卡里佐枳橙在中国的生产适应性调查与比较研究

卡里佐枳橙是重要的柑桔砧木,在世界范围内广泛应用,20世纪90年代作为一种新砧木被引进中国并在部分地区用于柑桔生产。为了全面了解卡里佐枳橙在中国的生产适应性,采用田间观察和问询相结合的方法在6个柑桔主产省16个区(县)的30多个果园开展了嫁接亲和性、早结丰产性、抗逆性等方面的调查,并在重庆和广西两个不同的生态类型共3个试验点连续3年对嫁接在卡里佐枳橙和枳砧上的梁平柚和纽荷尔脐橙的树体、产量、结果效率和果实品质等园艺学性状进行比较。结果显示,总体上卡里佐枳橙砧的嫁接亲和性较好,但与红江橙和无籽柠檬嫁接后表现出明显的不亲和;早结丰产性好,树势旺,结果效率不如枳砧;果实品质优良,与枳砧相比无显著性差异;对裂皮病、天牛比较敏感;对碱性土壤比较敏感,容易导致叶片缺铁黄化。

第18届国际柑桔病毒学家组织者会议概况及巴西柑桔考察

近年来,国际柑桔嫁接性传播病害发生为害加重,虫传病害分布区域不断扩大,新病害不断出现,国际柑桔产业面临着巨大的挑战,国际柑桔病毒学家组织者会议（International Organization of Citrus Virologists,IOCV）为各国柑桔病毒学家提供了交流合作的平台。

植物微RNA的生物学功能及其在砧穗互作中的作用研究进展

微RNA(microRNA或miRNA)在调控植物生长发育、胁迫应答和信号转导等方面发挥重要作用,是目前生物科学的研究热点。本文总结了植物miRNA的产生机理、特征及对靶基因的作用机制,miRNA在植物生长发育、胁迫应答、激素调节及信号转导中的功能,植物嫁接后miRNA表达的变化、砧穗间遗传物质的转运,及其对植物抗性的影响。展望了加强miRNA在砧穗互作中的研究,利用miRNA提高植物的抗性、品质和产量等的重要意义。

地面覆盖特卫强白色无纺布对柑桔果实品质的影响

采用具有防水透气、导热性低、高反射率和低辐射率等特点的特卫强(Tyvek)白色无纺布,在重庆地区柑桔中熟品种椪柑Citrus reticulata‘Ponkan’、纽荷尔脐橙Citrus sinensis‘Newhall’和晚熟品种塔罗科血橙Citrus sinensis‘Tarocco’的果实发育中后期分别进行不同程度的地面覆盖处理[全覆盖、半覆盖和不覆盖(对照)],并在覆盖后不同时期测定树冠上部和下部果实的内外品质。结果表明,地面覆盖主要通过降低果面色泽指数b值,使综合色泽指数a/b值升高,从而对纽荷尔脐橙和塔罗科血橙有促进着色的作用,对椪柑的作用稍逊;此外,对树冠下部果实着色的改善程度大于上部果实。地面覆盖通过促进果实降酸,有促进果实成熟和改善果实风味的作用。半覆盖存在降低果实可溶性固形物的风险,建议生产上采用全覆盖。

8种柑桔砧木种质耐酸碱性评价

以8种柑桔砧木种质6月龄实生苗为试验材料,在条件可控的温室内以无土栽培系统预培养60d后进行不同pH值（3.5和9.0,以6.0为对照）胁迫处理30d,测定胁迫下植株的形态表现、相对生长量及与逆境胁迫相关的生理生化指标,利用主成分分析法和隶属函数法综合评价砧木的耐酸/碱性。结果表明,与对照相比,酸/碱胁迫下砧木的各项指标因砧木类型的不同在变化趋势和程度上有明显差异。在供试种质中,Z-022（Poncirus trifoliata）的耐酸性最强,KPJ-015（Citrus reticulata）的耐酸性最弱;资阳香橙（C. junos）的耐碱性最强,而卡里佐枳橙（C.sinensis×P. trifoliata）的耐碱性最弱。

43%联苯肼酯悬浮剂防治柑桔全爪螨的田间药效试验

联苯肼酯是联苯肼类的一种选择性叶面喷雾用杀螨剂，为明确其对柑桔全爪螨实际控制效果，开展了田间药效试验。结果表明，43％联苯肼酯悬浮剂4000和5000倍液对柑桔全爪螨速效性好，持效期长，药后1～30天防治效果在84．9％～99．2％之间，优于240g／L螺螨酯悬浮剂4800倍液；该药剂在试验剂量内未对柑桔产生药害，对天敌安全。43％联苯肼酯悬浮剂4000-5000倍液可以在生产上推广使用。

响应黄龙病侵染的柑桔韧皮部蛋白2基因筛选及表达分析

为了探索柑桔韧皮部蛋白2（Phloem Protein 2,PP2）在寄主与黄龙病菌互作中的功能,以嫁接传毒后的高感种质锦橙Citrus sinensis和耐病种质酸柚Citrus grandis病枝叶片为材料,通过实时荧光定量PCR方法从全基因组水平初步筛选到6个响应黄龙病侵染诱导的PP2基因,并比较了其在锦橙和酸柚中的相对表达量。结果表明,CsPP2B15可能与耐病有关,CsPP2B2和CsPP2B10可能与感病相关。采用生物信息学的方法对6个基因编码氨基酸序列从结构组成、基本理化性质、亲疏水性进行分析并构建了系统发育树,发现在柑桔中CsPP2B15和CsPP2A与拟南芥PP2的亲缘关系较近,而CsPP2B2、CsPP2B10、CsPP2B12-1、CsPP2B12-2与大豆PP2亲缘关系较近,CsPP2A与拟南芥PP2的亲缘关系最近。

重庆三峡库区塔罗科血橙不同树形的冠层特性、产量和品质分析

以11年生枳橙砧塔罗科血橙为试验对象,设计圆头形、主干形、开心形等3种树形处理,研究不同树形对血橙冠层特性、快速叶绿素荧光、果实产量及品质等的影响,提出重庆三峡库区塔罗科血橙最适宜的树形,为血橙优质丰产树形培养和树体改造提供技术支撑与理论依据.结果表明,3种树形的冠层特性存在明显差异,其中冠层透光性从强到弱依次为开心形、主干形、圆头形;主干形和开心形的PSII原初最大光能转换效率(Fv/Fm)、春梢叶片单位面积吸收的光能(ABS/CSo)明显提升,反应中心的热消耗(DIo/RC)和秋梢叶片单位面积热耗散能量(DIo/CSo)显著降低.主干形和开心形均能有效提升春、秋梢叶片的光合结构性能(PI abs,PI total),以主干形处理相对最佳.2022-2023年度产量、单果质量、固酸比和维生素C含量从高到低均依次为主干形、开心形、圆头形,可溶性固形物和花色苷含量从高到低依次为开心形、主干形、圆头形.因此,重庆三峡库区塔罗科血橙宜选择主干形树形进行培养,以获得最佳产量和品质.

基于COS Marker分析柑橘属及其近缘、远缘属植物的遗传与进化

【目的】研究柑橘属及其近缘、远缘属种质资源的遗传多样性及亲缘关系,为柑橘类果树的遗传和进化关系提供新的视点,也为遗传育种以及种质资源深入的收集、保护及评价利用提供新工具和参考。【方法】下载Phytozome网站公布的全部克里迈丁Conserved ortholog sequences,并在NCBI中与测序甜橙序列比对,获得具有Gap的序列,从中设计60对COS引物,筛选并利用多态性标记对柑橘属及其近缘、远缘属植物进行扩增检测,通过Structure、Power Marker和Gen Al Ex等软件进行数据分析。【结果】从设计引物中筛选出谱带清晰、稳定性好、具有多态性且分布在柑橘不同连锁群的引物25对,对45份柑橘属及其近缘、远缘属种质资源进行扩增检测,共得到584条谱带,平均每对引物约为23.36条;基因多样性为0.26—0.88,平均0.49;PIC为0.26—0.87,平均0.48。群体遗传结构分析显示,在K=9时,群体结构图清晰地揭示了柑橘属及其近、远缘属植物间的遗传组成关系,可区分为宽皮柑橘类群、柚类群、枸橼类群、大翼橙类群、金柑类群、枳及澳沙檬澳圆檬类群、花椒类群、黄皮酒饼簕九里香类群以及印度野橘和莽山野柑杂合类群,类群关系与聚类分析结果总体比较一致。UPGMA聚类分析显示,COS Marker能够明确地区分柑橘属及其近缘、远缘属种质资源,柑橘属在较高分类层次与金柑属、枳属、澳沙檬属、澳圆檬属、花椒属以及黄皮、酒饼簕、九里香等近、远缘植物分离;在柑橘属内,枸橼和大翼橙类首先聚类,然后与宽皮柑橘、柚类等其他柑橘属植物聚类;宽皮柑橘类群里,道县野橘、岑溪酸橘等半野生宽皮柑橘与椪柑等栽培宽皮柑橘可以明确区分,而莽山野柑和印度野橘不在本类群。【结论】根据甜橙和克里迈丁基因测序信息设计的COS引物,在柑橘近缘、远缘属植物中均能获得有效扩增,能够有效区分柑橘属及其近缘、远缘属种质资源;莽山野柑和印度野橘的遗传组成表现杂合,聚类分析中与宽皮柑橘距离比较远,可能并非宽皮橘类群最原始类型。

柑橘响应溃疡病菌转录因子CsBZIP40的克隆及功能分析

【目的】分析柑橘BZIP转录因子家族并克隆柑橘溃疡病菌相关的转录因子Cs BZIP40,对其进行亚细胞定位并研究外源激素及机械损伤对该基因的诱导表达,确定其诱导表达模式,分析其与溃疡病菌侵染的关系。【方法】基于全基因组公共数据库,对柑橘BZIP转录因子进行综合专业注释以获得柑橘中BZIP家族的所有成员信息,并根据染色体定位对其进行命名;利用MEME分析其结构域;利用MEGA 6.0分析柑橘BZIP与拟南芥BZIP的系统发育关系,并根据系统发育关系对该基因家族进行分类,确定本研究关注的Cs BZIP40所属的类型;结合染色体定位和系统发育树确定该家族的基因复制情况;利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)方法验证感染溃疡病菌前后由柑橘转录组筛选出的Cs BZIP40表达模式;分析Cs BZIP40、启动子元件(plant CARE)和核定位信号(c NLSmapper),构建GFP融合载体,用洋葱表皮进行亚细胞定位分析,来对预测的核定位信息进行验证;利用q RT-PCR技术分析水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(Me JA)、乙烯利(ET)以及机械损伤(wounding)对该基因的诱导表达模式,揭示该转录因子与激素代谢途径的关系。【结果】从柑橘(甜橙)全基因组数据库中共注释到47个BZIP,这些BZIP基因位于9号染色体之外的所有染色体上,其中3号染色体基因密度最大为4.5×10-7个/Mb,2号染色体上的BZIP基因密度最小,仅占所有BZIP基因的2%;柑橘BZIP基因家族含有较少的基因复制事件,所以相对其他已测序物种其BZIP家族较小;Cs BZIP40基因全长5 756 bp,开放阅读框1 530 bp,编码509个氨基酸;经BZIP家族染色体定位、结构域和系统发育分析结果显示Cs BZIP40基因序列特异性较好,且Cs BZIP40与拟南芥中AT1g08320属于同源基因,属于柑橘10个亚家族中参与病菌防御的D亚类;上游启动子元件含多个与植物逆境或激素应答相关的顺式作用元件,例如Box-W1、HSE、ERE等;此基因含有核定位信号,亚细胞定位表明此蛋白定位于细胞核,具备转录因子发挥作用的前提;外源水杨酸并不会使四季橘和纽荷尔脐橙中Cs BZIP40的表达水平显著上调,纽荷尔脐橙在茉莉酸甲酯诱导后有明显的差异表达,但乙烯利可以使Cs BZIP40在四季橘和纽荷尔脐橙中均有较明显的差异表达;柑橘溃疡病菌侵染可诱导抗病品种四季橘中此基因上调表达,而在感病品种纽荷尔脐橙中,该基因对柑橘溃疡病菌侵染没有响应。【结论】Cs BZIP40是响应溃疡病菌侵染的一个转录因子,该基因可作为柑橘抗溃疡病菌分子育种的一个候选基因来进行进一步功能性验证,具有潜在的分子育种价值。

柠檬苦素类化合物在植物保护中的应用

柠檬苦素类化合物是一类高含氧的三萜类次生代谢产物,主要存在于芸香科和楝科植物中。部分柠檬苦素类化合物已被证实具有抗癌、抗菌、抗炎、昆虫拒食等生物活性,并作为高效低毒生物农药在农业生产中得到应用。本文主要对该类物质在芸香科和楝科植物中已报道的存在形式、生理功能和应用进行了综述,并对其在柑桔抗病、副产物价值提升等方面的应用前景进行了展望。

4个种子数量差异明显的甜橙品种的胚珠发育观察

采用4个遗传背景高度一致而种子数量明显差异的甜橙品种为材料,从花后25d到花后185d,分阶段对胚珠发育过程进行了显微观测分析,以寻找柑桔种子发育和数量形成的关键期。结果显示,在花后25d和35d时,同一品种单果间胚珠数量无明显差异,但品种间胚珠数量存在显著差异。在花后35d时,单果内胚珠可区分为明显发育胚珠（ODO）和滞后发育胚珠（DLO）,并且ODO数量在品种间也存在显著差异。在后续观察中,各品种ODO数量有小幅波动,但平均数与成熟果实中的最终种子数基本一致,表明种子数量在花后35d胚珠明显分化时已确定。品种间的ODO总体发育趋势和最后大小基本一致。DLO发育启动时间晚、发育时间更短,其最终大小仅约成熟种子的1/10~1/6。

柑橘CitCEP基因家族的鉴定及对逆境和激素的响应

【目的】基于全基因组鉴定分析柑橘CEP基因(CitCEPs)家族成员,了解各成员的分类进化关系,研究各基因成员在不同组织中的表达特异性以及对激素和非生物胁迫的响应,为进一步研究CEP基因家族的生物学功能打下基础。【方法】利用BLASTp基于Phytozome数据库鉴定柑橘CEP家族成员,采用GSDS、Prot Scale Tool、EXPASY、CLUSTALX、MEGA6.0、plant CARE、Cello等软件绘制家族成员基因结构图;分析预测蛋白的相对分子质量与等电点等理化性质;构建系统进化树及亚细胞定位预测等,利用实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测柑橘CEP基因家族各成员在‘资阳香橙’(‘Citrus junos Ziyang’)不同处理下的瞬时表达情况。【结果】柑橘CEP基因家族由11个成员组成,其中CitCEP10和CitCEP11含1个内含子,其余成员均无内含子;该基因家族成员均含有SPGV/IGH保守结构域序列,其预测蛋白均为亲水性蛋白,亲水性最强的氨基酸其值为3.711,亲水性最弱的氨基酸其值为-2.778;亚细胞定位预测结果显示该基因家族成员位于细胞不同位置,其中CitCEP1、CitCEP2、CitCEP4、CitCEP5、CitCEP6、CitCEP8定位于细胞外,CitCEP3和CitCEP7在细胞外和线粒体中均存在,CitCEP9位于细胞核中,CitCEP10在细胞质膜上,而CitCEP11位于线粒体和细胞核中;聚类分析发现,该家族成员分布于不同的分支中,分别与拟南芥CEP不同成员聚在一起,表明柑橘CEP成员间具有不同生物功能。表达分析显示,CitCEP2主要在茎、叶和子叶中表达,CitCEP3主要在根和子叶中表达,而CitCEP10和CitCEP11主要在果皮中表达,其余成员在上述组织中表达极低或不表达,体现了不同成员间组织特异性的差异。在干旱条件下,CitCEP2表达下调,CitCEP3、CitCEP10和CitCEP11的相对表达量均逐渐上调;而在盐胁迫下,CitCEP2、CitCEP10的响应模式与其所对应的干旱胁迫类似,CitCEP3和CitCEP11则呈现先升后降趋势。在乙烯(ETH)、脱落酸(ABA)处理下,CitCEP2的表达量明显受到抑制,而在茉莉酸甲酯(Me JA)、水杨酸(SA)、生长素(IAA)、赤霉素(GA3)处理下均表现为先上升、后下降的趋势;在6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、IAA、GA3、ABA处理下CitCEP3也表现出类似趋势。CitCEP10在ETH处理下表达量显著上升,在6-BA、SA、ABA处理下表达量呈现先下降后上升趋势,而在Me JA、IAA、GA3处理中无明显规律。CitCEP11在ETH、Me JA、SA、IAA、GA3、ABA处理下表达均呈现下调趋势,与CitCEP3在ETH、SA处理下的表达模式类似。在6-BA处理下,CitCEP11表达呈现先下降后上升趋势。【结论】从柑橘全基因组上鉴定出了11个CitCEP基因成员,各成员均为亲水蛋白,并含有SPGV/IGH保守结构域,位于细胞中不同位置。在不同逆境和激素处理下,CitCEP2、CitCEP3、CitCEP10和CitCEP11呈现不同程度的响应,而其余成员响应不明显或未响应。推测CitCEP2、CitCEP3、CitCEP10与CitCEP11在柑橘生长发育和逆境响应过程中可能起着重要作用。

塔罗科血橙果实内裂与营养元素含量及品质的关系初探

通过研究塔罗科血橙果实内裂与树体不同器官组织的氮、磷、钾、钙、硼等含量及果实品质的关系,为减轻塔罗科血橙果实内裂和改善果品质量提供技术支撑与理论依据。以10年生枳橙砧塔罗科血橙为试材,于果实成熟期测定果实不同内裂程度类型(分正常果HF、轻度内裂果SlF、重度内裂果SeF 3种类型)的果皮、果肉、对应枝条和叶片的氮、磷、钾、钙、硼等含量以及果实外观与内在的品质指标,分析不同内裂程度各器官组织的氮、磷、钾、钙、硼含量与果实质量差异及其可能原因。塔罗科血橙枝条氮含量高低顺序为SlF>HF>SeF,磷含量SlF>SeF>HF,钾含量HF>SlF>SeF;不同内裂类型的叶片和果皮氮、磷、钾含量差异均不显著;果肉氮含量SeF显著低于SlF和HF,磷、钾含量差异均不显著。不同内裂类型塔罗科血橙的枝条、叶片、果皮的钙、硼含量高低顺序规律相同,均为HF>SlF>SeF;果肉钙含量HF>SlF>SeF,而果肉硼含量SeF>SlF>HF。单果重和果皮重大小顺序均为HF>SlF>SeF;随着果实内裂程度的增加,果面颜色逐渐变黄,果皮逐渐变薄,硬度逐渐降低,而果实可溶性固形物、固酸比和花色苷含量有所增加。初步结果显示,正常果与内裂果的钙、硼含量及果实品质均有显著差异,果皮中钙、硼含量高的果实不容易发生内裂,但果肉硼含量高的果实内在品质稍好。钙、硼等营养水平是否影响塔罗科血橙果皮、果肉等相关酶活性,从而进一步影响果胶含量、果皮强度与延展性等,还需要进一步系统深入开展钙、硼等营养元素调控研究,为科学合理调控塔罗科血橙不同器官组织的钙、硼等营养水平以及减轻果实内裂提供理论依据与技术支持。

柑橘采前落果与果实不同部位内源激素含量关系分析

采前落果是影响部分柑橘品种产量的一项重要因素,为了探讨采前落果与果实内源激素含量及激素间相对比例的关系,选择采前落果有差异的4个柑橘品种,在生理成熟后的3个时间点,用HPLC法对种子、果肉、果皮、整果和果柄的内源激素含量进行测定。结果表明,各品种不同部位内源激素含量差异较大,果皮和果柄中所测激素含量较其他部位高;不同品种相同部位激素含量存在较大差异,且单一激素含量并不能准确体现与采前落果的关系。在采前落果较轻的品种中, ABA在各部位含量一般较低,而ZT、GA_3、IAA无一致表现;均值化处理后的[(ZT+IAA+GA_3)/ABA]比值在果皮和果柄中较高,且与落果较重的品种有明显差异,可能是反映采前落果更有效的指标。果皮和果柄可能是观测和分析采前落果更有效的部位。