山茱萸总皂苷的提取分离与含量测定

目的 :考察不同提取方法对山茱萸总皂苷测定的影响 ,为准确测定山茱萸皂苷的含量提供可行方法 .方法 :①甲醇回流法 ;②乙醚脱脂 甲醇回流提取法 ;③超声法 ;④大孔树脂法 ;⑤乙醇回流法 .上述方法分别用人参皂苷Re、齐墩果酸作对照 ,比色法测定不同提取液中总皂苷的含量 .结果 :① ,② ,③和⑤提取法所测总皂苷含量分别为 :5 .95 % ,6 .98% ;2 .87% ,3.12 % ;3.80 % ,3.92 % ;6 .17%和8.13% .④法测定总皂苷含量为 1.5 2 %和 1.73% .结论 :不同提取方法对山茱萸总皂苷含量的测定有较大的影响 .

解淀粉芽孢杆菌YN-1抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

本文以解淀粉芽孢杆菌YN-1菌株为研究对象,利用PCR方法从基因组DNA中扩增出编码TasA抑菌基因的全长DNA,并构建pGEX-4T2/TasA原核表达载体,获得TasA-GST融合表达的抑菌蛋白。测序结果表明,解淀粉芽孢杆菌YN-1TasA基因核苷酸序列全长为786bp(GenBank登录号:EU131674),编码261个氨基酸残基;同源性分析表明,它与解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens FZB42(YP_001421886)序列的同源性最高,达98%,预测蛋白分子量为31kD。SDS-PAGE分析表明,TasA基因能在大肠杆菌BL21中表达,Western印迹分析pGEX-4T2/TasA原核表达载体,检测到约57kD的TasA-GST融合外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量大小相符。表达产物细胞裂解液上清经Ni柱层析,表明浓度为500mmol/L咪唑洗脱缓冲液时获得较高浓度和纯度的纯化蛋白。进一步抑菌活性分析表明表达产物对黄瓜灰霉病病原菌检测平板上显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为今后深入研究TasA抑菌蛋白基因以及抗病转基因工程提供了参考。

自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗进展期肿瘤的初步研究

目的 :探讨自体肿瘤疫苗的作用机制及临床意义。方法 :30例进展期肿瘤病人术后 ,以自体肿瘤疫苗辅助主动免疫治疗。术后第 4周开始接种 (共 4次 ,每次间隔 7～ 10d) ;接种前 3天及 4次接种后 1w ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,测定CD+8 IFN γ+ ,CD+8 IL 10 + 细胞比例及CD+4 IFN γ+ 、CD+4 IL 10 + 细胞比例 ;同时采集血清检测血清IFN γ、IL 10水平 ;用PPD及自体抗瘤抗原做皮肤迟发型过敏反应试验 ,4 8h后测量红斑、硬结大小 (mm)。临床随访。结果 :自体免疫苗治疗后 :①血清IFN γ水平升高 ,高 (5 98± 2 4 0 )pg ml升至 (11 2 0± 4 76 )pg ml;而IL 10水平由 (2 6 0 4± 12 85 )pg ml降至 (8 12± 3 6 9)pg ml,差异有非常显著性 (P <0 0 5 )。②CD+8 IFN γ+ 双阳性细胞比例由 (3 72± 1 5 6 ) %升至 (8 0 1± 2 5 4 ) % ;CD+4 IFN γ+ 双阳性细胞比例由 (4 5 2± 1 0 8) %升至 (7 94± 2 0 6 ) %。差异有非常显著性 (P <0 0 5 )。③治疗前后病人对自体肿瘤抗原的特异性DTH反应明显增强 (P <0 0 1)。④病人耐受性良好 ,无溃疡等严重副作用发生。⑤随访结果显示 :2 2例病人无瘤生存时间超 3年 ,其中部分病人无瘤生存时间超过 5年。结论 :①自体肿瘤疫苗可激发病人特异性细胞介导的免疫反?

人结直肠癌组织中B7和ICOS分子mRNA的表达

目的 :通过原位检测B7 1,B7H1,B7H2和ICOS等分子mRNA在结直肠癌细胞及肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)中的表达 ,以期探讨肿瘤微环境中Th2型细胞因子表达上调的可能机制 .方法 :采用原位杂交技术 ,用地高辛标记的寡核苷酸探针检测了 2 2例人结直肠癌组织B7 1,B7H1,B7H2和ICOS分子mRNA表达状况 ,并结合临床特点加以综合分析 .结果 :肿瘤组织和肿瘤浸润淋巴细胞除表达B7 1外 ,均可见B7H1,B7H2和ICOSmRNA表达 ,但肿瘤细胞的表达水平显著高于TIL的表达水平 ,具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;B7家族分子在癌细胞和TIL中的表达均与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、有无区域淋巴结转移无关 ,在TIL中B7H1表达与肿瘤浸润深度有关 (P <0 .0 5 ) ;在癌细胞中则与之无关 (P =0 .15 5 ) ;在癌细胞和TIL中B7H1和ICOS分子表达与远处转移之间具有显著性差异 (P均 <0 .0 1) .结论 :肿瘤细胞和TIL表达B7H1,B7H2和ICOS分子可能与肿瘤微环境中Th2型细胞因子占优势有关 .

缓释成骨生长肽聚乳酸-聚羟乙酸共聚物微球的制备及其体外释放实验(英文)

背景:既往动物实验证实,局部或全身应用成骨生长肽,能够促进骨折愈合。但存在着半衰期短及口服生物利用率低等缺点,限制了其在临床上的应用。目的:用可吸收性生物材料包裹成骨生长肽于微球中,观察成骨生长肽在体外释放的过程及其结构变化,为控制释放系统选取合适的载体材料。设计:分组观察对比实验。单位:西安交通大学生命科学院实验室。材料:成骨生长肽由西安蓝晶生物科技公司按照Fmoc系统合成。质谱分析其纯化后纯度超过98%,Mr1523650符合理论Mr1523750),其序列分析符合理论序列。聚乳酸-聚羟乙酸共聚物(PLGA)(50∶50,Mr30000;75∶25Mr80000)由山东医疗器械研究所提供。方法:应用两种不同Mr的PLGA,用复乳溶剂挥发法包裹成骨生长肽,制备成骨生长肽PLGA微球。利用扫描电镜观察微球的表面结构及形态。应用激光粒度计数仪测量微球的粒径分布。高效液相色谱法检测成骨生长肽的包裹率、缓释时间及制备过程对多肽的结构稳定性的影响。结果:①成功制备了较均匀的圆形成骨生长肽微球。PLGA50∶50微球的平均粒径为(19.6±4.5)μm,包裹率为(83.9±4.2)%,载药率为(83.9±4.2)%;PLGA75:25微球的平均粒径为(35.8±3.6)μm,包裹率为(65.6±6.8)%,载药率为(65.6±6.8)%。②高效液相色谱法结果显示,成骨生长肽在制备过程没有发生化学结构改变及凝集,与制备前的结构一致。两种微球均有突释现象,但成骨生长肽-PLGA75∶25微球突释较重,成骨生长肽-PLGA50∶50微球能够缓释成骨生长肽56d,且累计缓释效果良好,成骨生长肽-PLGA75∶25缓释70d。成骨生长肽-PLGA50∶50微球35d的成骨生长肽累计缓释率低于成骨生长肽-PLGA75∶25,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:与成骨生长肽-PLGA75∶25缓释微球相比,成骨生长肽-PLGA50∶50缓释微球具有较好的控制释放效果,且缓释时间能够满足骨折或骨缺损愈合局部应用需要。

同时接种解磷细菌与丛枝菌根真菌对低磷土壤红三叶草养分利用的影响

【目的】研究解磷细菌和丛枝菌根真菌同时接种,对低磷土壤养分利用的影响。【方法】采用盆栽试验,通过测定生长于石灰性低磷土壤上红三叶草地上部的生物量及氮、磷营养吸收和根际酸性磷酸酶活性,研究丛枝菌根真菌、4种解磷细菌(编号分别为B1、B2、B3和B4)单独接种及同时接种对石灰性低磷土壤植物生长及氮、磷养分利用的影响。【结果】在石灰性低磷土壤条件下,4种解磷细菌单独接种对红三叶草植株地上部的生长和总吸磷量均无促进作用;单独接种丛枝菌根菌或不同解磷细菌与丛枝菌根真菌同时接种,均能显著提高红三叶草地上部干质量和总吸氮、磷量;在同时接种处理中,解磷细菌B4与丛枝菌根真菌间的相互作用对红三叶草的生长和氮、磷营养吸收具有明显的协同效应,能显著提高红三叶草地上部干质量、总吸氮和吸磷量及红三叶草根际酸性磷酸酶的活性。【结论】在石灰性低磷土壤中,解磷细菌与丛枝菌根真菌同时接种,对植物的氮、磷养分吸收具有明显的互作效应,但这种互作效应与解磷细菌和丛枝菌根真菌的种类有关,解磷细菌B4与丛枝菌根菌同时接种效果最佳。

哺乳动物外胚间充质细胞的表型和形态学研究

目的 :探讨胚胎中外胚间充质细胞表型和形态鉴定。方法 :取E12SD大鼠胚胎颌突组织进行免疫组化鉴定和电镜观察。结果 :免疫组化抗LNGFR、NF、NSE、S10 0、Vimentin呈阳性着色 ,抗GFAP呈阴性着色 ;细胞主要为间充质样细胞 ,形状不规则 ,呈多突起的星形或梭形 ,突起不规则 ;核、浆比例大 ;核仁明显 ,大、靠边 ;常染色质多 ,异染色质少 ;含有大量的线粒体及少量粗面内质网及核糖体。电镜结果显示细胞代谢旺盛 ,增殖活性高 ,处于未分化状态。结论 :外胚间充质中存在表达神经嵴前体细胞标志LNGFR的细胞 ,而且这些细胞在形态上也明显处于未分化状态 。

碱性MAGE家族新成员restin在大肠杆菌中的表达和抗体制备

目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载体中。经过温度诱导获得restin表达蛋白。利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清。以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布。结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000。将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Westernblot检测其效价为1∶800。间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内。结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件。

pH敏感的GMA修饰葡聚糖水凝胶的制备与体外释药研究

目的:研究用于控释体系中的可生物降解的pH敏感水凝胶的制备方法及其智能释药特性.方法:过硫酸铵(APS)和四甲基乙二胺(TEMED)作引发体系,甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)修饰的葡聚糖(GMA-dex)与丙烯酸(AAc)自由基共聚制备水凝胶.GMA-dex中GMA的取代度(DS)用核磁共振测定.在无酶的人工胃液与人工肠液中测定凝胶的平衡溶涨率,并分别测定载有平阳霉素的水凝胶在两种释放介质中的释药曲线.结果:GMA的取代度是10.5,凝胶在人工肠液中的溶涨率明显大于人工胃液,释放平阳霉素的速率也明显快于胃液.24h后,人工胃液与肠液中的累积药物释放率分别为22%和43%.结论:聚(GMA-dex/AAc)水凝胶的溶涨与释药具有pH敏感性.

自体肿瘤瘤苗对荷瘤鼠Th1、Th2型细胞因子及细胞毒作用的影响

目的研究经处理的H22肝癌细胞肿瘤瘤苗作为全细胞瘤苗对H22荷瘤小鼠体内Th1/Th2细胞比例和细胞因子的影响以及CTL的杀伤活性。方法用加重组白细胞介素2、重组粒细胞单核细胞集落刺激因子及福氏不完全佐剂制成疫苗,建立荷瘤小鼠模型,用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、荷瘤组、正常组小鼠脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测单个核细胞中的Th1和Th2细胞,并取血检测血清中IL-10、IFN-γ水平。结果效靶比为200:1时,免疫小鼠脾细胞体外杀伤亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于荷瘤组的13.6%,正常组的7.5%,以及对S180细胞的9.1%(P均<0.05)。瘤苗免疫组Th1细胞及Th1/Th2细胞的比值显著升高(P<0.01),血清IFN-γ较对照组明显升高(P<0.01);血清IL-10较对照组明显降低(P<0.01)。结论肿瘤细胞加小剂量IL-2和GM-CSF及佐剂组成的肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应。

聚氨酯缓释微球的制备及其体外释放性能的研究

用悬浮缩聚法制备了可生物降解的聚氨酯微球，以硝苯地平为模拟药物，讨论了影响药物释放性能的一些因素。结果表明,当摩尔比n_(NCO-)/n_(OH-)=5/6,摩尔比n_(-OH-(PEG))/n_(-OH-(LIG))=1/5时,所得的微球包封率为78.22％,载药量为16.72％,平均粒径为68.20μm,粒径分布为1.83,微球的释放性能最好,而且载药微球对温度和湿度的稳定性较好。

自体肿瘤疫苗主动特异性免疫治疗对结肠癌病人细胞免疫功能的影响

目的 探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法 2 0例结肠癌患者术后 ,以自体肿瘤疫苗行主动免疫治疗。术后第 4周开始免疫接种 (共 4次 ,每次间隔 7～ 10天 ) ;接种前 3天及 4次接种后 1周 ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,测定CD+ 8-IFN -γ+ ,CD+ 8-IL - 10 + ,细胞比例及CD+ 4 -IFN -γ+ 、CD+ 4-IL - 10 + 细胞比例 ;同时采集血清检测血清IFN -γ、IL - 10水平 ;用自体肿瘤抗原做皮肤迟发型过敏反应试验 ,4 8小时后测量红斑、硬结大小 (mm) ;临床随访。结果 自体疫苗治疗后 :血清IFN -γ水平升高 ,由 (6 .2 9± 1.96 )pg/ml升至 (10 .94± 3.2 1) pg/ml;而IL - 10水平由 (2 1.91± 10 .19)pg/ml降至(10 .84± 6 .0 1) pg/ml。有显著性差异 (P <0 .0 5 )。CD+ 8-IFN -γ+ 双阳性细胞比例由 (4.0 2± 1.13) %升至 (8.81± 2 .90 ) % ;CD+ 4 -IFN -γ+ 双阳性细胞比例由 (4.19± 1.10 ) %升至 (6 .99± 1.87) %。有显著性差异 (P <0 .0 5 )。治疗前后患者对自体肿瘤抗原的特异性DTH反应明显增强 (P <0 .0 1)。患者耐受性良好 ,无溃疡等严重副作用发生。 11例无瘤生存时间为 36～ 4 8个月 (仍健在 ) ;6例无瘤生存时间为 11～ 14个月 (仍健在 ) ;3例生存 2 4～ 2 6个月 (死于肝转移 )。

乙醇沉淀法快速制备纤维蛋白胶

目的 建立一种快速简便的方法制备纤维蛋白 ,缩短纤维蛋白胶的制备时间。方法 从病人静脉采集全血 ,迅速分离血浆 ,然后按 10∶1加无水医用乙醇在一定条件下孵育后与含有人源性凝血酶原的氯化钙混合而得。结果 检测其纤维蛋白原、血浆纤维粘连蛋白、凝血因子ⅩⅢ等含量均符合标准以检验其效果。结论 乙醇沉淀法是一种简便。

慢性丙型肝炎活化杀伤细胞perforin mRNA原位表达与肝损伤的关系

目的 :原位研究肝组织内具有细胞毒活性活化细胞的分布 ,探讨细胞免疫在慢性丙肝发病机制中的作用 .方法 :以随机引物法标记人perforincDNA探针 ,对慢性丙肝患者肝活检标本进行原位杂交 ,观察肝局部浸润炎性细胞perforinmRNA的表达及分布 ,分析他们与肝损伤之间的关系 .结果 :Perforin阳性细胞在整个肝小叶内均可检见 ,有炎性细胞浸润区均有 perforin阳性细胞分布 ,浸润阳性细胞数量因病变部位的不同而有较大差异 ,慢性丙肝点状坏死区阳性率最高达71 .9% ,其次是片状坏死区 (31 .0 % ) ,门管区阳性率为 9.2 % ,小叶内非坏死区仅为 4 .8% .按HAI≤ 8,9～ 1 2和≥ 1 3的轻度、中度、重度慢性肝炎进行划分 ,对比分析不同程度间肝小叶内perforin阳性细胞计数 ,ALT和HAI之间的关系 ,无直线相关性 .发现重度慢性丙肝 perforin阳性细胞数显著高于轻度和中度慢性丙型肝炎 ,相应ALT水平亦高于前二者 .结论 :Perforin阳性细胞与慢性丙肝肝细胞坏死有关 ,perforin是效应细胞杀伤靶细胞的主要效应分子 ,尤为在丙肝点状坏死和片状坏死区 。

颌突外胚间充质干细胞参与颅骨缺损修复的作用

目的:探讨颌突外胚间充质干细胞参与颅骨缺损修复的作用。方法:将外胚间充质干细胞复合煅烧骨后移植入大鼠颅骨缺损处,以大鼠成纤维细胞、空白胶原作为对照,1、3、6个月后取材,经HE染色,Mallory改良三色法鉴定。结果:HE染色结果显示实验组成骨的效果明显好于对照组;图像分析见实验组的骨基质面积明显多于对照组,统计学分析P<0.01,有明显差异。结论:提示移植的外胚间充质干细胞在局部颅骨组织内存活并具有一定的功能。

以木质素为原料合成聚氨酯的研究进展

综述了国内外以木质素、改性木质素代替多元醇为原料合成聚氨酯的研究方法 ,并对木质素在聚氨酯领域中的应用前景作了展望。

诱导颌突外胚间充质干细胞向骨骼肌细胞分化

目的:探讨外胚间充质干细胞(Ectomesenchymal stem cells,EMSC)向骨骼肌细胞分化的能力。方法:利用二甲基亚砜(Dimethyl sulphoxide,DMSO)液诱导外胚间充质干细胞分化,通过免疫组化和逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)鉴定,以大鼠成纤维细胞作为对照。结果:RT-PCR结果说明诱导的外胚间充质干细胞表达骨骼肌细胞特异标志(Desmin)。而对照组细胞形态未出现变化,也无骨骼肌细胞标志表达。结论:外胚间充质干细胞经DMSO液诱导后可成为骨骼肌细胞。