血清对水牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎发育的影响

从屠宰场收集了本地水牛55头、黑白花奶牛22头的卵巢共获卵泡847枚,平均每个水牛卵巢回收3.67枚可用卵母细胞,约为黑白花奶牛(10.23枚/头)的1/3。试验分别采用添加与不添加血清的培养液体外成熟培养水牛卵母细胞,结果二者的成熟率无明显毒性差异(58.23%对56.67%),但体外受精后早期胚胎发育的8-细胞率有显著差异(35.4%对23.0%),表明体外成熟液中有无血清对水牛卵母细胞体外成熟率没有影响,但血清对卵母细胞的早期胚胎发育有重要影响。进一步比较成熟液中不添加血清但在受精液及胚胎液中添加血清和在各个阶段均有血清参与的早期胚胎发育率(8-细胞率),表明二者差异不显著(33.8%对35.4%)。经无血清成熟培养液培养的成熟卵母细胞可以经孤雌激活后得到早期胚胎(4细胞)。

小鼠不同类型孤雌激活卵的形成及其孤雌胚发育状况的研究

注射hCG 18h后收集小鼠卵母细胞,采用不同试剂和作用不同时间对其进行激活,观察不同类型激活卵的形成情况及孤雌胚的发育状况,并对单倍体孤雌胚进行了核型分析。结果表明:1)几种激活方法均可得到均质单倍体、嵌合单倍体、1个原核(1PN)的杂合二倍体和2个原核(2PN)的杂合二倍体4种孤雌激活类型。乙醇及Srcl_2单独激活后出现单倍体的比率较高;而乙醇联合6-DMAP以及Srcl_2联合CB激活后出现二倍体的比率较高;2)10%的乙醇单独作用10min,卵母细胞激活率最高,达到63.3%;在激活卵的原核类型上,2-细胞(嵌合单倍体)的比率随着乙醇刺激强度的增加而增加,但乙醇单独激活后过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率较差;3)10%的乙醇处理5min后染色观察发现出现2细胞嵌合单倍体的比例较高,但接着用6-DMAP分别处理2、4、6h,跟踪观察发现杂合二倍体类型出现比率随时间延长而升高,处理6h后出现2PN杂合二倍体比率最高,且过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率也显著高于乙醇单独激活,但嵌合单倍体数量较不加6-DMAP时却减少;4)10%的乙醇、2mmol/L的6- DMAP联合5μg/mL的CB处理6h后,过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率与不加CB比较差异不显著;5)10mmol/L的Srcl_2单独及联合CB分别作用2、4h均能有效激活小鼠卵母细胞,单独及联合CB作用4h的激活率最高,两者差异不显著;在激活卵的原核类型,Srcl_2单独激活后出现单倍体类型的比率较高,而联合CB后出现二倍体的比率较高,且过二细胞阻滞率及桑葚胚的发育率与Srcl_2单独作用相比差异显著;6)先Srcl_2处理1h后染色观察发现形成均质单倍体的比例较高,但接着用CB分别处理1、2h,跟踪观察发现杂合二倍体类型出现比率大大提高,同时发现均质单倍体类型数目反而有所减少。结论:小鼠卵母细胞孤雌激活类型与不同激活试剂有关;不同类型激活卵的数目与激活剂浓度及作用时间有关;6-DMAP和CB有利于卵母细胞激活后形成二倍体孤雌胚;二倍体孤雌胚的发育情况较单倍体孤雌胚要好;嵌合单倍体激活卵可能由于卵裂球融合而形成二倍体激活卵;单倍体孤雌胚在8-细胞期开始出现二倍体核型,孤雌胚的核型中还出现较高比率的非整倍体。

水牛输卵管上皮细胞的培养

在水牛体外胚胎生产过程中,胚胎发育阻滞现象较为普遍,严重影响了体外生产胚胎的效率.

体细胞重编程逆转为干细胞的研究进展

目前细胞和发育生物学上的研究成果为生物医学研究提供了广泛的前景.将完全分化的细胞重编程,不经过胚胎逆转为多能干细胞状态,这点燃了再生医学应用的新希望,这一成果从法律、道德、伦理等不同方面被人们所接受.通过体细胞克隆胚胎获得干细胞所面临的破坏胚胎的伦理限制,促使研究者去寻求将分化细胞重编程逆转为干细胞的新方法.主要论述了体细胞重编程的原理、过程及不经过胚胎逆转为多能干细胞的方法.

昆明系小鼠饲养层细胞制备条件的优化

通过分离不同胚龄的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),对MEF进行连续传代培养,并对MEF不同的消化时间进行探讨,研究影响小鼠胚胎成纤维细胞分离与培养的因素。结果表明,分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄是12.5 d^14.5 d;37℃条件下,用2.5 g/L胰蛋白酶作用PMEF,作用时间不应超过15min;离散贴壁的成纤维细胞,作用时间以2 min^3 min为宜;MEF在第2代~第5代增殖旺盛,7代以后细胞出现急剧下降。所以选择第3代MEF是制做饲养层的最佳时机。MEF分离方法简单,来源方便,增殖迅速,是用于胚胎干细胞分离培养的有效培养体系。

羊血涂片五种染色方法的比较

血涂片的显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值[1-3]。近年来，随着血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器检查结果的简易方法。血涂片的制作是一个基本实验操作，制作出染色清晰、对比鲜明的血涂片是人们一直追求的目标。染色的好坏固然与涂片的好坏有关，但染色方法的诜择对染色效果县军关莺要的。

雷达微波辐射对精子穿透去透明带金黄地鼠卵能力与顶体酶活性的影响

雷达对人体的危害主要是雷达发射机中磁控管产生的高功率微波（HPM）辐射。睾丸和附睾是微波辐射生物效应的敏感器官之一^[1]，微波辐射对精子密度和精子活动能力及形态学有一定的影响^[2-4]。本研究以与雷达近距离接触的海员为研究对象，

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素。本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH+LH→不含激素中培养48h(培养第20～22h后换液),并于成熟培养的第24h(未换液)、48h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况。实验表明:1)在IVM的前24h,添加FSH+LH组的GVⅣ期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著(8.99%vs17.19%,P>0.05);2)在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;3)FSH+LH培养24h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24h后转入添加LH组(64.36%vs20.45%、36.62%、41.98%,P<0.05)。

三峡库区肉牛生产存在的问题及其对策

在三峡库区大力发展草食家畜产业,符合退耕还林还草和农村产业结构调整的政篆。然而,库 区内的畜牧业养殖存在着品种、繁殖、营养等方面的问题,这严重制约了该地区畜牧业的发展。笔者在 调查后对其问题进行分析,并提出相关的对策。

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞生发泡染色质构型和卵母细胞成熟能力的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素。本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH+LH不含激素中培养48h(培养第20～22h后换液),并于成熟培养的第24h(未换液)、48h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况。实验表明:(1)在IVM的前24h,添加FSH+LH组的GVIV期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著(8.99%比17.19%,P>0.05);(2)在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;(3)FSH+LH培养24h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24h后转入添加LH组(P<0.05)。