自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗进展期肿瘤的初步研究

目的 :探讨自体肿瘤疫苗的作用机制及临床意义。方法 :30例进展期肿瘤病人术后 ,以自体肿瘤疫苗辅助主动免疫治疗。术后第 4周开始接种 (共 4次 ,每次间隔 7～ 10d) ;接种前 3天及 4次接种后 1w ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,测定CD+8 IFN γ+ ,CD+8 IL 10 + 细胞比例及CD+4 IFN γ+ 、CD+4 IL 10 + 细胞比例 ;同时采集血清检测血清IFN γ、IL 10水平 ;用PPD及自体抗瘤抗原做皮肤迟发型过敏反应试验 ,4 8h后测量红斑、硬结大小 (mm)。临床随访。结果 :自体免疫苗治疗后 :①血清IFN γ水平升高 ,高 (5 98± 2 4 0 )pg ml升至 (11 2 0± 4 76 )pg ml;而IL 10水平由 (2 6 0 4± 12 85 )pg ml降至 (8 12± 3 6 9)pg ml,差异有非常显著性 (P <0 0 5 )。②CD+8 IFN γ+ 双阳性细胞比例由 (3 72± 1 5 6 ) %升至 (8 0 1± 2 5 4 ) % ;CD+4 IFN γ+ 双阳性细胞比例由 (4 5 2± 1 0 8) %升至 (7 94± 2 0 6 ) %。差异有非常显著性 (P <0 0 5 )。③治疗前后病人对自体肿瘤抗原的特异性DTH反应明显增强 (P <0 0 1)。④病人耐受性良好 ,无溃疡等严重副作用发生。⑤随访结果显示 :2 2例病人无瘤生存时间超 3年 ,其中部分病人无瘤生存时间超过 5年。结论 :①自体肿瘤疫苗可激发病人特异性细胞介导的免疫反?

白血病瘤苗对荷瘤小鼠细胞免疫功能影响的研究

目的 :探讨白血病细胞疫苗主动免疫治疗在血液恶性肿瘤中的作用。方法 :建立红白血病荷瘤小鼠 ,用自制的 3种不同的白血病细胞瘤苗进行主动免疫治疗 ,用MTT比色法测其治疗 2周和 4周的小鼠Mφ和CTL的杀伤活性 ,并与对照组相比较。结果 :①随着肿瘤细胞在小鼠体内的增长 ,小鼠的细胞免疫功能受到严重抑制 ,特异性细胞免疫功能的抑制滞后于非特异性细胞免疫功能。②灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6 )的肿瘤疫苗在提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能方面 ,尤其是特异性细胞免疫功能方面优于灭活肿瘤细胞 +IFA肿瘤疫苗 ,而仅含灭活肿瘤细胞的疫苗作用不明显。结论 :灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6 )的肿瘤疫苗在血液恶性肿瘤的特异性主动免疫治疗中很有潜力。

免疫突触——共刺激作用机制研究进展

共刺激作用在T细胞的激活及信号传导过程中发挥着重要作用 ,人们一直在探讨其作用的具体方式。在第一信号存在条件下 ,当共刺激信号出现 ,也只有在共刺激信号出现时 ,通过信号传导启动细胞骨架的运动 ,从而在抗原呈递细胞和T细胞之间形成一个称之为免疫突触的交接面。该细胞将各种信号有机地整合 。

人B7.2(CD86)胞外区原核表达及其工程菌发酵培养的实验研究

目的 利用原核系统表达人B7.2 (IgV +C)并对工程菌发酵培养条件进行优化。方法 用聚合酶链反应 (PCR)技术从B7.2cDNA全长中克隆B7.2 (IgV +C) ,将PCR产物克隆入表达载体 pGEX 4T 3从而得到重组体 pGEX 4T 3 /hB7.2 (IgV +C) ,SDS PAGE及Westernblot用于检测目的蛋白的表达 ,同时对目的蛋白诱导表达时间及诱导剂浓度进行优化 ,对重组质粒的遗传稳定性进行鉴定。结果 Westernblot结果显示相应分子质量 5 5kD处有hB7.2 (IgV+C)与GST融合蛋白的高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 3 0 %左右。对工程菌进行发酵培养研究的结果表明 ,所构建的重组质粒在工程菌DH5α中传代稳定 ,未见质粒丢失 ,目的蛋白的表达不受影响 ,且在 3 7℃诱导 5h、IPTG终浓度为 4mmol·L- 1 时其表达量最多。结论 证明了利用原核系统表达人B7.2 (IgV +C)的可行性。

白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究

目的 :探讨自制的一种白血病瘤苗对C5 7BL 6小鼠Mφ杀伤功能的影响。 方法 :建立白血病荷瘤小鼠模型 ,用自制的 3种不同的白血病瘤苗进行预防或主动免疫治疗 ,用MTT比色法检测预防或治疗 2周、4周后小鼠Mφ杀伤活性 ,并与对照组比较。结果 :(1)随着白血病细胞在小鼠体内的生长 ,小鼠的Mφ免疫功能受到严重抑制。 (2 )灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6 )的肿瘤疫苗在提高小鼠的Mφ免疫功能方面 ,优于灭活肿瘤细胞 +IFA肿瘤疫苗 ,而仅含灭活肿瘤细胞的疫苗作用不明显。结论 :灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6 )的肿瘤疫苗可以激活以Mφ为代表的非特异性细胞免疫功能 ,如非特异性细胞毒、免疫监视、抗原递呈等功能 ,为进一步活化T淋巴细胞打下基础 ,此种疫苗在血液恶性肿瘤的特异性主动免疫治疗中很有潜力。

HPV疫苗研究进展

作为流行最广的性传播疾病之一 ,HPV感染的防治已成为研究热点。近年来 ,利用 HPV疫苗对 HPV感染相关疾病进行防治取得了可喜的进展。本文对不同类型 HPV疫苗的特点及设计原理进行了介绍。

高血压大鼠血管平滑肌细胞中细胞外信号调节激酶和c-jun及凋亡相关基因的表达

目的:探讨血管平滑肌细胞(VSMC)在高血压中的作用及其机制。方法:Wis-tar大鼠两肾一夹型高血压模型,采用免疫组织化学方法,观察肾细小动脉平滑肌细胞中ERK-2、c-jun和bax及bcl-6表达。结果:实验期间,高血压大鼠血压从112±18mmHg升高到实验结束时的198±33mmHg;高血压组肾小叶间动脉ERK-2染色阳性率(16.86%)明显高于对照组(P<0.01),入球动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉VSMC中ERK-2染色阳性率均明显高于对照组(P<0.01);高血压组入球动脉、小叶间动脉和弓形动脉VSMC中c-jun的阳性率明显高于对照组(P<0.01);高血压组肾弓形动脉及叶间动脉VSMC中bax染色阳性率均明显低于对照组(P<0.01);高血压组肾小叶间动脉bcl-6染色阳性率(12.96%)明显高于对照组(P<0.01),入球动脉、小叶间动脉VSMC中bcl-6阳性率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:两肾一夹型高血压时,少数肾小动脉血管平滑肌细胞ERK-2过表达,使得转录相关基因c-jun等活化,凋亡基因抑制,最终使VSMC增多导致血管重构。

重组PCR——一种快速体外基因重组技术

重组PCR是一种用于体外进行基因重组的简单、高效、快速技术 ,在基因重组过程中 ,不受载体和待连接DNA片段内部自身酶切位点的制约 ,连接时不依赖于限制性内切酶和连接酶 ,具有传统的DNA重组技术无法比拟的优势。

人乳头瘤病毒16型、18型DNA在涎腺肿瘤组织中的表达

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型与涎腺肿瘤病因学之间的关系。方法采用特异引物PCR法为44例涎腺肿瘤组织标本中31例HPVS阳性组织DNA进行分型检测。结果检出HPV16E7阳性率为13.60%,HPV18E7阳性率为47.72%,涎腺肿瘤组织中HPV18E7阳性率明显高于HPV16E7阳性率;恶性肿瘤组中HPV16E7和HPV18E7阳性率显著高于良性肿瘤组(P<0.05)。结论HPV18型感染与涎腺肿瘤的发生密切相关;HPV1618型E7基因在恶性肿瘤的发生中起重要作用。

共刺激分子在人胃癌组织中的原位表达及意义

肿瘤免疫主要由细胞免疫介导,肿瘤细胞具有免疫原性并能引起机体的抗肿瘤免疫应答,已是事实。越来越多的证据表明,淋巴细胞的特异性激活需要双信号刺激,一个是T细胞受体与同MHC结合的抗原肽复合物相互作用产生的特异性信号,另一个是共刺激分子同其配体结合产生的第二信号,即共刺激信号,协同淋巴细胞的激活。如果缺乏第二信号。

在单个细胞水平上对非小细胞肺癌胸水淋巴细胞细胞因子的表达

目的 分析非小细胞肺癌癌性胸水细胞中影响免疫状态的 7种细胞因子的表达 ,初步探讨肿瘤局部免疫微环境对抗肿瘤免疫应答的影响 ,揭示肿瘤逃逸机制。方法 应用原位杂交技术检测非小细胞肺癌癌性胸水和结核性胸膜炎炎性胸水细胞中IL 2、INF γ、IL 1 2、IL 1 8、IL 1 0、IL 4、TGF β1mRNA表达 ,比较其差异并进行半定量分析。结果 非小细胞肺癌癌性胸水细胞中IL 1 0、TGF β1、IL 4表达者显著高于IL 2、INF γ、IL 1 2、IL 1 8,且显著高于对照组。结核患者表达的各细胞因子水平均较低 ,且各因子的表达细胞数量相互间无显著性差异。结论 非小细胞肺癌患者癌性胸水细胞中Ⅱ型细胞因子表达者占主导地位 ,IL 1 0和TGF β1共同高表达 ,提示二者可能共同作用 。

石蜡包埋涎腺肿瘤组织中人乳头瘤病毒的分型检测

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型与涎腺肿瘤病因学之间的关系。方法采用型特异性引物PCR法对44例涎腺肿瘤组织标本中31例HPV检测阳性的组织DNA进行HPV分型检测。结果检出HPV16 E7阳性率为13.64%,HPV18 E7阳性率为47.72%;涎腺肿瘤组织中HPV18 E7阳性率明显高于HPV16 E7阳性率;恶性肿瘤组中HPV16E7、HPV18 E7阳性率显著高于良性肿瘤组(P<0.05)。结论HPV16型、18型E7基因可能在恶性肿瘤的发生中起作用,其中HPV18感染与涎腺肿瘤的发生可能更密切。

人B7-2(CD86)IgV+C段高效原核表达及活性测定

目的 克隆、表达B7 2 (IgV +C)并进行体外功能测定。方法 用聚合酶链反应 (PCR)技术从B7 2cDNA中克隆B7 2 (IgV +C) ,在此基础上构建表达B7 2 (IgV +C)的原核表达载体pGEX 4T 3 hB7 2 (IgV +C) ;SDS PAGE检测蛋白表达 ,蛋白经变性、复性后在体外协同抗CD3单抗刺激人T细胞 ,3 H TdR掺入法检测T细胞的活化程度。结果 在原核表达载体中成功地克隆了B7 2 (IgV +C) ,SDS PAGE表明在相对分子质量 (Mr) 5 5× 10 3 处有hB7 2 (IgV +C) GST融合蛋白的高效表达 ,其表达量占菌体总蛋白的 33%。体外实验证明 ,此融合蛋白可协同抗CD3单抗刺激人T细胞活化。结论重组蛋白B7 2 (IgV +C)在第一信号存在下可活化T细胞 。