大宁河云南盘鮈的胚胎发育初步研究

为了系统观察云南盘鮈（Discogobio yunnanensis）胚胎发育过程和各时期特征,试验采用干法人工授精获得受精卵,然后用显微镜进行观察。结果表明：云南盘鮈成熟卵为球形,黄色,沉黏性,卵径为（2.76±0.16）mm,卵膜遇水膨胀后卵膜径为（4.62±0.36）mm。在水温（18.2±0.5）℃条件下孵化,受精后2小时30分钟胚盘鮈隆起,3小时20分钟进入卵裂期,9小时15分钟进入囊胚期,22小时57分钟进入原肠胚期,40小时7分钟进入神经胚期,45小时42分钟进入器官形成期。受精后96小时开始出膜;受精后131小时30分钟,当积温达到2 535.82℃·h时,50%仔鱼出膜;受精后164小时仔鱼全部出膜。初孵仔鱼平均全长为（10.06±0.26）mm。

黄颡鱼源维氏气单胞菌Aha和gyrB基因双重PCR检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测黄颡鱼源维氏气单胞菌(A.veronii)的方法,本研究根据A.veronii菌株RC110724黏附素基因(Aha)和促旋酶B亚单位基因(gyrB)序列设计引物,经条件优化建立了A.veronii的双重PCR检测方法。结果显示该方法可以同时扩增出A.veronii 419 bp和745 bp两条特异性的片段,而对嗜水气单胞菌、迟缓爱德华菌、副溶血性弧菌、麦氏弧菌、荧光假单胞菌、金黄色葡萄球菌、柱状黄杆菌、肺炎克雷伯氏菌、无乳链球菌、舒伯特气单胞菌扩增结果为阴性;该方法对A.veronii标准株ATCC35624和RC110724基因组DNA和菌体检测下限分别为6.6×10^(-3)ng/μL和3.2×10~2cfu/mL。利用建立的双重PCR方法对30份临床样品进行检测,结果与细菌传统分离鉴定符合率为100%。同时,双重PCR可以检出菌株RC110724人工感染的黄颡鱼肝、脾和肾组织中的细菌DNA,对肝和脾脏组织的样品检测效果最好。本研究建立的双重PCR检测方法特异性好,具有较高的检测灵敏性,可用于黄颡鱼等A.veronii感染病例的快速诊断和流行病学监测。