香石竹ACC氧化酶基因的克隆及其正义反义表达载体的构建

利用在Genebank上已报道的香石竹ACC氧化酶(ACO)基因的cDNA序列设计特异引物,以香石竹品种‘MASTER’的cDNA为模板进行PCR扩增,克隆香石竹ACC氧化酶(ACO)基因。测序结果显示,克隆基因的序列与报道序列完全一致。将克隆的ACC氧化酶(ACO)基因分别连接到植物表达载体PBI121启动子CaMV 35S的上游及下游,构建香石竹ACC氧化酶(ACO)基因的正义表达载体PBI121-ACO及反义表达载体PBI121-anti ACO。经PCR鉴定,基因已成功构建到表达载体上。为香石竹抗衰老基因工程育种奠定了基础。

菜豆几丁质酶、烟草葡聚糖酶基因的分离克隆及双价表达载体的构建

几丁质酶基因(Chitinase,Chi)和葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase,Glu)具有协同抗真菌作用,根据GenBank号M13968,X53600分别设计引物,经RT-PCR扩增,克隆菜豆Chi基因和烟草Glu基因,将两个目的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos,然后串联在一起共同组建于一个表达载体pBI121中,重组表达质粒经过限制性酶切分析鉴定,结果表明含有双价抗真菌基因的植物重组表达载体已构建成功。为非洲菊、香石竹等花卉抗真菌基因工程育种奠定了基础。