维生素D抑制细颗粒物(PM_(2.5))诱导的A549人肺泡上皮细胞自噬及细胞因子释放

目的探讨维生素D(VD)在细颗粒物(PM_(2.5))诱导A549人肺泡上皮细胞发生自噬过程中的作用及对上皮细胞因子产生的影响。方法燃烧器的乙炔扩散火焰上部采集制备PM_(2.5),采用PM_(2.5)体外处理A549细胞,并给予VD或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)及beclin-1的表达,实时荧光定量PCR检测A549细胞白细胞介素25(IL-25)、IL-33及胸腺间质淋巴细胞生成素(TSLP)的mRNA表达,透射电镜观察自噬体的形成。结果PM_(2.5)导致A549细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ比值、beclin-1蛋白表达增加,自噬体形成增多,给予VD处理后,PM_(2.5)诱导的细胞自噬水平降低;在3-MA抑制A549细胞自噬水平后,PM_(2.5)仍可诱导细胞自噬,且VD依然可逆转PM_(2.5)诱导的自噬;PM_(2.5)通过诱导自噬促进A549细胞分泌IL-25、IL-33及TSLP,而3-MA及VD可抑制该过程。结论VD抑制PM_(2.5)诱导的A549细胞自噬及细胞因子释放,发挥保护作用。

VitD在降低PM_(2.5)对肺泡上皮细胞毒性中的影响分析

目的分析维生素D(vitamin D,VitD)在降低PM_(2.5)对肺泡上皮细胞毒性中的影响。方法采用透射电子显微镜和激光诱导荧光分析对比VitD处理前后,PM_(2.5)的毒性能力。MMT观察VitD处理前后细胞生存率,分析PM_(2.5)对A549的毒性影响。结果VitD作用后的PM_(2.5)平均粒径减小5.5 nm,颗粒聚结和团聚更为明显,颗粒平均条纹长度增加、弯曲度减小,差异有统计学意义。PM_(2.5)条纹间距无统计学差异,有明显减小,接近0.06 nm。VitD溶液从PM_(2.5)解吸3环和4环多环芳香烃(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs),减少PM_(2.5)表面附着的致病性PAHs。PM_(2.5)可引起肺上皮细胞A549生存率明显下降,给予VitD干预后,PM_(2.5)对A549细胞生存率的抑制改善了54.7%,PM_(2.5)的生物毒性降低。结论VitD可减少PM_(2.5)上吸附的致病性PAHs,抑制其致病活性,减小PM_(2.5)对肺上皮细胞的毒性。