针对HPV16 E7基因的RNA干扰对CaSKi细胞生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰抑制HPV16 E7基因对宫颈癌细胞系CaSKi细胞生物学特性的影响。方法:用脂质体将pGENESIL-1/E7(PS7)转染CaSKi细胞内,用透射电子显微镜观察细胞形态变化;细胞计数法测定细胞增殖能力的变化;流式细胞仪测定DNA含量来检测细胞是否发生特征性的凋亡;最后比较细胞裸鼠的成瘤能力。结果:透射电镜显示,凋亡细胞体积变小,细胞核染色质浓缩、趋边,细胞膜表面伪足消失,产生凋亡小体。流式细胞仪检测结果表明,RNA干扰24h、48h和72h后,CaSKi/PSN细胞的凋亡率分别为0.21%、0%、1.62%,CaSKi/PS7细胞的凋亡率分别为31.49%、28.95%、31.54%。生长周期停滞于S期;裸鼠荷瘤实验比较研究显示,RNA干扰后的CaSKi/PS7组的瘤结节体积、重量均较CaSKi/PSN瘤细胞显著降低(P<0.05),CaSKi/PS7组的平均抑瘤率为55.4%。结论:本研究为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗、信息分子药物的开发和干预性预防提供了新的资料和方法。

胃癌组织中HPV16与幽门螺杆菌感染相关性研究(英文)

目的:研究胃癌组织中人类乳头瘤病毒16型(HPV16)感染与幽门螺杆菌感染之间的相关性。方法:运用原位PCR和免疫组化技术分别检测陕西省地区胃癌组织中HPV16癌基因E6和幽门螺杆菌(Hp)。结果:在40例胃癌组织(GC)中HPV16E6的阳性率为27.5%(11/40)而在40例癌旁正常组织(GANM)中未检测到;GC组中HPV16E6阳性率明显高于GANM组(P=0.0004);贲门癌中HPV16的感染率明显高于非贲门癌(P=0.0136);胃癌中HPV16与幽门螺杆菌感染无明显相关性(P=0.0829)。HPV16与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤浸润、淋巴结转移以及病理分级均无明显相关性(P>0.05)。结论:本研究结果提示,在胃癌的发生过程中,HPV16可能不依赖或者不与幽门螺杆菌协作而发挥作用。

特异性siRNA抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6基因的表达

目的:研究RNAi技术抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6癌基因的表达以及对细胞生物学特性的影响。方法:构建真核细胞表达特异性shRNA的pGENESIL-1/E6(PS6)重组质粒,脂质体转染细胞后用半定量RT-PCR技术检测CaSKi细胞中E6mRNA水平的变化,然后用western blotting检测RNA干扰前后p53和p21蛋白的表达来验证RNAi效应。用透射电子显微镜观察CaSKi/PS6细胞形态变化;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,最后利用细胞计数和裸鼠成瘤实验测定CaSKi/PS6细胞增殖能力。结果:成功构建了真核细胞表达特异性siRNA的PS6重组质粒;在RNA干扰24、48和72小时后CaSKi/PS6细胞中E6mRNA分别下降了21.50%、52.60%和65.60%;CaSKi/PS6细胞出现凋亡的特征性改变;RNA干扰24h、48h和72h后CaSKi/PS6细胞的凋亡率分别为27.94%、31.95%和56.63%,细胞生长周期停滞于S期。结论:应用RNA干扰技术能有效地、特异地抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6基因的表达,为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗和干预性预防提供了新的方法。

应用PCR-RDB杂交技术检测人类乳头瘤病毒基因型的临床意义

目的采用聚合酶链反应(PCR)和反向斑点杂交(RDB)技术检测西安地区人类乳头瘤病毒(HPV)感染流行状态和HPV基因型分布特征。方法共收集266例脱落细胞标本,其中尖锐湿疣86例、宫颈上皮内瘤变144例、宫颈癌36例,应用PCR-RDB杂交技术进行23种HPV基因型分型检测。结果全部标本HPV总阳性率为71.43%(190/266),宫颈癌HPV阳性率明显高于其他疾病,差异有统计学意义(χ2=6.297,P<0.05);HPV阳性标本基因分型全部成功,HPV16型为主要感染基因型,其次为HPV18、6、11型;单基因型总感染率91.58%(174/190),多基因型总感染率8.42%(16/190)。不同疾病单基因型感染和多基因型感染构成比差异无统计意义(χ2=0.3511,P>0.05)。结论 HPV16型是西安地区主要感染基因型,应用PCR-RBD技术检测HPV基因型对HPV感染的防治具有一定临床意义。