T-2毒素中毒对低硒大鼠关节软骨细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响

目的探讨T-2毒素对低硒喂养大鼠关节软骨细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响,以了解大骨节病病因及软骨细胞凋亡的发生机制。方法新生的雄性大鼠随机分为4组,正常饲料组、低硒饲料组、正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料+T-2毒素组。正常饲料和正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料组和低硒饲料+T-2毒素组大鼠分别给予人工合成正常饮食和低硒饮食30 d。之后,正常饲料+T-2毒素组和低硒饲料+T-2毒素组给予T-2毒素(每天每克体重200 ng)灌胃30 d。提取大鼠关节软骨RNA,采用Real-Ti me PCR法检测凋亡相关基因P53、caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达。结果与正常饮食大鼠血硒(73.92±30.01)ng/mL相比,低硒饮食30 d的大鼠血硒为(4.16±3.56)ng/mL,二者之间有统计学差异(P<0.05)。与正常饲料组比较,低硒饲料组、正常饲料+T-2毒素组、低硒饲料+T-2毒素组中的P53、caspase-3、Bax的mRNA表达上调,Bcl-2的mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与低硒饲料组相比,低硒饲料+T-2毒素组中的P53、caspase-3、Bax的mRNA表达上调,Bcl-2的mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);P53、caspase-3、Bax的mRNA在低硒饲料+T-2毒素组表达高于正常饲料+T-2毒素组;Bcl-2的mRNA在低硒饲料+T-2毒素组表达低于正常饲料+T-2毒素组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论每天每克体重200 ng T-2毒素作用30 d,可以引起低硒饲料喂养大鼠软骨细胞凋亡因子mRNA的表达改变。

DON毒素和硒对软骨聚集蛋白聚糖硫酸化修饰的影响

目的研究大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)可疑致病因子脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和补硒对软骨细胞外基质聚集蛋白聚糖(aggrecan)硫酸化修饰的影响。方法应用体外单层培养C28/I2人软骨细胞,采用MTT法测定不同浓度DON和不同作用时间下的细胞增殖活性,通过Real-time PCR和Western-blot法分别检测加DON毒素或补硒后软骨细胞的aggrecan、PAPS合成酶2(PAPS synthetase 2,PAPSS2)、PAPS转运体1(PAPS transporter 1,PAPST1)、N-乙酰氨基半乳糖胺-4,6-硫酸转移酶[carbohydrate(N-acetylgalactosamine 4-sulfate 6-O)sulfotransferases 15,CHST15]以及芳基硫酸酯酶B(arylsulfatase B,ARSB)mRNA和蛋白的表达水平。结果 DON毒素可抑制C28/I2软骨细胞系的增殖活性,在DON毒素作用下aggrecan、PAPSS2、PAPST1和CHST15的mRNA和蛋白质表达水平降低,ARSB mRNA和蛋白质表达水平升高,加硒可在一定程度上改善这种状况。结论 DON毒素对软骨细胞的增殖有明显的抑制作用,细胞对毒素有一浓度和时间的依赖性;DON毒素可通过改变aggrecan硫酸化修饰相关酶类的表达水平影响软骨蛋白聚糖的硫酸化。

T-2毒素对软骨细胞整合素表达的影响及硒的拮抗作用

目的研究T-2毒素和硒对软骨细胞整合素mRNA表达的影响,探讨T-2毒素和硒与大骨节病发病的关系。方法体外单层培养C-28/I2软骨细胞,用MTT法测定细胞在不同浓度T-2毒素和不同作用时间下的增殖活性,通过Real-time PCR法检测软骨细胞在加T-2毒素或补硒后整合素α1、α2、α3、β1、β3、β5等10种亚基的表达情况。结果 T-2毒素可抑制C-28/I2软骨细胞系的增殖活性,在T-2毒素作用下软骨细胞系中整合素的表达谱有显著变化,其中显著上调的整合素亚基有αv和β1,下调的亚基有α2、α5和β5,加硒可在一定程度上拮抗这种改变。结论 T-2毒素对软骨细胞增殖有明显的抑制作用,而硒能通过拮抗整合素的表达而发挥对软骨细胞的保护作用。

深圳市食品中镉污染的暴露量评估

目的了解2007～2009年深圳市各类食品中镉污染水平,根据每标准人日各类食物的摄入量数据,评估深圳市居民镉暴露的安全性。方法根据2007～2009年深圳市食品污染物监测工作方案,对各类食品中镉进行检测,同时结合2002年广东省居民膳食营养调查中各类食物消费量数据,计算出深圳市居民膳食中镉的实际摄入量,并与FAO/WHO推荐的暂定每日可耐受摄入量(PTDI)60μg进行比较,评价深圳市居民膳食中镉摄入的安全性。结果膳食中镉污染主要来源为水产品,连续3年检测均有超标,超标率22.22%、32.10%、21.13%,其次为蔬菜,2年超标率均为7.94%,畜肉1年超标率为21.88%;3年来深圳居民膳食镉的一般摄入量及占暂定每日耐受摄入量(Provisional daily tolerable intake,PTDI)的百分比分别为:78.54μg(130.90%)、43.69μg(73.83%)和31.19μg(51.98%),但膳食镉的偏高摄入量及占PTDI的百分比分别为:571.36μg(952.26%)、227.80μg(379.67%)和180.89μg(301.48%)。结论深圳市居民膳食镉的平均摄入量1年偏高,但偏高摄入量连续3年超过PTDI 3倍以上,对健康可能存在一定危害。

间接免疫荧光法与蛋白印迹法检测抗核抗体的比较研究

目的 采用回顾性调查方法比较间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence,IIF）与蛋白印迹法（line immunoassay,LIA）对抗核抗体检测的诊断价值.方法 采用间接免疫荧光法（IIF）与蛋白印迹法（LIA）对2 522份血清标本进行抗核抗体检测,检测结果可分为自身免疫病组（autoimmune disease,AID）、非AID组和非明确诊断组.并分析结果的相互关系和临床意义.结果 2 522份标本中,两种方法同时检测阳性752例,阳性率29.8%,显著高于单独IIF检测的阳性率24.3%（χ2=19.406,P＜0.01）和单独LIA检测的阳性率23.0%（χ2=30.18,P＜0.01）.IIF（＋）LIA（-）组荧光滴度分析表明,在滴度1∶100～1∶1 000组,非AID的阳性率显著高于AID组;而当滴度≥1∶1 000 AID阳性率显著高于非AID组（χ2=4.331,P＜0.05）;核型分布不同.IIF（-）/LIA 非阴性组蛋白印迹法显色强度与疾病的关系,显色越深,AID的可能性越高,15种已知抗体都有可能出现,抗Ro-52抗体出现频率最高.结论 该次分析结果表明IIF-ANA筛查和LIA-ANAs特异性抗体检测不能相互代替,临床应对需要通过检测ANA来排除AID患者的标本同时进行IIF-ANA的筛查和ANAs特异性抗体的检测,以避免仅用一种方法检测导致的AID患者漏诊.

深圳市粮食中铅污染预测模型的建立

目的建立未来5年深圳市粮食中铅污染的预测数学模型,以了解其污染趋势。方法根据2001～2009年深圳市随机抽检和送检的粮食类产品铅检测数据,应用灰色预测模型、非线性回归预测模型、以及两者相结合的组合预测模型,对未来5年深圳市粮食中铅污染进行预测,以了解其发展趋势。结果灰色预测结果显示2010～2014年深圳市粮食铅污染呈下降趋势,而Cubic曲线模型显示2010～2014年深圳市粮食铅污染呈上升趋势,因为不同的预测方法有各自的优点和缺点,存在一定的误差,所以采用组合预测模型,将两者结合起来,结果显示未来5年深圳市粮食铅污染总体呈上升趋势。结论利用多种预测模型相结合,对未来粮食中铅污染可以得到一定的预测结果。

热休克蛋白70在天疱疮中的意义

目的探讨HSP70在外周血单个核细胞(PBMC)及血清表达与天疱疮发病的关系,为进一步阐明天疱疮的发病机制提供新的理论依据。方法用实时定量PCR方法测定天疱疮患者PBMC中HSP70 mRNA含量;采用ELISA方法测定天疱疮患者外周血血清HSP70含量,同时以健康人为对照。ELISA方法测定天疱疮血清抗Dsg1和抗Dsg3滴度。结果天疱疮患者PBMC中HSP70 mRNA表达显著高于健康人(P<0.05),并且寻常型(PV)组的表达显著高于落叶型(PF)组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清中HSP70的含量显著高于健康对照组(P<0.05),并且PV组的表达显著高于PF组,差异有统计学意义(P<0.05)。抗Dsg1阳性结果与PF组HSP70 mRNA的表达和HSP70存在线性相关;抗Dsg3阳性结果与PV组HSP70 mRNA的表达和HSP70存在线性相关。结论 HSP70的表达增高可能参与天疱疮的致病过程,HSP70有可能如抗Dsg一样,与天疱疮的发生、恶化、好转以及复发成正相关,可能成为诊断和监测天疱疮的一个新指标。

用整肤疗法治疗妇女晚期大骨节病患者效果研究

目的 探索整肤疗法治疗妇女晚期大骨节病患者的疗效.方法 对整肤治疗组27例及电按摩组（对照组）25例进行对比研究.结果 整肤治疗组疗效优良者为21例（77.78%）,电按摩组疗效优良者为12例（48.00%）,整肤治疗组的优良率显著高于电按摩组（χ^2=4.964, P〈0.05）.结论 整肤疗法治疗妇女晚期大骨节病患者是效果良好的自然疗法,方便、有效、作用持久且经济安全,应大力推广应用.

应用免疫组化方法检测天疱疮患者皮肤组织热休克蛋白70的临床研究

目的通过对天疱疮患者皮肤组织热休克蛋白70(HSP70)蛋白表达水平的测定,探讨HSP70在皮肤组织表达与天疱疮发病的关系,为进一步阐明天疱疮的发病机制提供新的理论依据。方法采用免疫组化方法测定62例天疱疮患者皮肤组织HSP70,以正常皮肤组织作为对照进行HSP70测定。结果天疱疮患者水泡部位HSP70表达阳性细胞数>75%,相比正常皮肤HSP70的表达差异有统计学意义(Z=5.42,P<0.01),天疱疮患者炎性部位HSP70表达阳性细胞数>50%,相比正常皮肤HSP70的表达差异有统计学意义(Z=4.73,P<0.01)。结论天疱疮患者水泡部位以及水泡附近炎性细胞HSP70的异常增高表达,为HSP70参与天疱疮疾病的发生和发展提供了直接的证据。

膝关节注射玻璃酸钠治疗类风湿关节炎130例

目的:观察膝关节关节腔局部注射玻璃酸钠注射液治疗类风湿关节炎临床疗效。方法:将180例类风湿关节炎患者分为两组,常规组50例仅给予口服非甾体止痛药(NSAIDs)及免疫抑制剂治疗,玻璃酸钠治疗组给予口服NSAIDs和免疫抑制剂同时,并行膝关节注射玻璃酸钠注射液5次,治疗的第6周进行疗效评价。结果:常规组与玻璃酸钠注射液治疗组总体有效率分别为72%和88.5%;常规组和玻璃酸钠治疗组药物治疗后VAS评分均减低,玻璃酸钠治疗组第6周VAS评分较常规组减低;治疗后,玻璃酸钠治疗组在关节休息痛、关节运动痛、肿胀和僵硬评分与治疗前明显减低,同时,也明显低于常规组。结论:玻璃酸钠注射液膝关节腔局部注射治疗RA效果明显,手段便捷,副作用少,可作为RA临床有效治疗方案之一。

TGF-β对C-28/I2人软骨细胞聚集蛋白聚糖硫酸化修饰的影响

目的观察TGF-β降低对C-28/I2人软骨细胞外基质聚集蛋白聚糖(aggrecan)硫酸化修饰的影响。方法设计构建3个不同靶点人源TGF-β1干扰慢病毒载体,荧光鉴定病毒包装成功后将其感染C-28/I2人软骨细胞系,感染72 h后提取细胞总蛋白,用Western-Blot法分别检测TGF-β1以及aggrecan硫酸化修饰相关酶蛋白因子PAPSS2、PAPST1、CHST15蛋白的相对表达量。结果荧光检测结果表明,TGF-β1干扰慢病毒载体构建成功。TGF-β1慢病毒感染C-28/I2人软骨细胞后与阴性对照病毒组相比,TGF-β1、PAPSS2、PAPST1和CHST15的蛋白表达均有明显降低,其中TGF-β1和PAPSS2的蛋白表达降低为最显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β信号可能是通过调控下游相关酶蛋白因子的表达来对软骨细胞aggrecan硫酸化的修饰产生一定的影响。

青海省兴海县大骨节病病区儿童血清丙二醛和抗氧化酶水平观察

目的 观察青海省兴海县大骨节病（KBD）病区儿童血清中丙二醛（MDA）及抗氧化酶的变化,探讨体内氧自由基损伤与KBD的关系.方法 在青海省兴海县KBD病区唐乃亥乡小学、下鹿圈村小学以及曲什安乡小学选择7～ 12岁的KBD患儿64名作为KBD组,46名健康儿童作为内对照组,在非病区陕西省长安区南樊小学选择59名健康儿童作为外对照组.分别采集其枕部发样和清晨空腹外周血,采用单纯随机抽样方法在每组中各抽取20例发样及血样,应用2,3-二告氨基萘（DAN）荧光法测定发硒和血硒水平；通过生化方法检测样本血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力,总抗氧化能力（T-AOC）及MDA水平.结果 KBD组发硒[（67.64±17.28）μg/L]、血硒[（36.27±13.29）μg/L]和GSH-Px活力[ （59.53±25.23）kU/L]明显低于内对照组[（153.32±24.31）、（63.06±13.66） μg/L,（91.88±22.99）kU/L]和外对照组[ （242.35±38.56）、（98.93±17.18）μg/L,（ 122.68±41.74）kU/L],且内对照组明显低于外对照组（P均＜ 0.05）；KBD组和内对照组SOD活力[（55.80±8.14）、（57.45±6.96）kU/L]、CAT活力[（16.45±5.61）、（ 15.63±9.18）kU/L]和T-AOC水平[（19.80±6.64）、（21.71±8.82）kU/L]均高于外对照组[（42.79±8.10）、（6.05±2.71）、（13.56±5.38）kU/L,P均＜0.05]；KBD组MDA水平[（4.64±1.11 ）μmol/L]高于内对照组[（3.31±1.22） μmol/L]和外对照组[（3.43±1.29） μmol/L,P均＜0.05].结论 KBD存在氧化应激损伤,抗氧化酶在KBD病区儿童血清中升高是一种代偿性反应,体内氧自由基损伤与KBD的发生发展可能有一定的关系.

低硒条件下T-2毒素对大鼠血液中细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平的影响

目的建立以低硒饲料、T-2毒素染毒大鼠大骨节病(KBD)动物模型,检测低硒及T-2毒素对各组大鼠血清中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)及肿瘤死亡因子-α(TNF-α)水平的影响,探讨这些细胞因子在KBD发病机制中的作用。方法断乳SD大鼠随机分为常规组和低硒组2组饲养一个月,确定大鼠处于低硒状态后,再将大鼠随机分为6组,T-2毒素灌胃饲养一个月后处死,依实验设计留取大鼠血清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。结果低硒或高/低T-2干预各组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α浓度水平与常规组相比均有显著性升高,低硒和T-2毒素干预各组大鼠血清IL-6浓度水平与常规组比较增高3～5倍,IL-1β和TNF-α浓度水平与常规组比较也增高1～2倍,且与常规组相比有显著性差异(P<0.05);IL-6、IL-1β、TNF-α的水平常规加低T-2组与低硒组比较没有显著性差异(P>0.05);常规加高/低T-2组2组比较没有显著性差异(P>0.05),低硒加高/低T-2 2组相比有显著性差异(P<0.01),低硒加高/低T-2 2组与其他干预组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α在KBD发病、发展中起着重要作用,在低硒条件下,高T-2毒素的毒性作用更强,低硒是IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高的重要条件,病情严重程度与T-2毒素存在剂量依赖关系。在常规加高/低T-2组,硒有一定的保护作用但并不能抑制T-2毒素对病情发展的作用。本结果为低硒条件下T-2毒素在KBD病因中的作用提供了实验依据。

成人大骨节病患者劳动力影响情况的流行病学调查分析

目的调查并掌握35～60岁成人大骨节病患者劳动力影响情况,为重建晚期大骨节病患者的运动功能、治疗和管理晚期大骨节病患者、提高其劳动能力提供依据。方法按照《大骨节病诊断标准》对大骨节病重病区陕西省彬县韩家乡先锋村35～60岁的人群进行大骨节病流行病学调查,并对该年龄段的大骨节病患者进行临床诊断和分度;接着对诊断出的大骨节病患者进行劳动力下降情况和下降原因进行调查和分析。结果 35～60岁成人大骨节病患者劳动力下降程度非常显著高于非患者(P<0.001),病变越重(Ⅱ、Ⅲ度大骨节病患者)劳动力下降率越高,男性患者劳动力下降率高于女性患者,影响劳动力下降的主要部位是多关节受累,依次为踝、膝、肘、腕关节。结论 35～60岁成人大骨节病患者劳动力下降十分严重,高度重视并及时抓紧治疗和管理好成人大骨节病患者。

低硒条件下T-2毒素对大鼠体重、骨生长的影响

目的研究低硒条件下T-2毒素对大鼠体重、骨生长的影响,探讨低硒、T-2毒素在大骨节病发病中的作用。方法断乳SD大鼠随机分为常规组和低硒组两组饲养1个月,确定大鼠处于低硒状态后,再将大鼠随机分为六组,T-2毒素灌胃饲养1个月,每周末用自动体重称测量大鼠体重,大鼠处死后采用游标卡尺测量大鼠右胫骨长度、中段额状横径进行测量。结果低硒、T-2毒素及其联合作用对大鼠体重、骨生长增长均有影响作用,在低Se饲养干预过程中,第2周末始低硒组大鼠体重增长缓慢,与常规组相比有显著性差异(P<0.05);T-2毒素灌胃后第2周末始,各干预组大鼠体重与常规组相比均有显著性差异(P<0.05),尤其是低硒+高T-2组大鼠体重增长缓慢;大鼠右胫骨和中段额状横径在低硒+高T-2组增长缓慢,与常规组和低硒组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论长期硒缺乏或硒缺乏同T-2毒素的联合作用可影响大鼠体重及骨的生长。

关节清理术后注射透明质酸钠治疗晚期大骨节病疗效

目的探讨关节清理术与术后关节腔内注射透明质酸钠治疗大骨节病膝的疗效。方法 2004~2010年KBD膝关节病变患者754例882膝,行膝关节清理术,术后按是否使用透明质酸钠分成两组,比较疗效及不良反应,随访期限0.5~1.5 a。通过Lequesne指数评分对治疗前后的膝关节功能进行综合评价。结果两组治疗后Lequesne指数总评分均明显下降,与治疗前比较有统计学意义（P〈0.05）,A组Lequesne评分明显低于B组,组间比较差异有统计学意义（P〈0.01）;关节清理术组（B组）优良率为84.6%,而关节清理术加腔内注射透明质酸钠（A组）优良率达96.9%。结论关节清理术后关节腔注射透明质酸钠是治疗大骨节病膝的一种理想治疗方法。

低硒条件下T-2毒素对大鼠多种组织抗氧化酶的影响

大骨节病（KBD）是一种地方性、慢性退行性骨关节病,在流行区域会造成病人的肢体功能受限或残疾。然而其发病机制尚未完全解开,硒和碘营养素缺乏在大骨节病流行的农村地区目前普遍存在[1]。T-2毒素是镰刀菌毒素生长过程中产生的有毒代谢产物,是一种生物因素,它广泛分布于自然界,是常见的污染田间作物和库存谷物的主要毒素,对人、畜危害较大,其生物效应是全身性的。因此,我们推测硒缺乏营养状态下T-2毒素污染食品是大骨节病可能的病因之一。

硝酸镓治疗骨质疏松大鼠血清IL-6、骨钙素水平及骨结构的研究

目的探讨硝酸镓对雌性大鼠切除卵巢后所致骨质疏松的作用机制。方法 8月龄的雌性SD大鼠随机分为实验组和正常对照组。实验组切除双侧卵巢建立骨质疏松动物模型,实验组分为硝酸镓治疗组和骨质疏松组。硝酸镓治疗组:建模成功后,给予1mg/kg硝酸镓腹腔注射,3次/周。骨质疏松组给予生理盐水腹腔注射。正常对照组给予生理盐水腹腔注射。干预3个月后,分别观察各组大鼠胫骨上段结构和检测血清IL-6、骨钙素水平。结果硝酸镓治疗组胫骨上段骨小梁宽度和骨皮质厚度明显高于骨质疏松组(P<0.05),血清IL-6和骨钙素水平与骨质疏松组及正常对照组比较显著增加(P<0.05)。结论硝酸镓对卵巢切除所致的骨质疏松症有明显的治疗作用,其机制可能是通过降低IL-6表达、增加成骨细胞活性,从而达到治疗骨质疏松的作用。

整肤与体表神经电刺激治疗成人大骨节病的对比研究

目的对整肤与体表神经电刺激两种治疗成人大骨节病患者的方法及效果进行对比研究。方法选取成人大骨节病患者52例,采用国际通用的视觉疼痛判定法进行疼痛分级,然后随机分为整肤治疗组与体表神经电刺激治疗组,分别给予整肤疗法和体表神经电刺激疗法对两组成人大骨节病患者进行治疗,通过疗效判断标准确定患者的治疗效果并进行对比分析研究。结果整肤治疗组治疗效果优良率84.6%,总有效率100.0%;体表神经电刺激治疗组治疗效果优良率61.5%,总有效率100.0%。两组优良率比较有显著性差异(P<0.05)。结论两种治疗方法对成人大骨节病患者均有显著疗效,整肤疗法的疗效更佳。

小切口游离体摘除并透明质酸钠注射治疗中晚期大骨节病654例临床研究

目的对小切口游离体摘除并透明质酸钠注射治疗中晚期大骨节病效果研究,探讨中晚期大骨节病手术方法。方法对654例中晚期大骨节病患者,按其关节疼痛的部位及游离体的位置,灵活采用小切口摘除游离体,然后采用透明质酸钠关节腔注射,12d拆线出院。结果优196例,良318例,好转134例,无变化6例,优良率为78.6%(514/654),有效率为99.1%(648/654),无加重病例。结论小切口游离体摘除并透明质酸钠注射治疗中晚期大骨节病,方法简易、疗效显著、恢复快、无并发症,是中晚期大骨节病患者较好的手术治疗方法 ,值得推广。