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MMP13和LRP1在大骨节病患者关节软骨细胞自噬功能异常中的作用及机制研究
1
作者
成博伦
常虹
+5 位作者
文嫣
贾雨萌
刘欢
郭雄
张峰
杨正军
《中华地方病学杂志》
CAS
北大核心
2023年第8期603-611,共9页
目的探讨基质金属蛋白酶13(MMP13)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)对大骨节病患者关节软骨细胞自噬功能的影响。方法自陕西省地方病防治研究所获取4例大骨节病患者和4例对照受试者的关节软骨样本,采用免疫组织化学(IHC)法检测软骨组...
目的探讨基质金属蛋白酶13(MMP13)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)对大骨节病患者关节软骨细胞自噬功能的影响。方法自陕西省地方病防治研究所获取4例大骨节病患者和4例对照受试者的关节软骨样本,采用免疫组织化学(IHC)法检测软骨组织中MMP13和LRP1的表达水平;体外提取并培养软骨细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测软骨细胞LRP1以及自噬相关基因[自噬基因Beclin1(BECN1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)],软骨损伤相关基因[MMP13、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)],软骨细胞分化相关基因[Ⅱ型胶原α1链(COL2A1)、Y染色体性别决定区-盒转录因子9(SOX9)]的mRNA和蛋白表达水平。另提取3例大骨节病患者膝关节样本的软骨细胞,采用RNA干扰(RNAi)技术进行MMP13基因沉默实验,并采用qRT-PCR和WB法检测上述基因mRNA和蛋白表达水平。此外,采用LRP1的拮抗剂受体相关蛋白(RAP)对人正常软骨细胞(C28/I2细胞)中LRP1进行封闭,并采用qRT-PCR和WB法检测软骨细胞LRP1、自噬、分化和软骨损伤相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果IHC结果显示,大骨节病患者软骨组织表、中、深层的MMP13表达水平(1.67±0.21、0.59±0.15、0.51±0.12)均显著高于对照受试者(0.25±0.03、0.26±0.04、0.06±0.01),差异均有统计学意义(t=-11.38,P<0.001;t=-3.82、-6.26,P=0.019、0.003);LRP1表达水平(0.10±0.02、0.03±0.01、0.17±0.03)均显著低于对照受试者(1.63±0.40、0.44±0.12、0.34±0.08),差异均有统计学意义(t=6.61、5.61、3.64,P=0.003、0.005、0.022)。大骨节病患者软骨细胞中MMP13、CASP3、SOX9的mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照受试者,差异均有统计学意义(均P<0.05);LRP1、LC3、COL2A1的mRNA表达水平均显著低于对照受试者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在大骨节病患者软骨细胞中沉默MMP13基因后,LRP1、BECN1、LC3、CASP3、COL2A1和SOX9的mRNA和蛋白表达水平均无显著变化(均P>0.05)。采用RAP封闭LRP1后,软骨细胞LRP1、BECN1、LC3、MMP13、COL2A1和SOX9的蛋白表达水平均明显低于对照组(均P<0.05)。结论MMP13与大骨节病患者关节软骨细胞的自噬异常无直接联系;封闭LRP1后软骨细胞自噬相关基因BECN1、LC3的表达降低。
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关键词
大骨节病
软骨细胞
自噬
基质金属蛋白酶13
低密度脂蛋白受体相关蛋白1
原文传递
题名
MMP13和LRP1在大骨节病患者关节软骨细胞自噬功能异常中的作用及机制研究
1
作者
成博伦
常虹
文嫣
贾雨萌
刘欢
郭雄
张峰
杨正军
机构
西安交通大学医学部公共卫生学院国家卫健委微量元素与地方病研究重点实验室丝路区域地方病与健康促进协同创新中心
陕西省
地方病
防治
研究
所大骨节病克山病防治
研究
室
出处
《中华地方病学杂志》
CAS
北大核心
2023年第8期603-611,共9页
基金
国家重点研发计划 (2022YFC2503100)
国家自然科学基金 (81922059)。
文摘
目的探讨基质金属蛋白酶13(MMP13)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)对大骨节病患者关节软骨细胞自噬功能的影响。方法自陕西省地方病防治研究所获取4例大骨节病患者和4例对照受试者的关节软骨样本,采用免疫组织化学(IHC)法检测软骨组织中MMP13和LRP1的表达水平;体外提取并培养软骨细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测软骨细胞LRP1以及自噬相关基因[自噬基因Beclin1(BECN1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)],软骨损伤相关基因[MMP13、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)],软骨细胞分化相关基因[Ⅱ型胶原α1链(COL2A1)、Y染色体性别决定区-盒转录因子9(SOX9)]的mRNA和蛋白表达水平。另提取3例大骨节病患者膝关节样本的软骨细胞,采用RNA干扰(RNAi)技术进行MMP13基因沉默实验,并采用qRT-PCR和WB法检测上述基因mRNA和蛋白表达水平。此外,采用LRP1的拮抗剂受体相关蛋白(RAP)对人正常软骨细胞(C28/I2细胞)中LRP1进行封闭,并采用qRT-PCR和WB法检测软骨细胞LRP1、自噬、分化和软骨损伤相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果IHC结果显示,大骨节病患者软骨组织表、中、深层的MMP13表达水平(1.67±0.21、0.59±0.15、0.51±0.12)均显著高于对照受试者(0.25±0.03、0.26±0.04、0.06±0.01),差异均有统计学意义(t=-11.38,P<0.001;t=-3.82、-6.26,P=0.019、0.003);LRP1表达水平(0.10±0.02、0.03±0.01、0.17±0.03)均显著低于对照受试者(1.63±0.40、0.44±0.12、0.34±0.08),差异均有统计学意义(t=6.61、5.61、3.64,P=0.003、0.005、0.022)。大骨节病患者软骨细胞中MMP13、CASP3、SOX9的mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照受试者,差异均有统计学意义(均P<0.05);LRP1、LC3、COL2A1的mRNA表达水平均显著低于对照受试者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在大骨节病患者软骨细胞中沉默MMP13基因后,LRP1、BECN1、LC3、CASP3、COL2A1和SOX9的mRNA和蛋白表达水平均无显著变化(均P>0.05)。采用RAP封闭LRP1后,软骨细胞LRP1、BECN1、LC3、MMP13、COL2A1和SOX9的蛋白表达水平均明显低于对照组(均P<0.05)。结论MMP13与大骨节病患者关节软骨细胞的自噬异常无直接联系;封闭LRP1后软骨细胞自噬相关基因BECN1、LC3的表达降低。
关键词
大骨节病
软骨细胞
自噬
基质金属蛋白酶13
低密度脂蛋白受体相关蛋白1
Keywords
Kashin-Beck disease
Chondrocytes
Autophagy
Matrix metalloproteinase 13
Low-density lipoprotein receptor-related protein 1
分类号
R684.1 [医药卫生—骨科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MMP13和LRP1在大骨节病患者关节软骨细胞自噬功能异常中的作用及机制研究
成博伦
常虹
文嫣
贾雨萌
刘欢
郭雄
张峰
杨正军
《中华地方病学杂志》
CAS
北大核心
2023
0
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