0.05）。烫伤后24、48 h，HMGB1组大鼠创面缺血带CD31 mRNA表达量明显高于单纯烫伤组（t＝4.113、3.466，P〈0.05）；烫伤后72 h，2组大鼠创面缺血带CD31 mRNA表达量相近（t＝0.010，P〉0.05）。结论 外源性HMGB1可通过提高VEGF和CD31的表达，从而促进大鼠烫伤早期创面缺血带血管生成。