改进组织学与胚胎学实验教学的方法与实践

从重视实验课的教学,改善教学条件、培养学生的实验能力等方面总结教学实践的体会。就如何搞好组织学与胚胎学的实验教学进行探讨,以提高组织学与胚胎学实验教学效果。

短暂性MCAO大鼠注射天麻素具有神经保护作用

目的:探讨天麻素对缺血性脑损伤的神经保护作用.方法:通过线栓技术闭塞大脑中动脉(MCAO)2h诱导建立暂时性局部脑缺血模型,SD大鼠腹腔内连续注射天麻素3d.采用TUNEL染色测定缺血边缘区细胞凋亡;免疫组织化学染色观测S100β和iNOS蛋白表达.结果:MCAO后3d,天麻素组大鼠脑梗死边缘区TUNAL+细胞数目明显减少(P<0.05);S100β和iNOS+细胞数目下降(P<0.05).结论:天麻素可以抑制脑缺血诱导的细胞凋亡,具有神经保护作用;S100β和iNOS蛋白表达的下调可能涉及到天麻素的抗细胞凋亡作用.

局部脑缺血后血管活性肠肽促进血管再生

目的研究局部脑缺血后血管活性肠肽(VIP)对血管再生的影响。方法通过闭塞成年SD大鼠大脑中动脉(MCAO)120min诱导建立局部脑缺血,缺血再灌注后大鼠侧脑室内注射VIP。采用免疫组织化学染色观测缺血边缘区血管再生、VEGF及其受体的表达;Western blotting分析脑内VEGF蛋白含量。结果免疫组织化学染色显示VIP组大鼠脑缺血区周围BrdU免疫反应内皮细胞较对照组明显增加(P<0.05);VIP组大鼠脑缺血边缘区VEGF免疫反应细胞以及flt-1和flk-1免疫反应内皮细胞较对照组均显著增多(P<0.01);免疫印迹分析表明VIP组大鼠缺血侧脑组织VEGF蛋白水平较对照组大鼠明显上调(P<0.05)。结论VIP可以促进缺血脑的血管再生;上调的VEGF及其受体可能介导了VIP促血管再生作用。

病毒载体介导BDNF基因表达在大鼠神经元AD模型中的作用

目的探讨重组腺伴随病毒(rAAV)载体介导表达人脑源性神经营养因子(hBDNF)基因以及表达的hBDNF对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的AD模型神经元保护效应的机制。方法使用分子克隆技术克隆了hBDNF基因,并且构建了携带hBDNF基因的rAAV病毒载体(AAV-hBDNF),使用病毒载体转染Aβ诱导损伤的海马神经元。使用MTT检测和流式细胞仪分析观察细胞凋亡变化,同时使用免疫细胞化学技术检测了BDNF蛋白以及Bcl-2抗凋亡蛋白的表达,使用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果结果显示重组病毒对培养的海马神经元进行了有效的转染,BDNF蛋白表达水平明显增高,表达的BDNF对Aβ诱导的神经元损伤有显著的保护效应,在BDNF治疗组表现出抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增高和有效地维持了[Ca2+]i平衡。结论表达的BDNF通过抑制Aβ依赖的细胞内钙超载和增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,有效地保护神经元抵抗Aβ神经毒性引起的凋亡。

6周游泳训练对注射D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆能力及海马区NGF及其下游信号分子表达的影响

目的:探讨6周游泳训练对注射D-半乳糖致衰老大鼠空间学习记忆能力和海马神经生长因子及下游信号分子的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、衰老模型对照(AC)组和衰老模型训练(AE)组,每组10只。AC组与AE组每日皮下注射1次D-半乳糖(125 mg/kg),共6周。同时AE组进行连续6周、每周5天、每天1次的中等强度(90分钟)游泳训练。6周后,采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,TUNEL染色检测海马CA3区凋亡神经元数目,Western blot检测海马组织NGF、P-Akt、Akt、Bcl-2和Bax表达。结果:与衰老模型对照组相比,衰老模型训练组大鼠在Morris水迷宫实验中的逃避潜伏期明显缩短,穿越平台区域次数明显增多(P<0.01);其海马凋亡细胞数显著减少(P<0.01),NGF、P-Akt和Bcl-2表达显著增加(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.01),Akt表达无明显差异(P>0.05)。结论:6周游泳训练可以改善衰老大鼠学习记忆能力,减少海马神经元凋亡,其机制可能是上调NGF、P-Akt和Bcl-2表达,同时下调Bax表达,进而促进神经元存活。

血管活性肠肽对大鼠脑缺血损伤的神经保护作用

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对脑缺血损伤的神经保护作用和机制。方法SD大鼠侧脑室内注射VIP,通过管腔内线栓技术闭塞右侧大脑中动脉诱导建立暂时性局部脑缺血模型。采用TTC染色测定大鼠脑梗死体积;免疫组织化学染色观察S100β表达;双抗夹心ELISA检测血清S100β的含量。结果VIP注射后大鼠脑梗死体积较对照组明显缩小,减少约32.3%(P<0.05);S100β阳性细胞体积缩小,数目减少(P<0.05);血清S100β含量也明显降低(P<0.05)。结论VIP脑内注射可明显减小脑缺血后梗死体积,具有神经保护作用。VIP可以抑制S100β的过度表达,这可能是VIP的另一神经保护机制。

慢病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具。目前常用的有病毒载体和非病毒载体两类,病毒载体由于转导效率较高且可以用于体内和体外的基因转导,是目前基因治疗研究和临床应用的主要工具,包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺伴随病毒载体等。慢病毒载体是近来受到广泛注意的一种逆转录病毒载体,由于具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫反应小等优点,适于体内基因治疗,因此有望成为理想的基因转移载体。本文以HIV-1为代表对慢病毒载体构建,结构优化及其在肿瘤基因治疗中的应用作一综述。

血管活性肠肽对暂时性脑缺血大鼠梗死体积的影响

目的通过活体实验研究血管活性肠肽(VIP)对脑缺血损伤的神经保护作用。方法大鼠侧脑室内注射VIP后,采用大脑中动脉线栓(MCAO)法诱导建立暂时性局部脑缺血模型。通过神经学的评价对MCAO大鼠进行判定和筛选;TTC染色测定大鼠脑梗死体积;双抗夹心ELISA检测血清S100β的含量。结果MCAO后2 h大鼠呈现不同程度的神经功能损伤症状。评定为1-2级的仅有2例出现明显脑梗死区,3级的为全部。VIP注射后大鼠脑梗死体积明显缩小,较对照组减少约25%(P<0.05);血清S100β浓度也明显降低(P<0.05)。结论以神经学评分3级作为MCAO模型成功的判定标准是较为可靠的。VIP脑内注射可明显减小脑缺血后梗死体积,具有神经保护作用。VIP可以降低S100β的含量,这可能涉及到VIP的另一神经保护机制。

大黄素抗Aβ25-35诱导原代大鼠皮层细胞氧化应激损伤的机制

目的探讨大黄素对抗Aβ25-35诱导的原代大鼠皮层细胞的氧化应激损伤机制i方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、模型组及大黄素预处理组。采用比色法测试超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的活性。2’，7’-二氯二氢荧光素二乙酯（H2DCF-DA）染色后，荧光显微镜和流式细胞仪（FCM）检测细胞内活性氧（ROS）的含量。罗丹明123（Rh123）染色后，FCM检测线粒体膜电位。Western印迹检测细胞色素c（CytC）蛋白表达水平。结果30μmol／L的Aβ25-35孵育皮层细胞24h后显著降低SOD、GSH-Px的活性和线粒体膜电位，同时增加MDA和ROS的产生。大黄素预处理皮层细胞后可明显抑制AB25q引起的上述细胞毒性效应，并减少CytC的表达。结论大黄素通过恢复皮层细胞抗氧化酶的活性，稳定线粒体膜电位，同时抑制MDA、ROS的聚集和CytC的释放来对抗Aβ25-35引起的氧化应激损伤。

P53-mdm2相互作用与肿瘤治疗策略

mdm2是P53肿瘤抑制功能的主要调节者,两者之间存在自动调节的负反馈环,mdm2可通过与P53结合促进其降解。由诸多因素造成的mdm2-p53相互关系失衡所带来的直接后果就是导致p53的失活而引起肿瘤的发生。已证明有3种翻译后修饰：磷酸化、寡聚化及与其它蛋白的结合影响着mdm2、P53蛋白复合物的形成。干扰两者的结合,使P53发挥转录活性是抗肿瘤的关键。mdm2和P53蛋白相互作用抑制剂的研究是抗肿瘤治疗的一个新靶点,有广阔的应用前景。

复发性流产与精子畸形率的相关性

目的探讨复发性流产与丈夫精子畸形率的相关性。方法按纳入标准将研究对象分成复发性流产患者丈夫组(流产组)(n=37)、孕前常规检查组(孕检组)(n=48)和正常生育男性组(生育组)(n=26),采用改良巴氏染色法,按照严格Kruger标准检测对象精子畸形率,以及精液进行常规分析。结果三组年龄、禁欲时间、精液量、精子密度、精子活力以及颈部和中段畸形率、尾部畸形率等无统计学差异(P>0.05);三组间精子头部畸形率和总畸形率有显著性差异(P<0.05)。三组间进一步两两比较,流产组与孕检组及生育组精子头部畸形率均有非常显著性差异(P<0.01),孕检组与生育组精子头部畸形率无显著性差异(P>0.05);流产组精子总畸形率与孕检组有显著性差异(P<0.05),与生育组有非常显著性差异(P<0.01),两孕检组与生育组无显著性差异(P>0.05)。结论丈夫精子畸形率高与妻子复发性流产存在相关性,精子畸形率高与复发性流产的之间相关机理尚需进一步研究。

血管活性肠肽抑制大鼠脑缺血诱导的细胞凋亡和iNOS表达

目的探讨脑内注射血管活性肠肽(VIP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法通过线栓技术闭塞大脑中动脉(MCAO)2h诱导建立暂时性局部脑缺血模型后,大鼠侧脑室内注射VIP。采用TTC染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色评定缺血边缘区细胞凋亡;Western Blotting分析脑内iNOS蛋白含量。结果MCAO后1d,VIP注射大鼠脑梗死体积较对照组明显缩小,减少约28%(P<0.05);缺血边缘区TUNEL阳性细胞数目减少(P<0.05);脑组织iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论大鼠脑内注射VIP可以抑制脑缺血再灌注诱导的细胞凋亡,减小梗死体积,具有神经保护作用;VIP抑制细胞凋亡的作用可能与iNOS蛋白表达降低有关。

血管内支架结合弹簧圈栓塞治疗颅内宽颈动脉瘤的效果观察

目的:探讨血管内支架结合弹簧圈栓塞治疗颅内宽颈动脉瘤的疗效。方法:选取颅内宽颈动脉瘤患者83例,其中接受血管内支架结合弹簧圈栓塞治疗38例(观察组),接受非支架辅助治疗45例(对照组),随访观察2组患者疗效及复发情况。结果:观察组术后即刻造影完全栓塞38例,栓塞效果优于对照组,差异有统计学意义(Z=-2.083,P<0.05)。观察组术中发生动脉瘤再破裂,弹簧圈移位、脱出、解旋,动脉瘤缺血事件和脑血管痉挛发生率分别为2.63%、0.00%、5.26%和7.90%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组随访动脉瘤复发率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血管内支架结合弹簧圈栓塞治疗颅内宽颈动脉瘤安全有效。

巩膜隧道加非缝合巩膜瓣滤过手术治疗急性闭角型青光眼的方法探讨

目的:探讨巩膜隧道加非缝合巩膜瓣的滤过手术治疗急性闭角型青光眼的临床效果。方法:回顾性分析2004-01/2007-12收治于我院的46例46眼急性闭角型青光眼患者临床资料,比较手术前后视力、眼压、视野、并发症等。结果:所收46例患者均顺利完成手术,术后随访4～8(平均5.21±4.12)mo,术后1mo平均眼压15.3±4.87mmHg,术后5mo平均眼压16.8±4.77mmHg,经统计学处理,手术前后眼压有统计学差异(P<0.01)。术后1wk前房稳定,8例有较轻的葡萄膜炎反应,术后5mo视力较术前无下降,视野复查未见明显改变。结论:巩膜隧道加非缝合巩膜瓣的滤过手术治疗急性闭角型青光眼可以有效降低眼压,手术并发症少,是一种有效的滤过手术方式。