组织胚胎学教学改革的设想

21世纪是以高新技术为主导的科学技术迅猛发展和激烈竞争的时代.传统的应试教育已严重制约了新时代对于具有高素质、创新能力的医学人才的需求.为了达到新的医学教育目标的要求,充分利用现代多媒体技术和网络资源,改革组织胚胎学传统的教学方法和手段,不仅可以改善教学效果,提高教学质量,而且可以开发学生的创造性潜能,培养学生的探索精神.

浅谈人体胚胎学中的伦理问题

本文通过胚胎学中常见的三个伦理问题展开讨论 ,对新时期伦理学教学进行一些有益的探索。

Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表达及其与凋亡的关系

目的探讨凋亡调控基因Fas、FasL在大鼠急性胰腺炎中的表达及其与腺泡细胞凋亡的关系。方法通过胰胆管内逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠,建立不同严重程度的急性胰腺炎模型,用RT-PCR、免疫组化法检测胰腺组织Fas、 FasL mRNA及蛋白的表达,原位末端标记法检测各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡。结果在正常的胰腺腺泡细胞中即存在着Fas、FasL mRNA及蛋白的表达,且呈现共区域化特点,凋亡细胞极少。在炎症程度较轻的胰腺组织,Fas和FasL mRNA的表达水平显著提高,腺泡细胞凋亡指数亦明显提高,随胰腺炎症程度的加重,Fas和FasL mRNA的表达逐渐下降,腺泡细胞凋亡指数亦逐渐下降。结论 Fas／FasL系统可能参与了正常胰腺组织的细胞更新和自稳;是介导急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡的一个重要途径。

青春期前己烯雌酚暴露对大鼠性成熟后生精细胞凋亡的影响及其机制初探

目的:研究青春期前己烯雌酚(d iethylstilbestrol,DES)暴露对SD大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法:30只21日龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/(kg.d)4个实验组和1个对照组(编码为ADa、ADb、AD c、ADd和AC组,每组6只)。于青春期前[出生后第22 d(postnatal day 22,PND22)至35 d(PND35)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax在生精细胞中的表达。结果:与对照组相比,ADa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,ADb、AD c和ADd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有增加趋势。AC、ADa组生精细胞Bax相对弱表达而Bc l-2强表达,伴随DES暴露剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bc l-2表达逐渐减弱,ADd组Bax强表达而Bc l-2弱表达。结论:青春期前较大剂量DES暴露可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bc l-2参与青春期前DES暴露所致的生精细胞凋亡过程。

人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-PCR定量检测

目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA。同时定量测定人 β 肌动蛋白 (hBA)的mRNA作为内对照。用梯度稀释的克隆的人 β 肌动蛋白基因制作标准曲线。结果 :标准曲线的相关系数为 1.0 0。实时荧光反转录PCR方法的平均变异系数为 7.1%。HepG2细胞hTERTmRNA与hBAmRNA的比值为 (1.3± 0 .3)× 10 -4。结论 :建立了可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。

p53和Cyclin D1在宫颈上皮肉瘤样变和宫颈鳞癌中的过表达及意义

目的 探讨CyclinD1和 p5 3在宫颈癌中过表达的意义。 方法 采用免疫组化SP法对 5 0例宫颈浸润性鳞癌、10例宫颈上皮肉瘤样变 (CIN)和 10例正常宫颈鳞状上皮中CyclinD1和p5 3蛋白进行了检测。 结果 CyclinD1和p5 3蛋白在宫颈浸润性鳞癌中过表达率分别为 70 %和 5 0 % ,CyclinD1和 p5 3在CIN中的过表达率分别为 30 %、2 0 % ,而在对照组中未出现过表达。CyclinD1在宫颈浸润性鳞癌病理Ⅱ级和Ⅲ级中的过表达率明显高于病理Ⅰ级 (P <0 .0 5 )。CyclinD1在宫颈浸润性鳞癌临床Ⅲ期中的过表达率明显高于临床Ⅱ期 (P <0 .0 5 )。p5 3在宫颈浸润性鳞癌病理Ⅱ级和Ⅲ级中的过表达率明显高于病理Ⅰ级 (P <0 .0 5 )。结论 CyclinD1和 p5 3均与细胞周期G1/S期转换有关 ,它们的过度表达可能在不同的通路以不同的机制与宫颈癌的发生和发展有关。

左旋四氢巴马汀对局灶性脑缺血再灌注大鼠凋亡蛋白P53、HSP70表达的影响

目的:观察左旋四氢巴马汀(L-THP)对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及对神经元凋亡蛋白P53、HSP70表达的影响,探讨L-THP的神经保护作用及机制。方法:采用改良Longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型,11分法对大鼠进行神经行为症状评分,比色法测定大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)活力,HE染色观察大鼠脑组织神经元病理形态学变化,免疫组织化学染色法分别检测缺血侧海马CA1区P53、HSP70阳性细胞表达。结果:L-THP能够明显改善局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经行为症状以及脑组织形态结构,降低血清LDH活力,并且能够降低大鼠海马CA1区P53蛋白的阳性表达,在再灌注早期增强HSP70的阳性表达。结论:L-THP对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制凋亡蛋白P53的表达,增强HSP70的表达有关。

不育吸烟男性精液和血液中镉、铅含量评价

测定95例男性（其中不育患者50例）精浆和精子中的丙二醛、蛋白质羰基、谷胱甘肽转硫酶和还原性谷胱甘肽含量，评价不育患者中吸烟者血液和精浆中镉和铅的浓度与精浆和精子中的氧化应激和损伤、抗氧化防御系统成分之间的关系。采用鲁米诺（5-氨基-2，3-二氢-1，4-二氮杂萘二酮）一增强化学发光法测定精子中的活性氧。结果显示，吸烟的不育患者的精子计数、活动度和正常形态精子低于生育力正常的男性和不吸烟的不育患者。在吸烟的不育患者中镉、铅、丙二醛和蛋白质羰基的浓度和活性氧水平显著高于生育力正常的男性和不吸烟的不育患者。然而，还原性谷胱甘肽含量和谷胱甘肽转移酶活性较生育力正常的男性和不吸烟的不育患者减少。这些结果提示，吸烟可能影响精液质量和人类精子中脂质和蛋白质的氧化损伤。经Pearson相关检验分析，在生育力低下的吸烟者中精浆镉浓度与蛋白质羰基之间、精浆铅浓度与精子中的活性氧水平之间呈正相关，而在生育力正常的吸烟者中血镉浓度与活性水平呈显著的正相关。血铅水平与精子和精浆中的还原性谷胱甘肽含量呈显著的负相关。这些结果提示，吸烟提高不育男性精浆和血液中镉和铅水平，并增强其精子氧化损伤程度，降低与之相关的抗氧化防御系统的成分。

脑的微量元素与衰老

与脑的衰老过程有关的变性机制 ,在一定程度上被修复机制所拮抗。在变性和修复过程中 ,微量元素发挥着作用。目前有关衰老过程的研究集中在 2种较少量的元素 (钾和钙 )和6种微量元素 (锰、铁、铜、锌、硒和铷 )上。这些元素用 PIXE分析 ,样本来源于 1 8具尸体的大脑皮质、白质、基底核、脑干和小脑皮质。最显著的发现是 :钾和铷元素浓度的下降以及钙、铁、锌、硒元素浓度的上升。研究结果支持最近发现的钙和铁与由氧自由基起动的脑变性过程有关 。

肾脏内科出科考试试卷分析暨临床教学评估

目的通过分析我校1999级5年制临床医学专业肾内科出科考试试卷,对临床教学质量进行评估.方法选择全部1999级5年制临床医学专业学生的出科考试试卷进行统计分析.结果考试成绩基本呈正态分布,平均为73.09分,标准差为12.03分,难度为0.70,区分度为0.30.结论本试卷难度适中,区分度尚可,较全面、客观地反映了学生对本门课程的掌握程度;不同知识点成绩的高低反映出医学生在实习阶段存在的问题,表明了临床教学中有待加强的环节,为今后的教学改革提供了依据.

饮食中的蛋白质与肠道钙吸收的关系

饮食中的蛋白质对肠道钙吸收到底有无影响 ,一直是科研工作者研究的焦点 ,但由于研究者使用的实验设计、数据分析方法等的不同 ,有时会得出截然相反的实验结论。有的学者研究认为饮食蛋白对钙吸收没有影响 。

bcl-2蛋白在宫颈上皮内瘤样变及宫颈癌中的表达和意义

目的 探讨bcl-2在宫颈上皮内瘤样变及宫颈浸润癌中过度表达的意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测了 10例宫颈上皮内瘤样变 (CIN)及 5 7例宫颈癌中bcl-2蛋白的表达 ,并以 11例正常宫颈组织作对照。结果 bcl-2蛋白在CIN中的表达强度明显高于正常对照 (P <0 0 5 ) ;bcl-2蛋白在宫颈癌中的表达 ,不仅表达阳性率 ( 94 7% )明显高于正常对照 ( 5 4 5 % ) (P <0 0 1) ,而且表达强度亦明显高于正常对照 (P <0 0 1) ;bcl -2蛋白在宫颈癌临床Ⅲ期中的过表达 ( 6 4 3 % )明显高于临床Ⅱ期 ( 2 2 2 % ) (P <0 0 5 )。结论 bcl-2蛋白的过度表达不仅与宫颈癌的发生有关 ,而且与宫颈癌的发展有关。

人HSP_(70)真核表达载体的构建及在大鼠胶质瘤细胞内的表达

目的:构建人热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,并在大鼠胶质细胞瘤C6细胞中进行表达。方法:构建了HSP70与PCDNA3.1真核表达载体pCDNA3.1-HSP70,以脂质体法转染,同时利用免疫组织化学方法检测HSP70在大鼠胶质细胞瘤C6细胞中进行表达。结果:成功地构建了真核表达载体pCDNA3.1-HSP70,采用脂质体法转染大鼠胶质瘤C6细胞后,成功检测到HSP70在大鼠胶质细胞瘤C6细胞中表达。结论:成功地将外原性HSP70基因转染到大鼠胶质瘤C6细胞中并进行表达,为HSP70在肿瘤免疫治疗中的应用提供了实验材料。

宫颈鳞癌中端粒酶活性与p53和C-myc的表达

目的 探讨宫颈鳞癌中端粒酶活性、凋亡相关基因p5 3和C myc的表达水平及三者间关系。 方法 用PCRELISA法检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样变 (CIN)及浸润性宫颈鳞癌组织中端粒酶活性 ,用免疫组化ABC法检测 p5 3、C myc蛋白的表达。 结果 ①浸润性宫颈鳞癌中 ,端粒酶活性、p5 3、C myc蛋白表达水平明显增高 (P <0 .0 5 ) ;②端粒酶阳性率、p5 3和C myc蛋白表达水平与宫颈鳞癌分化程度有关 ,即肿瘤分化程度越差 ,端粒酶阳性率越高 (P <0 .0 5 ) ,而与宫颈鳞癌病理类型、临床分期无关 ;③宫颈鳞癌中端粒酶活性、p5 3表达、C myc表达三者之间有明显的内在联系 (P <0 .0 5 )。结论 ①端粒酶活性增高在宫颈鳞癌的发生及发展中起重要作用 ;②端粒酶活性、p5 3、C myc蛋白水平可作为宫颈鳞癌诊断和预后指标 ;③在宫颈鳞癌的形成和发展中 。

产前应激对脑海马神经干细胞增殖与分化的影响

目的:急、慢性应激能明显抑制本代大鼠脑海马神经干细胞的增殖分化,产前应激对子代神经干细胞会产生何种影响?了解神经干细胞在中枢神经系统内的分布特征及其分化,对脑海马神经干细胞在产前应激相关行为中的调节作用进行阐述。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2002-01与神经干细胞和应激相关的文章,检索词“Neuralstemcell,Stress”为检索词,从1990-01/2004-12网址为http://lib.tsinghua.edu.cn/数据库中检索与神经干细胞和应激相关的文章,限定文章语言种类为中文,检索词“神经干细胞,应激”。资料选择:对资料进行初审,选取包括处理组和对照组的文献,筛除明显不随机的研究,对剩余的文献开始查找全文。纳入标准为①随机对照研究。②实验或临床研究包含平行对照组。③前后对照试验研究。排除标准:重复性研究及综述类文章。资料提炼:共收集到415篇关于神经干细胞与脑海马应激损伤的随机和未随机的文章。26个实验或临床研究符合纳入标准。排除的389篇中301篇为未随机实验或重复性研究,88篇为综述类文章。资料综合:纳入的26个实验包括511例患者和625只实验动物。说明了脑海马齿状回是成年哺乳动物不断产生新神经元的脑区之一,这些新神经元具有修复脑海马损伤的作用,但成年动物神经干细胞持续增殖的生理作用并不清楚。脑海马齿状回神经干细胞的分化调控受多种内外环境因素的影响,产前应激可引起子代脑海马神经元及神经元超微结构的损伤,其损伤效应可能与产前应激引起的氧化物生成增加有关。结论:产前应激能调节脑海马神经干细胞的增殖与分化,提示神经干细胞可能参与脑功能调节和动物行为活动。将易培养的干细胞转入胎儿体内,通过一定的条件诱导其分化生成神经细胞修补脑海马损伤,对预防和治疗产前应激所致子代脑损伤具有重要的价值。

人U_6启动子表达载体的构建及在胃癌细胞中的活性鉴定

目的构建人U6(hU6)snRNA启动子驱动的小RNA分子的表达载体,并在人胃低分化腺癌SGC-7901细胞中鉴定其表达外源性小RNA分子的活性。方法以人基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hU6snRNA启动子序列,并将其克隆入PUC19载体中,命名为PUC-hU6-extra,经测序证明其序列的正确性;用脂质体法转染SGC-7901细胞;用RT-PCR检测U6启动子的转录活性,并测定培养细胞的生长曲线。结果hU6snRNA基因启动子和紧接转录起始点hU6snRNA的前27个核苷酸被成功地克隆入PUC19质粒载体,重组载体在SGC-7901细胞中能高表达小分子RNA,并且未观察到后者对细胞体外增殖的影响。结论成功构建了以hU6snRNA启动子驱动的、能在人胃低分化腺癌SGC-7901细胞内高效转录小分子RNA的表达质粒PUC-hU6-extra。

生殖细胞核因子（GCNF）在大鼠附睾中的表达和定位研究

目的：检测生殖细胞核因子(GCNF)在成年和青春期大鼠附睾中的表达和细胞定位情况，以探讨GCNF在附睾中可能参与的生理功能。方法：Western-blot，免疫组织化学和胶体金免疫电镜法。结果：Western-blot显示在成年和青春期大鼠附睾全蛋白抽提物中检测到GCNF编码的蛋白条带，

雌激素替代治疗对大鼠心壁雌激素受体表达的影响

目的 :观察雌、孕激素替代治疗时去卵巢大鼠心脏雌激素受体 ( ERα)的表达。方法 :通过免疫组化方法 ,分别测定去势和雌激素替代治疗 ( ERT)组 SD大鼠心脏雌激素受体水平 ,并对血清雌激素及血脂水平进行了检测。结果 :1去势大鼠 ER(免疫阳性物质明显减少 ( P<0 .0 5 ) ,雌激素替代治疗 ( ERT) 8周后 ,ERα表达明显改善 ;2去势组雌性大鼠血清雌二醇水平较假手术组明显下降 ( P<0 .0 1 ) ,胆固醇 ( TC)、甘油三酯 ( TG)水平明显升高。结论 :ERα广泛存在于心肌组织中 。