采用柱切换色谱离子阱质谱联用法研究复方丹参滴丸中丹参素及其代谢产物

采用柱切换高效液相色谱技术对人血清中的丹参素及其代谢产物进行富集和分离,利用对电喷雾离子阱多级质谱负离子模式进行结构分析。一级流动相为甲醇水(30∶70,V/V),流速0. 8mL/min;二级流动相为甲醇水甲酸铵(15∶85∶0. 5,V/V/V),流速0. 2mL/min;在人血清中检测到丹参素及其代谢产物,并探讨了主要代谢产物乙酰化的丹参素(m/z240. 2)。建立一种复方丹参滴丸中丹参素及其代谢产物在人体内代谢过程的高效分析方法。该方法可用于复方丹参滴丸中丹参素及与其结构类似的其它药物的体内代谢研究。

柱切换法在复方丹参滴丸中丹参素药代动力学研究中的应用

目的 :建立一种复方丹参滴丸 (丹参、三七、冰片 )中丹参素在人血清中高效的色谱分析技术。方法 :采用柱切换技术高效液相色谱法对人血清中的丹参素进行定性、定量分析。结果 :在本文的分析条件下 ,丹参素在 2 4h内稳定 ;线性范围为 0 .0 2 4 8～ 0 .372 0 μg ,方法平均回收率 99.0 % ,精密度和重现性的RSD %分别为 2 .4 5 % (n =5 )、1.0 1% (n =5 )。丹参素的代谢过程为“单室模型” ,半衰期为 5 .5 4h。结论 :方法简便灵敏 ,为复方丹参滴丸药代动力学研究及临床药物监测提供了方法。

复方丹参滴丸人含药血浆中三七相关代谢物的研究

建立了复方丹参滴丸人含药血浆中三七相关代谢物的固相萃取-高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析方法。采用固相萃取预处理样品,高效液相色谱梯度洗脱分离样品,电喷雾正离子模式测定,通过离子阱质谱的步进式碰撞功能,获得多级碎片信息。在人含药血浆的全扫描代谢谱中发现4个新的色谱峰。利用多级质谱提供的碎片离子信息,对其进行结构分析,推测其形成途径,发现4个色谱峰均由三七相关代谢物产生。该方法精密度、稳定性、重复性均符合测定要求,可用于对复方丹参滴丸人含药血浆中三七相关代谢物的进一步研究。

西洋参中24(R)-拟人参皂苷提取工艺研究

目的 对西洋参中24(R) 拟人参皂苷(p F11)的提取工艺进行优化。方法 以p F11为指标物质,采用高效液相色谱 离子阱质谱联用正离子全扫描法检测,经方差分析筛选p F11的提取工艺。结果 p F11的提取工艺为:8倍量70%的乙醇加热回流3次,每次3h。结论 提取溶剂浓度对西洋参中p F11提取效率的影响最大。

复方丹参方中使药冰片对君药丹参药代动力学的影响

目的探讨复方丹参方中使药冰片对君药丹参在新西兰大白兔体内药代动力学过程的影响。方法丹参组、丹参-冰片配伍组水煎液灌胃给药,液-液萃取法提取血浆中的丹参素,以对羟基苯甲酸为内标,采用离子阱质谱多级反应模式(MRM)测定兔血浆和脑脊液中丹参素的质量浓度,DAS数据处理软件计算药动学参数。结果丹参-冰片配伍给药可使丹参中丹参素的药动学参数t1/2αt、1/2β、kα、AUC(0-∞)较单独给药时明显增大,丹参素的脑血比提高。结论复方丹参方中,使药冰片可提高君药丹参中丹参素的生物利用度,减慢代谢,促进血脑屏障对丹参素的通透性。该研究可为“君-使”对药体内作用机制的研究提供思路。

SPE-HPLC研究冰片对三七皂苷R_1药代动力学影响

目的建立三七皂苷月，家兔血浆中的固相萃取-高效液相色谱（SPE—HPLC）分析方法，并研究冰片对三七皂苷R1药代动力学的影响。方法给家兔灌服三七醇提液和三七醇提液与冰片合用液，SPE-HPLC法测定三七皂苷R1的血药浓度，DAS2．0数据处理软件计算药代动力学相关参数。结果三七皂苷R1在血浆中检出限为0．563μg／mL，在0．909—54．5μg／mL^-1范围内具有良好的线性关系，平均回收率为90．9％，精密度和稳定性试验的RSD均小于10％。三七醇提液和冰片配伍后，与三七醇提液单味给药比较，三七皂苷R1药-时曲线下面积（AUC）、表观分布容积（V1／F）和消除半衰期明显增加（t1／20），而吸收半衰期（t1/2α）、最大血药浓度（Cmax）和达峰时间（Tmax）明显减小。结论冰片可促进三七皂苷R1的吸收，延长其消除，提高其生物利用度，且可有效地减小三七皂苷R1所引起的毒副作用。

复方丹参滴丸人含药血清中丹参相关代谢产物的分析

目的:研究复方丹参滴丸人含药血清中丹参相关代谢产物,推测其代谢机制.方法:柱切换-高效液相色谱法富集和分离血清样品中的代谢物,电喷雾离子阱质谱法进行检测多级质谱技术确定代谢物的碎片结构,推测其结构.结果:在人含药血清中检测到了5个新的代谢产物,分析了各代谢物的体内形成机制.结论:本研究可为复方丹参滴丸体内物质基础的研究打下基础.

复方丹参方中使药冰片对君药中的丹参素在家兔组织分布中的影响

目的:研究复方丹参方中使药冰片对君药丹参中丹参素在家兔组织分布特征的影响。方法:10%(V/V)高氯酸水溶液沉淀蛋白,上清液用乙酸乙酯萃取,高效液相色谱-离子阱质谱法测定家兔心、肝、肾及脑组织中的丹参素。结果:丹参与冰片配伍前后,丹参素在家兔组织中的分布特征由 c_肾>c_心>c_脑>c_肝转变为 c_肾>c_脑>c_肝>c_心。结论:使药冰片显著改变君药丹参中丹参素在家兔体内的组织分布特征,使丹参素从家兔心向脑中转移,该研究可为阐明冰片载药上行的理论论述提供依据。

RP-HPLC法研究广枣在家兔体内的药代动力学

目的:建立家兔血浆中没食子酸和原儿茶酸含量的反相高效液相色谱分析方法,并研究了2种成分在正常家兔体内的药代动力学。方法:给家兔灌服广枣水煎液,采用 RP-HPLC 测定广枣水提液灌胃后广枣酚酸在兔体内的血药浓度,DAS 2.0药动学软件拟合房室模型,计算药动学参数。结果:没食子酸和原儿茶酸在0.04～2.0μg·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,检出限为0.563μg·mL^(-1),平均回收率均大于95%,精密度和稳定性试验的 RSD 均小于5%;没食子酸呈二室开放模型,原儿茶酸血浆轮廓出现双峰现象,广枣药材中的未知成分含量在家兔体内明显增加。结论:该方法可用于没食子酸和原儿茶酸体内的药代动力学研究;原儿茶酸可能在胃肠中存在不同的吸收位点或存在肝肠循环。

HPLC-MS^n法筛选丹参中丹酚酸类成分的SPE预处理工艺

目的 :研究丹参药材中丹酚酸类成分的固相萃取预富集方法。方法 :使用C 1 8固相萃取柱和液相色谱 离子阱多级质谱联机检测技术 ,通过固相萃取小柱预处理样品 ,电喷雾多级质谱负离子模式全扫描检测 ,考察影响回收率的 4个主要因素 ,即泵真空度、固相萃取小柱上样量、洗脱剂用量及洗脱速率 ,利用正交实验进行萃取条件的优化。结果 :最佳萃取条件为 :真空度 0 .0 2× 1 0 6Pa ,上样量 0 .75mL ,洗脱剂用量 1 5mL ,洗脱速率 1 .0mL·s-1 。结论 :本方法操作简单 ,准确可靠 ,可作为丹参中丹酚酸类成分的前处理方法。

HPLC法测定兔血浆中丹参素、原儿茶酸和原儿茶醛

目的建立兔血浆中丹参素、原儿茶酸和原儿茶醛,同时测定高效液相色谱测定方法。方法三氯乙酸沉淀法去除血浆中的蛋白,上清液乙酸乙酯萃取,反相高效液相色谱同时测定丹参素、原儿茶酸和原儿茶醛含量。结果丹参素、原儿茶酸和原儿茶醛检出限分别为0.03,0.08,0.04μg.mL-1,线性范围分别为0.06~40.0μg.mL-1,0.16~100.0μg.mL-1,0.08~50.0μg.mL-1,高、中、低浓度的提取回收率均在82.7%~102.0%之间,日内和日间测定的相对标准偏差在0.56%~4.84%之间。结论测定方法能同时对血浆中丹参素、原儿茶酸和原儿茶醛进行测定,且具有灵敏度高和专一性强的特点,能作为其药物动力学研究方法。

降香对丹参素兔药代动力学及组织分布的影响

目的:用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)法研究使药降香对君药丹参中丹参素兔药代动力学及组织分布的影响.方法:加热回流法制备丹参单煎液及丹参-降香合煎液,以4-羟基苯甲酸为内标,丹参素为指标,HPLC-MS法测定不同采样点丹参素的血药浓度及组织中的含量,DAS2.0数据处理软件拟合房室模型并计算药代动力学参数.结果:配伍前,丹参素的t1/2α为20.8min;V1为84.5L/kg;AUC(0～∞)为119.4mg/(L.min);CL为0.42L/(min.kg).配伍后,丹参素的t1/2α为30.9min;V1为108.3L/kg;AUC(0～∞)为178.7mg/(L.min);CL为0.28L/(min.kg).降香能使丹参素组织分布特征由肾>心>脑>肝变为肾>肝>脑>心.结论:配伍后,使药降香能提高君药丹参中丹参素吸收入血的程度,使丹参素向肝、脑中转移,为阐明"君-使"对药"丹参-降香"的相使作用提供依据.

冰片对三七皂苷R1和人参皂苷Rg1,Re家兔组织分布的影响

目的:建立三七皂苷R1和人参皂苷Rg1,Re家兔组织中的固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)分析方法,并研究冰片对三七中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1,Re在家兔体内组织分布的影响.方法:空白组、三七组、配伍组家兔于服药后30 min处死,取心、肝、大脑、肺、肾组织,匀浆后取上清液2.0 mL,固相萃取法去除干扰物质,收集70%甲醇洗脱液,HPLC测定三种指标成分在各组织中的含量.结果:三种皂苷在各组织中的含量均有增加,三七皂苷R1的变化最为显著.结论:冰片可显著提高三七皂苷R1、人参皂苷Rg1,Re的在脏器组织中的分布,从而提高三七的疗效.

高效液相色谱直接衍生化法测定血清游离脂肪酸组成

目的脂肪酸摄入和代谢在高血压的发病和进展中发挥作用,但血清游离脂肪酸(FFA)组成测定方法尚未统一,本研究探讨高效液相色谱直接衍生化法测定空腹血清游离脂肪酸组成的可靠性。方法社区筛选出原发性高血压患者103例,其中肥胖患者65例,非肥胖患者38例,和血压正常个体128例,其中肥胖个体70例,非肥胖者58例,年龄35～59岁,各组饮食习惯相近。采空腹静脉血离心取上清分成两个1.5ml,用75%的乙醇60℃下除去血清中与FFA结合的白蛋白,无需常规的分离步骤,应用2-硝基苯肼盐酸盐(2-NPH.HCl)作为衍生试剂,在1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基碳化二亚胺)盐酸盐(1-EDC.HCl)的催化下,直接衍生血清中的FFA,形成不挥发的能在紫外-可见光区产生吸收的脂肪酸的肼盐衍生化物,再用磷酸缓冲液酸化增加各种脂肪酸的分离度,衍生化的脂肪酸用正己烷萃取法与其它的酰肼和干扰成分分离出来,氮气吹干后甲醇定容,应用C18反向色谱柱进样30min内洗脱分析测定。结果共测定血清中主要的9种脂肪酸,从C16:0到C22:6,未鉴定的峰少于总量的1%。脂肪酸组成以个体脂肪酸浓度表示,浓度单位μmol/L。应用C17:0作内标,各脂肪酸测定的线性范围为2.6～200.0μmol/L,回收率在87.8%～120.5%之间,重复性检验变异系数<10%,相关系数为0.973～0.999,批内RSD范围为2.78%～12.90%,批间RSD范围为为0.95%～15.4%。与血压正常个体比较,原发性高血压患者血清游离多不饱和脂肪酸(PUFA)水平降低(P=0.004),饱和脂肪酸(SFA)水平有增高趋势(P=0.06),P/S比值降低(P=0.000)。结论高效液相色谱直接衍生化法测定空腹血清FFA组成重复性、准确性良好,可作为血清游离脂肪酸组成常规检测的有用的工具。

β_2-肾上腺素受体亲和色谱及其在苦杏仁活性成分筛选中的应用

用Sepharose-沙丁胺醇亲和色谱柱从家兔肺组织中纯化得到β2-肾上腺素受体(β2-adrenoceptor,β2-AR),以大孔硅胶为载体,采用温和的化学偶联方法,将β2-AR通过共价键均匀地固载在大孔硅胶表面,用硫酸沙丁胺醇、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸肾上腺素和盐酸普萘洛尔表征β2-AR色谱柱的保留特性,从而建立了β2-AR亲和色谱方法,并将该法用于苦杏仁粗提物中活性成分的筛选.结果表明,色谱固定相上的β2-AR能保持其生物活性和选择性;苦杏仁粗提物中与该受体色谱柱有保留作用的活性成分为苦杏仁苷.与已有色谱筛选方法相比,该法具有稳定性好和选择性强的特点,可对中药中与β2-AR作用的活性成分进行快速准确筛选,可为中药等复杂体系中药物活性成分的筛选提供新途径.