牦牛胚胎性别鉴定PCR反应体系的建立

研究旨在建立牦牛胚胎性别鉴定准确、可靠的PCR反应体系及研究切割取样对胚胎发育能力的影响。根据牦牛SRY和HSL基因序列分别设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物和2对引物作为内标引物,通过优化PCR反应条件,对已知性别牦牛血液基因组DNA和牦牛杂种胚胎DNA采用巢式PCR进行性别鉴定。结果表明,血液样本性别鉴定与实际性别完全相符,准确率100%。从早期胚胎取8个细胞进行性别鉴定,结果雄性为45.8%(11/24),雌性为54.2%(13/24),取样后胚胎发育率为56.7%。结果说明已成功建立牦牛胚胎性别鉴定的PCR体系。

牦牛ZP3基因的克隆及蛋白质结构的预测

本研究对牦牛ZP3基因的编码区进行了克隆,在此基础上对ZP3蛋白的分子结构预测,为研究牦牛受精生物学提供基础。根据GenBank中普通牛的ZP3核苷酸序列设计特异性引物,以牦牛卵巢组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增牦牛ZP3基因cDNA序列(GenBank登录号为GQ856646),利用DNAMAN生物软件进行核苷酸和氨基酸序列分析、蛋白质专家系统ExPASy进行ZP3蛋白质分子结构预测。结果表明,扩增出的牦牛ZP3基因编码序列长1 266 bp,编码421个氨基酸。牦牛与牛、猪、狗、人、鼠和鸡ZP3基因核苷酸相应序列的同源性分别为98.42%、96.73%、79.67%、78.71%、69.15%和56.61%,氨基酸同源性分别为98.10%、83.85%、74.24%、70.26%、62.62%和46.12%,符合物种进化规律。预测的ZP3蛋白二级和三级结构显示它是一个具有22个氨基酸信号肽的亲水性β-桶状跨膜蛋白。牦牛ZP3基因编码区的成功克隆,为进一步研究该基因的结构与功能及其在受精过程中的作用提供了基础。

乐至黑山羊FSHR第10外显子的SNP研究

分别以高繁品系和快长品系的乐至黑山羊母羊为实验材料,以FSHR基因的第10外显子的1487~1717bp为目的片段进行SNP检测.采用PCR方法扩增目的片段,用PCR-SSCP法对扩增片段进行单核苷酸多态性分析.结果表明,乐至黑山羊FSHR基因第10外显子不存在SNP位点,该片段与乐至黑山羊高繁殖力性状无相关性.

汶川小型兽类体表寄生虫调查研究

目的初步调查5.12地震灾后四川省汶川映秀镇小型兽类体表寄生虫.方法 2011年1月采用夹夜法和笼捕法捕获样区小型兽类,通过毛刷反复疏检,并用镊子逆毛检取捕获鼠体表寄生虫,然后按形态学分类方法进行鉴定.结果共捕获8只小型兽类,隶属2目2科、3属、4种.体表寄生虫隶属2纲5目,其中昆虫纲中有蚤目1属、1种,虱目2科3种,鞘翅目,虱啮目,蛛形纲中有蜱螨目1目、2股.褐家鼠体表寄生虫种类繁多,包括螨、蚤、虱、鞘翅目和虱啮目5种类型,其中褐家鼠革螨指数与蚤指数分别为12.5和0.75.结论所有小型兽类都发现体表寄生虫,其中褐家鼠在捕获小型兽类中是优势种,体表寄生虫丰富度和指数都较高,应引起密切关注.

牦牛BLG基因5’调控成分的克隆及序列分析

目的:克隆牦牛β-乳球蛋白(BLG)基因5’调控成分(3.5kb)。方法:利用PCR方法克隆了牦牛BLG基因5’侧翼区,并进行生物信息学分析表明。结论:获得了3.5kb的BLG基因5’调控成分,其中包括5’侧翼区(2 472bp),第一外显子及第一内含子(1 066bp)。该序列与牛、绵羊和山羊的同源性分别为98.42%、89.61%和84.41%;平均GC含量为49.3%;存在一个CpG岛;可能存在一个启动子位点,位于起始密码子前-83bp处;AliBaba2.1分析发现该区域有47种潜在的转录因子结合位点,其中包括乳蛋白结合因子(MPBF)、乳腺活化因子(MAF)、糖皮质激素受体(GR)、雌激素受体(ER)、核因子1(NF-1)等结合位点,提示该调控成分可用于构建乳腺特异性表达载体。结果:成功克隆出BLG基因5’侧翼区,为构建转基因牦牛乳腺生物反应器的特异性表达载体奠定基础。

九龙牦牛IFN-tau基因的克隆测序及聚类分析

研究旨在分析九龙牦牛的干扰素-τ(IFN-tau)基因与其他属种的差异.利用PCR对九龙牦牛的IFN-tau进行克隆并测序,并将该基因的氨基酸序列与其他属种进行聚类分析.结果表明:利用基因组DNA扩增得到的九龙牦牛IFN-tau基因为588bp,与普通牛有98.25%以上的相似度.通过系统发育分析,大额牛、亚洲水牛为一支,山羊、绵羊为一支,美洲野牛、欧洲牛、九龙牦牛为一支,林麝单独为一支.