重组腺病毒介导神经生长因子转染实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠少突胶质细胞的凋亡及髓鞘化

背景:神经生长因子对正常的神经元凋亡具有抑制效应,能够提高其损伤修复的能力,在一些自身免疫性疾病中发挥治疗作用。目的:观察经外周转染重组腺病毒介导神经生长因子基因对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠少突胶质细胞凋亡及髓鞘化的影响。方法:将30只雌性健康的C57BL/6小鼠随机分为3组,每组10只:正常组不进行任何处理;对照组采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽免疫法建立实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,建模后第3天尾静脉注射生理盐水,连续注射21 d;转染组同样建立实验性自身免疫性脑脊髓炎模型,建模后第3天尾静脉注射转染重组腺病毒介导神经生长因子基因,连续注射21 d。疾病高峰期处死小鼠,利用LFB染色行髓鞘组织形态病理观察,免疫荧光法观察脊髓组织中凋亡蛋白Caspase3与少突胶质细胞的表达及共定位情况,RT-PCR法检测脊髓组织中神经生长因子、髓鞘碱性蛋白mRNA水平,Western blot法检测脊髓组织中神经生长因子、Caspase3蛋白水平,Elisa法检测脊髓组织髓鞘碱性蛋白水平。实验操作过程通过西南医科大学动物实验伦理审查(201912-8)。结果与结论:①LFB染色显示,对照组脊髓组织有明显的脱髓鞘改变,转染组髓鞘脱失有显著改善;②免疫荧光显示,对照组脊髓组织少突胶质细胞中Caspase3呈明显的点状聚集,转染组聚集现象不明显;③RT-PCR检测显示,与正常组、转染组比较,对照组的髓鞘碱性蛋白、神经生长因子mRNA表达降低(P<0.05);④Western blot检测显示,与正常组、转染组比较,对照组的Caspase3蛋白水平升高(P<0.05)、神经生长因子蛋白水平降低(P<0.05);⑤Elisa检测显示,对照组髓鞘碱性蛋白水平低于正常组、转染组(P<0.05);⑥结果表明,经外周转染的重组腺病毒介导神经生长因子基因对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型有防治作用,其机制可能与上调神经生长因子水平、下调少突胶质细胞中凋亡蛋白Caspase3、提高髓鞘碱性蛋白表达而改善髓鞘脱失有关。

雷帕霉素保护实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓神经元的作用途径

背景:当前就自噬的有关报道较多,但神经元中自噬水平改变与神经元保护机制的关系未有明确定论。目的:探究mTOR自噬通路抑制剂雷帕霉素是否通过调控P70S6K及mTOR蛋白水平激活自噬发挥对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓神经元的保护作用。方法:将54只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组及雷帕霉素组,每组18只,模型组及雷帕霉素组注射含MOG35-55的完全弗氏佐剂和百日咳菌稀释液进行实验性自身免疫性脑脊髓炎造模,雷帕霉素组小鼠在免疫当日开始腹腔注射雷帕霉素[1 mg/(kg·d)],正常组与模型组则每天同一时间注射等量生理盐水,将小鼠在发病高峰期时处死,正常组和其余未发病小鼠在饲养4周后处死并取出脊髓组织,分离出腰膨大段组织,分别进行尼氏染色行脊髓组织病理观察,免疫荧光双标染色观察脊髓组织中自噬标志物LC3与NeuN的表达及共定位情况,Western blot检测脊髓组织中mTOR、P70S6K蛋白及其磷酸化水平。结果与结论:①正常组小鼠均未发病,模型组和雷帕霉素组小鼠均不同程度发病,雷帕霉素组与模型组比较,潜伏期有延长(P<0.01),进展期缩短明显(P<0.01),高峰期时的神经功能障碍评分有所下降(P<0.05);②模型组尼氏小体数量在发病高峰期时相较于正常组明显降低(P<0.05),而雷帕霉素组尼氏小体数量相较于模型组明显增加,但仍然低于正常组(P<0.05);③模型组小鼠脊髓神经元中自噬标志物LC3散乱分布无明显点状聚集现象,而雷帕霉素组小鼠脊髓神经元中LC3呈明显的点状聚集,LC3与NeuN的分布基本一致;④模型组和雷帕霉素组mTOR及P70S6K蛋白的磷酸化水平高于正常组,但雷帕霉素组mTOR及P70S6K蛋白的磷酸化水平却低于模型组;⑤结果表明,雷帕霉素可能通过抑制P70S6K及mTOR蛋白磷酸化水平从而激活自噬,对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓神经元起保护作用。

活化蛋白-1在神经系统疾病中的研究进展

活化蛋白-1(AP-1)是一类二聚体的反式调节因子,其作用十分广泛,对细胞的增殖、存活和凋亡等重要生理过程具有调控作用。许多体内外实验均证实,AP-1与脑血管疾病、神经退行性疾病、癫痫和脑胶质瘤等神经系统常见疾病有密切联系。本文就AP-1的组成、调节及其与以上疾病的关系作简要综述。

复发缓解型多发性硬化患者血清miR-326表达水平与NSE、MBP水平变化的关系

目的:探讨复发缓解型多发性硬化(RRMS)患者在复发期及缓解期时外周血清miR-326的表达水平与神经元特异性烯醇化酶(NSE)、髓鞘碱性蛋白(MBP)水平的关系及临床意义。方法:选取西南医科大学附属医院神经内科2017年8月至2020年4月期间就诊收治的RRMS患者59例,其中急性期组(复发期)33例,缓解期组26例,另外选取同期体检健康者30例作为对照组。采用RT-PCR检测各组外周血清miR-326的表达水平,同时采用酶联免疫法检测所有纳入者外周血清中NSE、MBP的表达水平,比较RRMS发作期组、缓解期组与健康对照组外周血清中miR-326、NSE及MBP的水平表达情况,并对RRMS急性期组和缓解期组miR-326的表达水平与NSE、MBP水平相关性进行分析。结果:与健康对照组和RRMS缓解期组比较,急性期组外周血清中miR-326、NSE及MBP的表达水平均显著升高(P<0.01),而缓解期组外周血中上述指标相较于健康对照组也有所增加,但表达水平均低于急性期组(P均<0.01)。相关性分析发现无论在RRMS急性期组还是缓解期组,其外周血中miR-326的表达水平与NSE、MBP的水平均呈正相关关系(P<0.01)。结论:RRMS患者外周血清中存在miR-326的高表达,在急性期更为明显,且miR-326的水平与NSE、MBP水平呈正相关关系。

ApoJ基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑出血的作用机制

目的目前载脂蛋白J(Apo J)对脑出血的神经保护作用尚不明确,文中旨在探讨携带载脂蛋白J基因的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血大鼠的治疗作用及其可能的机制。方法体外分离、培养大鼠BMSCs;通过脂质体介导重组质粒p EGFP-N1-Apo J转染BMSCs。将96只SD大鼠随机数字表法分为3组:Apo J/BMSCs组、BMSCs组和对照组,通过"二次注血法"制作大鼠脑出血(ICH)模型,造模成功后24 h分别移植等体积转染Apo J基因的BMSCs悬液、BMSCs悬液和等渗盐水至3组大鼠脑出血部位。在移植后1、3、5、7d的不同时间点,利用改良神经功能评分(m NSS)评估大鼠神经功能恢复情况,通过干湿重法测量脑含水量,并采用Western blot技术检测各组大鼠补体C3表达的差异。结果 3组大鼠移植后1 d的m NSS评分差异无统计学意义(P>0.05),移植后3、5、7 d时Apo J/BMSCs组的m Nss评分[(8.13±0.99、6.75±1.04、5.63±0.52)分]显著低于BMSCs组[(9.25±1.28、8.50±1.41、7.00±0.54)分]和对照组[(10.88±0.84、9.75±0.89、7.88±1.25)分],且BMSCs组显著低于对照组(P<0.05)。Apo J/BMSCs组1、3、5、7 d脑组织含水量[(78.17±0.82)%、(78.68±0.55)%、(77.00±0.58)%、(75.89±0.46)%]显著低于同时间点BMSCs组[(78.83±0.56)%、(79.12±0.26)%、(78.13±0.46)%、(76.86±0.29)%]和对照组[(80.38±0.35)%、(81.47±0.26)%、(79.74±0.41)%、(78.44±0.44)%],其中BMSCs组显著低于对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,Apo J/BMSCs组1、3、5、7 d的C3表达(0.096±0.011、0.083±0.005、0.064±0.009、0.045±0.007)较BMSCs组(0.212±0.014、0.164±0.013、0.105±0.010、0.091±0.004)和对照组(0.440±0.006、0.604±0.011、0.333±0.010、0.141±0.003)显著下调(P<0.05),其中BMSCs组低于对照组(P<0.05)。结论 Apo J可通过抑制补体激活介导的继发性脑损伤,减轻脑水肿,从而促进脑出血大鼠神经功能的恢复。

胼胝体变性30例的预后分析

目的:探讨胼胝体变性(Marchiafave-Bignami disease,MBD)的临床表现及影像学特点与预后的关系,为胼胝体变性的早期诊断及预后提供依据。方法:对2008年9月至2016年9月我院30例MBD患者的临床表现、影像学资料及预后进行回顾性分析,通过改良Ranking(mRS)评分评估患者神经功能恢复情况,并对预后进行分析。结果:30例MBD的患者中,按mRS评分分为完全恢复组(mRS评分=0分) 10例、部分恢复组(mRS评分=1或2分) 4例,预后不佳组(mRS评分≥3分) 16例。患者首次发病的临床表现及影像学资料对比,3组在伴有癫痫发作(χ~2=7. 074,P=0. 029)、意识障碍(χ~2=12. 866,P=0. 002)、胼胝体及以外病灶(χ~2=7. 907,P=0. 019)上差异有统计学意义。结论:首次发病伴有意识障碍、癫痫发作、胼胝体及以外病灶可能提示预后不佳。

伴脑小血管病的急性卒中患者的溶栓治疗

慢性脑小血管病(CSVD)是指一组病理过程影响小动脉、微动脉、小静脉和大脑毛细血管的疾病。腔隙性卒中作为脑小血管病的一种,它与复发性卒中、认知功能障碍及死亡率增加这些长期不良预后密切相关。目前,脑出血仍然是溶栓治疗最具破坏性和不可预知性的并发症,而脑小血管病的存在是现在被公认为溶栓相关脑出血的危险因素之一。本文综述了腔隙性卒中患者溶栓疗效的文献和伴CSVD,如白质病变及脑微出血患者溶栓后脑出血发生风险的证据。

AMG9810对帕金森病大鼠学习记忆能力的影响及其机制

目的探讨AMG9810对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的SD大鼠帕金森病(PD)模型学习记忆能力的影响及其机制。方法采用MPTP诱导SD大鼠建立PD动物模型,通过对大鼠进行水迷宫测试观察PD大鼠学习记忆能力的变化情况;随后再将SD大鼠分成对照组、模型组和AMG9810给药组,同样用水迷宫测试检测AMG9810对PD大鼠学习记忆能力的影响。最后处死大鼠取脑组织,生化法测定各处理组中超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物丙二醛(MDA)等氧化应激标志物的水平,用免疫印迹法检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)水平的变化。结果MPTP诱导SD大鼠建立PD动物模型后,模型组大鼠的学习记忆能力较对照组显著降低,表现在潜伏期显著增加(P<0.05),而有效滞留时间和穿越平台次数则明显降低(P<0.01);而经AMG9810治疗14 d的PD大鼠,其学习记忆能力较未经治疗的PD模型大鼠显著改善;且经AMG9810处理后,给药组SOD活性较单纯MPTP处理组显著升高而MDA含量则显著降低;同时,活化Caspase3蛋白水平则较单纯MPTP处理组显著降低。结论AMG9810可能通过调控MPTP诱导的氧化应激水平而对其所致的学习记忆能力的损伤起显著改善作用。

全基因组外显子测序联合连锁分析法进行家族性偏瘫性偏头痛致病基因CACNA1A新突变的研究

目的：探索家族性偏瘫性偏头痛与CACNA1A基因突变的关系。方法通过收集2014年重庆医科大学附属大学城医院神经内科的一家族性偏瘫性偏头痛家系患者和正常人以及1000名正常对照DNA，对该家系的先证者和另一患者进行全基因组外显子测序，并进行连锁分析、CACNA1A基因测序验证研究和生物信息学分析。结果发现一个位于CACNA1A基因的8号外显子的新突变位点（c.1168A＞G），导致天冬酰胺替换为天冬氨酸（N390D）。结论 CACNA1A基因突变N390D是新发现的引起该家系家族性偏瘫性偏头痛的致病突变。

大鼠急性一氧化碳中毒后迟发性脑病模型海马区缺氧诱导因子-1α及血红素加氧酶-1的表达

目的研究急性CO中毒后迟发性脑病（DEACMP）大鼠模型海马区缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血红素加氧酶-1（HO-1）的表达及相关作用。方法将156只大鼠按随机数字表法抽样并分成急性CO中毒后迟发性脑病组（一氧化碳组）60只、空气对照组60只及空白对照组36只，再按随机数字表法均分成染毒后1、3、7、14、21、28 d 6个亚组。采用蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法检测大鼠海马区HIF-1α及HO-1的表达，用普鲁士蓝染色检测铁离子的表达，原位末端转移酶标记染色检测细胞凋亡情况，Morris水迷宫试验分析大鼠行为学变化，观察海马区细胞形态学变化并监测动脉血一氧化碳血红蛋白（ HbCO）浓度。结果一氧化碳组大鼠海马区HIF-1α、HO-1及铁离子的表达均呈现染毒后先增高[3 d达峰值（HIF-1α：7.4±1.0，HO-1：9.8±0.9，铁离子：44.60±1.77）]，再降低的趋势，细胞凋亡的峰值延迟至染毒后7～14 d（7 d：19.4±1.1，14 d：17.8±1.0），与空气对照组（HIF-1α：1.7±0.7， HO-1：2.1±0.4，细胞凋亡：4.2±1.0，由于空气对照组及空白对照组的铁离子含量极少，无法进行统计，铁离子未进行组间比较，仅在CO组内进行比较）及空白对照组（ HIF-1α：2.0±0.5， HO-1：2.1±0.4，细胞凋亡：3.9±0.6）相同时间点比较差异具有统计学意义（F＝77.86、228.77、258.54，均P＜0.05）。各峰值与组内其他时间点比较差异具有统计学意义。水迷宫试验发现大鼠于染毒后14 d出现认知功能下降及行为学改变。形态学发现海马区锥体细胞变性、坏死。染毒过程中大鼠动脉血HbCO浓度＞50％维持超过16 h。结论急性重度CO中毒时，大鼠海马区HIF-1α在缺氧应激下增加导致下游靶基因HO-1增加，两者及代谢产物的过度表达共同参与促进海马区细胞迟发性凋亡可能是导致DEACMP的一种机制。

外伤性癫痫患者治疗依从性的影响因素分析及护理对策

外伤性癫痫患者治疗依从性的影响因素分析及护理对策。方法:对照组给予患者常规护理模式。实验组在对照组的基础上采取针对性护理模式。结果:对照组总依从率为16(50.0%),实验组总依从率为29(90.6%),实验组患者总依从率明显高于对照组患者总依从率,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在外伤癫痫性患者的治疗过程中,进行影响因素分析及护理对策,能够有效的提高对护理工作的依从性,提高患者对此次护理工作的满意率,有效的提高治疗疗效,减少复发率,值得临床推广运用。