水稻白叶枯抗性基因Xa-min(t)的抗谱鉴定及其分子标记的筛选

利用来自11个国家的34个水稻白叶枯病菌菌株,以高感品种IR24、含有已克隆的抗白叶枯病基因Xa21的品系C64(IRBB21)、中花11和日本晴4个水稻品种作为参照,对一个含有来自小粒野生稻(Oryza minuta)的抗白叶枯病基因Xa-min(t)的渐渗品系(introgression line)78-15进行了抗谱鉴定。结果表明,Xa-min(t)是一个广谱、高抗的白叶枯病抗性基因,同时,以IR24和78-15为亲本进行杂交,并采用分离群体分组分析法(BSA)、随机引物扩增多态性DNA(RAPD)和序列特异性扩增区(SCAR)筛选与Xa-min(t)连锁的分子标记,共筛选了800个购自Operon公司的随机引物,其中有2个引物,BE05和BE06,可扩增出与Xa-min(t)连锁的RAPD标记BE05_(300)和BE06_(1400)。对这两个DNA片段克隆并测序,根据两端序列设计了两对长度为21～24bp的特异引物扩增供试材料,其中一个RAPD标记可转化成稳定、重复性好的SCAR标记ScBE05_(300),用ScBE05_(300)和BE06_(1400)标记分别对IR24和78-15的杂交F_2代948和719个单株进行的连锁分析表明,这两个标记与Xa-min(t)的连锁距离分别为2.2和3.7cM,并位于Xa-min(t)的同一侧,这些结果为Xa-min(t)的精细物理图谱的构建奠定了基础。

表达千穗谷Ah-AMP基因的转基因烟草抗病性研究

通过PCR从苋属植物千穗谷(Amarathus hypochondriacus)的总DNA中扩增出苋菜抗菌肽(Ah-AMP)的核基因片段,序列分析结果表明该基因长 261 bp,编码一个由86个氨基酸组成的Ah-AMP前体多肽。在构建Ah-AMP基因的植物表达载体pBinAH916后,通过根癌土壤杆菌介导方法转化了烟草。转化再生植株和T_1代转基因烟草的PCR和Southern blot分析表明,Ah-AMP基因已整合到烟草的染色体中,并为单拷贝整合。T_1代转基因烟草的Northern blot分析结果表明,Ah-AMP基因在转基因烟草中至少在mRNA水平上能正常表达。对T_0代转基因烟草进行烟草青枯病的抗病性试验,筛选出两株抗性较强的植株。对T_1代抗青枯病的统计分析发现,其抗病性比起始品种SR1分别提高了2.24和1.62个级别;其病情指数比起始品种降低49.6％和37.3％。对黑胫病也表现一定的抗性,主要表现在推迟发病时间,减缓发病速度上。这些结果表明Ah-AMP基因在植物抗病基因工程研究中可能是一个有潜在应用价值的基因。