高表达过氧化物酶体增殖子激活受体γ诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性

目的：研究外源过氧化物酶体增殖子激活受体（ PPAR ）γ高表达对小鼠原代肝细胞脂肪变性的影响。方法：从5～6周龄C57BL／6J小鼠分离培养原代肝细胞，分别用LacZ腺病毒（ Ad／LacZ）或PPARγ腺病毒（ Ad／PPARγ）感染细胞48 h，油红O染色检测原代肝细胞脂肪积聚情况；实时定量PCR和蛋白质印迹法分析PPARγ、成脂相关基因aP2和CideA等mRNA和蛋白表达水平。结果：原代分离培养的小鼠肝细胞透光度好，胞核圆且透亮，细胞呈圆形生长，有双核，连接成片状或岛状。用Ad／LacZ或Ad／PPARγ感染48 h后，Ad／LacZ组肝细胞几乎无脂肪积聚，而Ad／PPARγ感染肝细胞中有大量脂肪滴沉积。外源PPARγ刺激作用下，肝细胞中PPARγ、aP2、FGF21、CideA mRNA表达增加，而adiponectin mRNA表达下降（均P＜0.05）。 Ad／PPARγ感染后，PPARγ和aP2蛋白表达也增加。结论：高表达PPARγ诱导小鼠原代肝细胞脂肪变性和脂肪相关基因表达。

激活PPARα缓解PPARγ诱导的小鼠脂肪肝

目的研究PPARα激活后对PPARγ诱导小鼠脂肪肝的影响。方法以4~5周龄C57BL/6J小鼠为模型,实验分为4组：正常饮食组;0.125%Wy-14,643处理组;PPARγ腺病毒（Ad/PPARγ）注射组;先给予0.125%Wy-14,643饮食再注射Ad/PPARγ组。实验结束时,收集肝脏组织称重、照相,H＆E、油红O染色观察PPARα激活后对PPARγ诱导肝脏脂肪变性的影响。结果野生型小鼠给予PPARα激动剂Wy-14,643处理8 d,与对照组相比,处理组小鼠肝脏明显增大,呈现过氧化物酶体增殖反应;野生型小鼠给予Ad/PPARγ5 d,小鼠肝脏显著增大,出现脂肪肝;给予PPARα激动剂Wy-14,643 3 d,再给予Ad/PPARγ5 d,小鼠肝脏增大更加显著,H＆E染色、油红O染色结果显示小鼠肝脏脂肪变性明显减轻。结论激活PPARα能够缓解PPARγ诱导的小鼠肝脏脂肪变,为脂肪肝的预防和治疗提供了新的研究思路和靶点。

PPARγ及其辅激活子MED1重组腺病毒的制备与生物学功能分析

目的制备大量PPARγ与MED1腺病毒,探讨其生物学功能。方法以实验室现有的腺病毒原液为材料,用HEK293a细胞包装腺病毒,CsCl梯度离心法纯化病毒,A260法测定病毒颗粒,并通过细胞感染、小鼠活体尾静脉注射病毒等实验,用HE染色法、Real-time PCR及免疫组化法进一步鉴定病毒的生物学功能。结果获得Ad/LacZ、Ad/PPARγ和Ad/MED1,其浓度分别为2.51×1012、1.57×1012、2.59×1012 VP/mL。C57BL/6J小鼠经尾静脉注射Ad/PPARγ,小鼠出现脂肪肝,肝细胞聚集大量脂滴,且PPARγmRNA和蛋白表达显著增加。同样,用Ad/MED1感染3T3-L1细胞或给小鼠尾静脉注射Ad/MED1,MED1表达水平都显著升高。结论Ad/PPARγ、Ad/MED1及对照Ad/LacZ成功制备,为体外细胞病毒感染以及活体研究PPARγ与MED1的基因功能以及网络调控奠定了实验基础。