寡核苷酸芯片研究结核分枝杆菌临床株和无毒株诱导的巨噬细胞U937凋亡相关基因的差异表达

结核病仍然是人类健康的主要威胁 ,结核分枝杆菌诱导的巨噬细胞凋亡是宿主防御反应之一 ,研究凋亡相关基因的差异表达有助于认识结核分枝杆菌致病机理和发现新的药物靶标。利用包括 192 0 0个基因或基因片段的DNA芯片研究巨噬细胞株U93 7对临床和实验室菌株感染的差异表达 ,Northernblotting和RT PCR验证了芯片研究结果。MtbH3 7Rv感染下调bcl 2 ,vitaminD受体、干扰素调控因子 3、细胞色素氧化酶C表达 ,幅度分别为 2 ,3 ,3 ,2 5 倍 ,临床菌株感染上调SOD2、SOD3、丝氨酸蛋白酶、toll like受体 2、signaltransducerandactivator (STAT1)、hy poxia induciblefactor 2 2等表达 ,幅度分别为 2 9 ,2 5 ,2 5 ,2 2 ,2 4 ,5 9 倍。结果提示 ,临床菌株感染更多促进凋亡 ,限制宿主的杀灭机理。

结核病患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ水平与DNA芯片研究

目的探讨结核病(TB)患者血清肿瘤坏死因子(TNF)的可溶性受体(sTNFRⅠ)水平与细胞模型转录谱研究中肿瘤坏死因子受体Ⅰ水平的关系。方法用ELISA法检测37例TB患者及25名正常人血清中sTNFRⅠ水平。用DNA芯片分析结核分枝杆菌感染前后人巨噬细胞TNFRⅠ的表达水平。结果①37例TB患者的sTNFRⅠ浓度均高于正常对照组(x—±s值分别为1 080.4±174.1 ng/L和653.2±65.3 ng/L,P<0.05)。②DNA芯片研究发现,感染临床分离菌株后,巨噬细胞的TNFRⅠ的转录表达提高2倍,感染无毒株的巨噬细胞没有检测到TNFRⅠ的表达变化。结论TB患者血清s TNFRⅠ为高水平,而且与利用DNA芯片在转录水平研究结核分枝杆菌-巨噬细胞模型得到的数据有相关性。这提示,DNA芯片研究结核分枝杆菌-巨噬细胞模型的结果对临床检测有一定的预测性。

异烟肼作用分子机制与新型药物靶标发现

异烟肼是前体药物 ,katG参加激活 ,但发挥作用具体活化形式有待研究。代谢标记和蛋白质组学研究发现与异烟肼作用有关的结核分枝杆菌分子包括InhA ,AcpM ,KasA ,AhpC ,Ag85复合物等。这些分子可能是异烟肼的靶标 ,也与细菌耐异烟肼有关。基因组芯片研究异烟肼作用后差异表达的基因 ,发现脂肪酸合成途径的 10多个基因与其有关。异烟肼的作用机制比较复杂 ,目前关于其靶标尚无定论。有关研究局限在细菌方面 ,有待从宿主和细菌两个方面进行研究。

结核分枝杆菌感染对人巨噬细胞离子通道及其调控元件转录表达的影响

为研究人巨噬细胞的离子通道及其调控元件是否参与了抗结核分枝杆菌感染免疫 ,利用表达谱芯片技术研究细菌感染后宿主巨噬细胞基因的表达情况。在全局表达谱分析的基础上 ,重点分析了离子通道及其调控元件的表达 ,并比较无毒株和临床分离有毒株在诱导离子通道及其调控元件表达方面的差异。结果表明 ,细菌感染影响离子通道及其调控元件基因的表达 ,涉及的离子通道包括钾通道、钠通道、氯通道、钙通道 ,差异表达的调控元件包括G蛋白、G蛋白偶联受体、蛋白质激酶和磷酸化酶 ;临床株感染影响的离子通道及其调控元件较无毒株广泛和丰富。这些观察结果提示 ,离子通道及其调控元件参与了宿主细胞对感染细菌的免疫应答 ,有关离子通道及其调控元件在抗结核免疫中的作用有待进一步研究。

致病钩端螺旋体特异消减片段的序列测定与分析

对24个已鉴定的赖型致病钩端螺旋体特异消减片段进行DNA序列测定和生物信息学分析.结果显示,片段两端皆含有AluⅠ酶切位点,片段大小为149～1506bp,平均480bp,GC含量平均为36 63%.其中6个序列无任何同源匹配序列,提示可能来自新基因;18个同源序列可分为两类:与外膜蛋白或假想蛋白相关,与生化代谢修饰相关的酶.在Genbank中登记其中20个序列,序列号分别为AF300873-AF300877,AF325807-AF325821.这些基于生物信息学的功能预测,将有助于在此基础上进行相关的基因克隆鉴定、表达分析及功能验证.