SH-SY5Y细胞基因片段文库及其数据库的建立

目的 建立SH SY5Y细胞基因片段文库和一种对大量cDNA片段数据管理系统的方法。方法 采用RD PCR技术构建SH SY5Y细胞基因片段文库 ,并对每一个克隆进行测序。应用FOXPRO编制一个软件对其大量的信息进行系统化管理。结果 应用RD PCR技术建立了细胞的cDNA片段文库 ,由 12 0 0余个片段克隆组成 ;应用FOXPRO制作了基因片段数据信息管理系统的软件 ,对此文库片段的测序数据进行管理。结论 采用RD PCR技术是一个很好的建立基因片段文库的方法 ;建立了基因片段数据信息管理系统的软件进行这个文库数据的管理。

一个表达序列标签的克隆——应用限制性显示技术

目的应用限制性显示PCR(restrictiondisplaypolymerasechainreaction,RD-PCR)技术分离克隆SH-SY5Y细胞的基因片段。方法从SH-SY5Y细胞中分离提纯mRNA,然后以Oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3AⅠ酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物扩增后,与载体pMD18相连,克隆、测序。结果分离出一段cDNA,经Blast分析,发现与基因组17号染色体的一段序列具有高度的相似性,运用GenScan分析这段DNA序列,提示这段表达序列标签(expressedsequencetag,EST)可能是一个未知基因的一部分。结论RD-PCR技术是一种简便、有效的分离克隆基因片段的方法,运用生物信息学对EST的染色体定位以及下一步的实验可能具有一定的指导意义。