成年大鼠心房成纤维细胞分离与培养方法的建立

目的探索成年大鼠心房成纤维细胞体外分离及纯化培养的方法。方法无菌条件下将大鼠心房组织剪成1mm3大小组织块,经心肌消化液(溶液终浓度为0.8g/L胰蛋白酶和0.4g/LⅡ型胶原酶混合液)多次消化,收集分离的大鼠心房成纤维细胞,通过差速贴壁分离方法纯化原代成纤维细胞,细胞生长接近于次融合状态下进行传代。倒置显微镜下观察细胞生长及形态学特点,免疫荧光法进行细胞鉴定。结果刚消化分离下来的细胞呈亮球形,轮廓清晰,单个散在或聚集成团分布,差速贴壁70min后即有大量细胞贴壁,其中细胞部分已开始伸展,轮廓逐渐模糊。4~5d可形成单层细胞,传代后的细胞呈长纺锤形或多边形。免疫荧光染色发现其抗波形蛋白(Vimentin)与抗胶原受体-2(DDR2)染色阳性,抗vWF及抗α-SMA染色阴性,鉴定为成纤维细胞。结论混合酶消化法是成年大鼠心房成纤维细胞分离培养的简便有效的方法。