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颠茄精氨酸脱羧酶基因的克隆与表达分析
被引量:
5
1
作者
王中平
秦白富
+5 位作者
强玮
邱飞
侯艳玲
陈敏
兰小中
廖志华
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第15期2734-2740,共7页
目的克隆颠茄Atropa belladonna精氨酸脱羧酶(arginine decarboxylase,ADC)基因并进行生物信息学、组织表达谱和诱导谱分析。方法以颠茄总RNA反转录的cDNA为模板,采用RACE技术克隆颠茄ADC基因的全长cDNA序列,利用BLAST和PBIL等在线工具...
目的克隆颠茄Atropa belladonna精氨酸脱羧酶(arginine decarboxylase,ADC)基因并进行生物信息学、组织表达谱和诱导谱分析。方法以颠茄总RNA反转录的cDNA为模板,采用RACE技术克隆颠茄ADC基因的全长cDNA序列,利用BLAST和PBIL等在线工具进行生物信息学分析,采用实时定量PCR(q RT-PCR)技术对ADC基因进行组织表达谱和诱导谱分析。结果克隆到2个ADC基因,分别命名为AbADC1(登录号KT802752)和AbADC2(登录号KT802751)。AbADC1基因cDNA全长为2 817 bp,编码712个氨基酸残基;AbADC2基因cDNA全长为2 992 bp,编码715个氨基酸残基。蛋白质序列比对表明,AbADC1与马铃薯Solanum tuberosum ADC的相似性较高,为89%;AbADC2与曼陀罗Datura stramonium ADC的相似性较高,为90%。q RT-PCR检测结果表明,AbADC1在须根中的表达量最高,而AbADC2在主根中的表达量最高;AbADC1和AbADC2均不受盐胁迫响应,AbADC2受低温胁迫响应。结论首次克隆并获得了2条颠茄ADC基因全长序列,为进一步研究颠茄托品烷类生物碱的代谢合成奠定了基础。
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关键词
颠茄
精氨酸脱羧酶
基因表达
托品烷类生物碱
总RNA
CDNA
原文传递
天仙子中参与托品烷生物碱生物合成的ArAT基因的克隆及功能鉴定
被引量:
1
2
作者
李笑
强玮
+4 位作者
邱飞
陈敏
兰小中
廖志华
刘小强
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期172-179,共8页
托品烷类生物碱是临床上广泛应用的抗胆碱药物,其生物合成涉及到苯丙氨酸的转氨基反应。根据天仙子(Hyoscyamus niger)侧根和叶的转录组数据,筛选到3条功能注释为芳香族氨基酸氨基转移酶的基因,命名为HnArAT1、HnArAT2和HnArAT3。通过...
托品烷类生物碱是临床上广泛应用的抗胆碱药物,其生物合成涉及到苯丙氨酸的转氨基反应。根据天仙子(Hyoscyamus niger)侧根和叶的转录组数据,筛选到3条功能注释为芳香族氨基酸氨基转移酶的基因,命名为HnArAT1、HnArAT2和HnArAT3。通过序列同源性分析,发现HnArAT3与颠茄的AbArAT4的氨基酸序列同源性最高,两者为直系同源。组织表达谱显示,HnArAT3基因在根中特异性表达,与其他3个合成途径基因(PMT、TRI和H6H)表达模式相同。用病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法在天仙子植株中鉴定HnArAT3的功能,对感染了病毒的植株,用实时荧光定量PCR检测基因的表达量,HPLC法测定托品烷类生物碱的含量。结果表明,在pTRV2-HnArAT3干扰的植株中,HnArAT3基因的表达量有显著下降,3种托品烷类生物碱莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪碱含量也有显著的降低。以上结果表明HnArAT3是天仙子中参与托品烷类生物碱生物合成的苯乳酸支路途径基因。HnArAT3基因的克隆为进一步研究托品烷类生物碱的生物合成和代谢调控奠定了基础,也为开展托品烷类生物碱的代谢工程研究提供了新的候选靶基因。
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关键词
天仙子
芳香族氨基酸氨基转移酶
病毒诱导的基因沉默
托品烷类生物碱
原文传递
题名
颠茄精氨酸脱羧酶基因的克隆与表达分析
被引量:
5
1
作者
王中平
秦白富
强玮
邱飞
侯艳玲
陈敏
兰小中
廖志华
机构
西南大学生命科学学院三峡库区教育部生态环境教育部重点实验室
西南大学
西藏农牧
学院
药用植物联合研发中心
中山
大学
生命科学
学院
西南大学
药
学学
院
西藏
大学
农牧
学院
出处
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第15期2734-2740,共7页
基金
教育部新世纪人才支持计划(NCET-12-0930)
国家自然科学基金项目(31370333)
+1 种基金
重庆市科技攻关项目(CSTC2012GGYYJS80013)
西南大学中央高校基本科研业务费专项(XDJK2013A024)
文摘
目的克隆颠茄Atropa belladonna精氨酸脱羧酶(arginine decarboxylase,ADC)基因并进行生物信息学、组织表达谱和诱导谱分析。方法以颠茄总RNA反转录的cDNA为模板,采用RACE技术克隆颠茄ADC基因的全长cDNA序列,利用BLAST和PBIL等在线工具进行生物信息学分析,采用实时定量PCR(q RT-PCR)技术对ADC基因进行组织表达谱和诱导谱分析。结果克隆到2个ADC基因,分别命名为AbADC1(登录号KT802752)和AbADC2(登录号KT802751)。AbADC1基因cDNA全长为2 817 bp,编码712个氨基酸残基;AbADC2基因cDNA全长为2 992 bp,编码715个氨基酸残基。蛋白质序列比对表明,AbADC1与马铃薯Solanum tuberosum ADC的相似性较高,为89%;AbADC2与曼陀罗Datura stramonium ADC的相似性较高,为90%。q RT-PCR检测结果表明,AbADC1在须根中的表达量最高,而AbADC2在主根中的表达量最高;AbADC1和AbADC2均不受盐胁迫响应,AbADC2受低温胁迫响应。结论首次克隆并获得了2条颠茄ADC基因全长序列,为进一步研究颠茄托品烷类生物碱的代谢合成奠定了基础。
关键词
颠茄
精氨酸脱羧酶
基因表达
托品烷类生物碱
总RNA
CDNA
Keywords
Atropa belladonna L.
arginine decarboxylase
gene expression
tropane alkaloids
total RNA
cDNA
分类号
R282.12 [医药卫生—中药学]
原文传递
题名
天仙子中参与托品烷生物碱生物合成的ArAT基因的克隆及功能鉴定
被引量:
1
2
作者
李笑
强玮
邱飞
陈敏
兰小中
廖志华
刘小强
机构
西南大学生命科学学院
西南大学
-西藏农牧
学院
药用植物联合研发中心
西南大学
药
学学
院
西藏
大学
农牧
学院
出处
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期172-179,共8页
基金
国家863计划资助项目(2011AA100605)
国家自然科学基金资助项目(31370333)
+2 种基金
教育部新世纪优秀人才计划资助项目(NCET-12-0930)
中央高校基本科研业务费专项资助项目(XDJK2013A024)
中央高校基本业务费专项资助项目(XDJK2014C064)
文摘
托品烷类生物碱是临床上广泛应用的抗胆碱药物,其生物合成涉及到苯丙氨酸的转氨基反应。根据天仙子(Hyoscyamus niger)侧根和叶的转录组数据,筛选到3条功能注释为芳香族氨基酸氨基转移酶的基因,命名为HnArAT1、HnArAT2和HnArAT3。通过序列同源性分析,发现HnArAT3与颠茄的AbArAT4的氨基酸序列同源性最高,两者为直系同源。组织表达谱显示,HnArAT3基因在根中特异性表达,与其他3个合成途径基因(PMT、TRI和H6H)表达模式相同。用病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法在天仙子植株中鉴定HnArAT3的功能,对感染了病毒的植株,用实时荧光定量PCR检测基因的表达量,HPLC法测定托品烷类生物碱的含量。结果表明,在pTRV2-HnArAT3干扰的植株中,HnArAT3基因的表达量有显著下降,3种托品烷类生物碱莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪碱含量也有显著的降低。以上结果表明HnArAT3是天仙子中参与托品烷类生物碱生物合成的苯乳酸支路途径基因。HnArAT3基因的克隆为进一步研究托品烷类生物碱的生物合成和代谢调控奠定了基础,也为开展托品烷类生物碱的代谢工程研究提供了新的候选靶基因。
关键词
天仙子
芳香族氨基酸氨基转移酶
病毒诱导的基因沉默
托品烷类生物碱
Keywords
Hyoscyamus niger
aromatic amino acid aminotransferase
virus induced gene silencing
tropane alkaloids
分类号
R931 [医药卫生—生药学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
颠茄精氨酸脱羧酶基因的克隆与表达分析
王中平
秦白富
强玮
邱飞
侯艳玲
陈敏
兰小中
廖志华
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2016
5
原文传递
2
天仙子中参与托品烷生物碱生物合成的ArAT基因的克隆及功能鉴定
李笑
强玮
邱飞
陈敏
兰小中
廖志华
刘小强
《药学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
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