精神分裂症患者与饮用水锂元素水平关系及相关基因调查研究

目的:精神分裂症(SZ)是一种慢性的可致残的精神疾病,具有一定的遗传性,但其发病原因尚不清楚。本课题通过临床调研,考察锂元素与精神分裂症关系,同时从基因层面探究锂元素与精神分裂症的内在机制关系。方法:收集陕西省内的精神分裂症患者病例,采集样本血液和头发,运用ELISA和实时定量PCR技术检测血清内相关因子GSK-3β、NRG1、ErbB4、Bcl-2、CSF2RA的mRNA和蛋白的表达水平。结果:在饮水中锂元素偏低的地区,精神分裂症患者比例显著升高,且其头发内锂元素含量也显著低于(P<0.05)正常人。此外, ELISA和Real-time PCR结果表明,精神分裂症患者血清内精神营养因子NRG1及其受体ErbB4,以及炎症细胞因子CSF2RA的和mRNA蛋白水平显著升高,锂的作用靶点GSK3β以及神经保护因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量显著下降。结论 :精神分裂症的发病机制可能与区域水质内锂含量的高低相关。

低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡

目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。结果成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。结论在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。

3-HB协同bFGF诱导促进神经干细胞向神经元方向分化

目的研究3-羟基丁酸(3-HB)与bFGF或EGF协同作用对神经干细胞(NSCs)活力及分化的影响。方法分离培养孕14~15d大鼠胚胎脑皮质NSCs,以不加处理的实验组为对照,在bFGF(10ng/mL)或EGF(20ng/mL)处理条件下分别以不同浓度3-HB(0、0.02、0.2、2mmol/L)处理P3代NSCs。分别检测细胞活力,免疫细胞化学染色MAP2观察NSCs向神经元方向的分化情况,RT-qPCR检测转录因子SOX2、PAX6和神经元核定位因子NeuN的mRNA表达水平。结果3-HB协同bFGF处理NSCs能够提高NSCs的细胞活力。0.02mmol/L 3-HB处理组NSCs分化的MAP2阳性细胞比例增加,PAX6和NeuN的mRNA水平升高。外源添加bFGF的条件下,0.02mmol/L处理组3-HB促进NSCs向神经元方向分化的效果更明显。结论低浓度3-HB能够促进NSCs向神经元方向的分化,0.02mmol/L的3-HB与bFGF协同作用对NSCs向神经元方向分化的促进作用更明显,其可能通过影响SOX2、PAX6及NeuN的表达而发挥此调控作用。

美国UCLA医学教育模式对我国医学生培养的借鉴意义

通过介绍美国加州大学洛杉矶分校(UCLA)David Geffen医学院教育模式,分析比较中美医学教育差别以及目前我国医学教育的现状和不足。通过学习借鉴美国医学教学特色,寻求适合我国医学生培养的方案与对策。应深化和加强本土化教育改革,优化授课内容和课程设置,强化教学网络平台建设,提高教学权重,重视教师梯队建设,将培养精英作为教学的主要使命。

丹参酮ⅡA对癫痫慢性期小鼠齿状回颗粒细胞病理整合的影响

目的拟通过使用颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)小鼠模型,经丹参酮ⅡA(TanⅡA)干预后,阐明其对齿状回颗粒细胞病理整合的作用及其分子机制。方法使用匹罗卡品诱导小鼠癫痫持续发作(SE),TanⅡA 5 mg/kg进行干预,SE 2个月后,利用Morris水迷宫检测学习记忆能力,视频监测自发性癫痫发作,取海马进行Timm、prox-1、DCX、SynⅠ染色,并采用Western blotting检测PTEN、p-AKT、p-S6蛋白表达。结果TanⅡA降低了慢性期TLE小鼠齿状回Timm评分、SynⅠ、PSD-95、p-AKT、pS6的表达及上调了PTEN的表达,减少了颗粒细胞苔藓纤维芽发及底树突的形成,视频监测结果显示TanⅡA降低了自发癫痫Racine评分5级的发作频率。结论TanⅡA可能通过调控PTEN/AKT/mTOR通路从而有效抑制颗粒细胞苔藓纤维芽发和底树突的发生,进而改善TLE小鼠慢性期癫痫的齿状回病理结构的形成与发展,从而起到抗癫痫的作用。

大鼠脑皮质星形胶质细胞的体外优化培养及鉴定

目的旨在获得高纯度的星形胶质细胞,并对不同培养时期的细胞进行鉴定,为进一步研究奠定基础。方法常规分离新生SD大鼠大脑皮质并制备单细胞悬液,采用差速黏附加摇床震荡法对所获得的细胞进行纯化。倒置相差显微镜及HE染色观察细胞形态,GFAP免疫荧光对获得细胞进行鉴定。结果原代培养的皮质细胞从3d开始迅速增殖,9-12d即可铺满瓶底,此时细胞呈明显的分层生长,星形胶质细胞位于底层,形态多样,阳性率为（67.2±7.1）%;经过1次传代后,GFAP阳性率有所提升（84.0±6.0）%,但不能完全去除小胶质细胞及少突胶质细胞,细胞仍呈分层生长;至第3次传代后,获得大量几乎为单一种类的星形胶质细胞,其胞体较大、突起较短粗,一般2-3个,胞核圆形或椭圆形,常偏于一侧,GFAP染色呈强阳性,阳性率可达（97.6±2.4）%。结论通过差速黏附与摇床震荡相结合的方法,获得了高纯度且生长状态良好的星形胶质细胞。

缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的构建与鉴定含有5个拷贝缺氧反应元件（five copies of hypoxia responsive elements,5HRE）的缺氧调控表达的神经营养因子-3（neurotrophin-3,NT-3）的逆转录病毒载体。方法用PCR、酶切和连接等分子克隆技术将5HRE和人来源NT-3片段克隆入逆转录病毒载体pLNCX中,构建重组逆转录病毒穿梭质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP。经PT67包装细胞包装、高速离心纯化和浓缩等方法,获得逆转录病毒RV-5HRE-NT3;用逆转录病毒感染NIH 3T3细胞48h后,流式细胞仪检测并计算出病毒滴度。结果成功构建了重组逆转录病毒载体质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP,并获得相应的逆转录病毒RV-5HRE-NT3,经过高速离心纯化和浓缩后,其滴度可达9.1×10~6 cfu/mL。结论成功构建了缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体,为研究外源基因的缺氧调控特异性表达奠定了工作基础。

HRE介导的NT-3表达上调减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的在大鼠局灶性脑缺血模型中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)缺血/低氧调控表达及其对缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法将重组反转录病毒(RV-5HRE-NT3及RV-5HRE-EGFP)或0.9%氯化钠溶液(对照组)注射入大鼠脑内3 d后,用大脑中动脉线栓阻塞法(t MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。用免疫组织化学染色法和Western blot法检测NT-3的表达,用TTC染色法检测脑梗死体积,用TUNEL染色法检测细胞凋亡,用Reglodi评分法检测大鼠神经功能情况。结果大鼠t MCAO 3 d后RV-5HRE-NT3组中NT-3阳性细胞数明显高于对照组和RV-5HRE-EGFP组,且着色较深;t MCAO后第1、3、7和14天,RV-5HRE-NT3组中的NT-3蛋白表达均明显高于对照组和RV-5HRE-EGFP组(P<0.05)。在RV-5HRE-NT3组中,t MCAO 3 d大鼠脑梗死体积百分比明显减小(P<0.05),t MCAO 3和7 d后缺血半暗带凋亡细胞百分比也明显减少(P<0.05)。RV-5HRE-NT3注射可以改善大鼠t MCAO后的神经功能障碍。结论 HRE介导的NT-3低氧反应性表达上调可以减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注脑损伤。

绿茶水浸出物对PC12细胞的影响

目的探讨绿茶水浸出物对发育期神经细胞存活和增殖的影响。方法选取PC12细胞作为毒理学研究的模型,将绿茶于去离子水中100℃连续煮沸3次,留取各次煮沸后的水溶液进行过滤及冷冻干燥,继而以40倍体积无菌纯水溶解,制备绿茶水浸出物。以DMEM培养基对绿茶水浸出物进行100、200、400、800和1600倍稀释,用于处理PC12细胞。通过观察细胞形态、绘制细胞生长曲线、CCK-8试剂盒检测细胞活力、流式细胞仪检测分析细胞凋亡,Ki67免疫细胞化学染色观察细胞增殖,分析绿茶水浸出物对PC12细胞的影响。结果与低浓度(800倍及1600倍稀释)绿茶比较,较高浓度(100稀释)绿茶处理后,PC12细胞贴壁能力下降,死细胞碎屑明显增多,活细胞数量及细胞活力较对照组明显下降(P<0.05),Ki67阳性细胞比例显著降低(P<0.05),但细胞凋亡比率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度绿茶对PC12细胞的存活和增殖有显著抑制作用,建议孕期尽量减少饮用浓茶。

ME49株弓形虫定位感染昆明小鼠海马的脑组织病理观察

目的观察弓形虫定位感染昆明小鼠海马CA1区引起的脑组织病理改变。方法利用神经生物学的颅内定位注射技术,将定量(1000、2000、4000个)ME49株弓形虫滋养体,定位注射入小鼠海马CA1区(前囟后2.18 mm;矢状缝右侧1.5 mm;脑膜下深度1.2 mm),观察小鼠的发病状况以及生存时间;用Giemsa染色方法观察小鼠腹水和脑组织匀浆中弓形虫形态及其数量的变化;制作脑组织冰冻切片,分别用尼氏染色和HE染色观察小鼠海马神经组织的变化和病理改变。结果弓形虫感染组小鼠表现出明显的癫痫样抽搐、偏瘫以及精神状态变差等神经受损的症状。小鼠腹水和脑匀浆中均发现弓形虫滋养体;尼氏染色发现海马区神经元丢失和大量坏死;HE染色发现组织坏死灶以及大量炎性细胞浸润。结论定位感染ME49株弓形虫能引起小鼠海马组织的病理改变,损伤程度与感染数量相关。颅内定位注射弓形虫滋养体的方法为构建弓形虫脑病动物模型奠定基础。