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长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体的构建及表达
1
作者
韩稳琦
李国良
+4 位作者
程功
吕颖
武金娥
蒋永荣
孙超峰
《山西医科大学学报》
CAS
2015年第5期392-395,501,502,共6页
目的构建先天性长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体p EGFP-C2-HERG,并检测其于活体细胞中表达及定位。方法采用限制性内切酶双酶切法和基因重组技术将HERG基因片段构建到真核表达载体p EGFP-C2中,通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验...
目的构建先天性长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体p EGFP-C2-HERG,并检测其于活体细胞中表达及定位。方法采用限制性内切酶双酶切法和基因重组技术将HERG基因片段构建到真核表达载体p EGFP-C2中,通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证;构建成功的p EGFP-C2-HERG真核表达载体用脂质体转染法转染HEK293细胞后通过蛋白免疫印迹法再次鉴定重组蛋白的表达,并通过激光共聚焦显微镜观察其荧光蛋白表达及定位。结果琼脂糖凝胶电泳证实新构建的真核表达载体p EGFP-C2-HERG碱基大小正确,DNA测序提示HERG基因碱基序列与模板一致,新构建表达载体成功转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达。结论成功构建p EGFP-C2-HERG真核表达载体,转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达通道蛋白;此方法构建的表达绿色荧光的真核表达载体为药物筛查、突变型基因的研究奠定了基础。
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关键词
遗传性长QT综合征
HERG基因
基因重组
蛋白表达
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职称材料
题名
长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体的构建及表达
1
作者
韩稳琦
李国良
程功
吕颖
武金娥
蒋永荣
孙超峰
机构
西安交通大学第一附属医院心内科教育部心脏离子通道病重点实验室
陕西省人民
医院
心
内科
出处
《山西医科大学学报》
CAS
2015年第5期392-395,501,502,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(81270236)
文摘
目的构建先天性长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体p EGFP-C2-HERG,并检测其于活体细胞中表达及定位。方法采用限制性内切酶双酶切法和基因重组技术将HERG基因片段构建到真核表达载体p EGFP-C2中,通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证;构建成功的p EGFP-C2-HERG真核表达载体用脂质体转染法转染HEK293细胞后通过蛋白免疫印迹法再次鉴定重组蛋白的表达,并通过激光共聚焦显微镜观察其荧光蛋白表达及定位。结果琼脂糖凝胶电泳证实新构建的真核表达载体p EGFP-C2-HERG碱基大小正确,DNA测序提示HERG基因碱基序列与模板一致,新构建表达载体成功转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达。结论成功构建p EGFP-C2-HERG真核表达载体,转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达通道蛋白;此方法构建的表达绿色荧光的真核表达载体为药物筛查、突变型基因的研究奠定了基础。
关键词
遗传性长QT综合征
HERG基因
基因重组
蛋白表达
Keywords
congenital long QT syndrome
HERG gene
gene recombination
protein expression
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体的构建及表达
韩稳琦
李国良
程功
吕颖
武金娥
蒋永荣
孙超峰
《山西医科大学学报》
CAS
2015
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