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NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定
被引量:
1
1
作者
汤小江
平宝华
+2 位作者
潘承恩
杨广笑
王全颖
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1143-1146,共4页
目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体。方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin...
目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体。方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响。结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用。结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。
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关键词
SURVIVIN
ANT
NT4
融合基因
重组腺相关病毒
下载PDF
职称材料
NT_4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组载体的构建
2
作者
汤小江
平宝华
+2 位作者
潘承恩
杨广笑
王全颖
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期401-403,432,共4页
目的设计构建携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的cDNA融合基因的重组载体,为针对Survivin的靶向治疗奠定基础。方法应用非对称引物/模板法、PCR技术制备NT4-Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片断,连接于pGEM-T-Easy载体,经克隆测序、酶切后与PBV...
目的设计构建携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的cDNA融合基因的重组载体,为针对Survivin的靶向治疗奠定基础。方法应用非对称引物/模板法、PCR技术制备NT4-Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片断,连接于pGEM-T-Easy载体,经克隆测序、酶切后与PBV220/NT4质粒连接;转化感受态细胞E.coliDH5α,亚克隆获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因。结果克隆出Ant-Shepherdin[79-87]基因,经酶切及测序证实结果正确;连接PBV220/NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因片断。结论通过分子生物学技术成功构建了携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。
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关键词
SURVIVIN
ANT
神经营养因子4(NT4)
融合基因
载体
下载PDF
职称材料
题名
NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定
被引量:
1
1
作者
汤小江
平宝华
潘承恩
杨广笑
王全颖
机构
西安交通大学医学院第一附属医院
肿瘤外
科
西安交通大学医学院第一附属医院控制感染科
西安交通大学医学院第一附属医院
老年外
科
西安
华广生物工程公司
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1143-1146,共4页
文摘
目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体。方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响。结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用。结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。
关键词
SURVIVIN
ANT
NT4
融合基因
重组腺相关病毒
Keywords
Survivin
Ant
NT4
fusion gene
recombinantadeno-associated virus
分类号
Q753 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
NT_4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组载体的构建
2
作者
汤小江
平宝华
潘承恩
杨广笑
王全颖
机构
西安交通大学医学院第一附属医院
肿瘤外
科
西安交通大学医学院第一附属医院控制感染科
西安交通大学医学院第一附属医院
老年外
科
西安
华广生物工程公司
出处
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期401-403,432,共4页
文摘
目的设计构建携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的cDNA融合基因的重组载体,为针对Survivin的靶向治疗奠定基础。方法应用非对称引物/模板法、PCR技术制备NT4-Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片断,连接于pGEM-T-Easy载体,经克隆测序、酶切后与PBV220/NT4质粒连接;转化感受态细胞E.coliDH5α,亚克隆获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因。结果克隆出Ant-Shepherdin[79-87]基因,经酶切及测序证实结果正确;连接PBV220/NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因片断。结论通过分子生物学技术成功构建了携带NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。
关键词
SURVIVIN
ANT
神经营养因子4(NT4)
融合基因
载体
Keywords
survivin
Ant
NT4
fusion gene
vector
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
R512.6 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定
汤小江
平宝华
潘承恩
杨广笑
王全颖
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
2
NT_4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组载体的构建
汤小江
平宝华
潘承恩
杨广笑
王全颖
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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