肝脏脱细胞基质微颗粒促进HepG2细胞球状体形成与肝相关功能分化的研究

目的探索肝脏脱细胞基质(dECM)微颗粒对3D培养HepG2细胞的肝相关功能状态的影响。方法通过肝脏门静脉灌流脱细胞液等成分,制得肝脏dECM。用组织学特殊染色、扫描电镜及免疫组织化学等方法鉴定脱细胞效果以及dECM成分。通过液氮冷冻研磨将dECM制备成微颗粒,通过差速离心分离不同粒径范围的微颗粒。利用超低吸附培养板进行HepG2细胞球状体3D培养,向培养基中加入dECM微颗粒,观察其对HepG2细胞球状体的形成及其肝相关功能状态的影响。利用ELISA、PCR检测相关蛋白的分泌和基因表达。结果制得的dECM无细胞结构,保留了细胞外基质的相关成分。在液氮研磨与差速离心分离后,可获得粒径在微米级的dECM微颗粒。dECM微颗粒可以促进HepG2细胞形成更致密的球状体;加入dECM微颗粒的HepG2球状体,细胞分泌白蛋白和尿素氮的水平增加(P<0.05);PCR结果表明,加入dECM微颗粒后,细胞的肝功能相关基因的表达水平显著提升(P<0.05)。结论肝脏脱细胞基质微颗粒可以促进HepG2细胞球状体的形成和HepG2细胞球状体的肝相关功能分化。

低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其机制

目的探讨低剂量5-Fu与腺病毒表达的IL24联用对HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法采用PCR、酶切、连接等方法构建pAd-IL24腺病毒表达载体,Western blot检测IL24蛋白水平表达情况。CCK8法确定5-Fu联用剂量,检测与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞的抑制效果,并计算联合指数。流式细胞术检测不同腺病毒感染复数及不同5-Fu浓度下绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性细胞的比例。流式细胞术检测5-Fu作用前后HepG2细胞表面柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)的表达变化。结果成功构建腺病毒表达载体pAd-IL24。确定5-Fu联用剂量为1μg/ml和2μg/ml,Ad-IL24与低剂量5-Fu联用可以协同抑制HepG2肝癌细胞生长,联合指数分别为0.75和0.64。低剂量5-Fu作用于HepG2后使其表面CAR水平显著增加(P<0.01)。结论低剂量5-Fu与Ad-IL24联用对HepG2肝癌细胞系的抑制有协同作用,可能与5-Fu上调HepG2表面CAR水平相关。

髓系来源的抑制性细胞在小鼠H22原位种植性肝癌中的表达及其意义

目的:比较小鼠H22原位种植性肝癌模型中髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)和调节性T细胞(Tregs)的表达,确定主要的免疫抑制性细胞。并探讨主要免疫抑制性细胞在小鼠H22原位种植性肝癌模型中的意义。方法:建立小鼠H22原位种植性肝癌模型,用流式细胞术的方法比较外周血、脾脏、肿瘤组织中MDSCs、Tregs的比例。分析MDSCs与CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、NK细胞、NKT细胞的相关性。通过脾脏切除的方法下调MDSCs的表达,观察对肿瘤存活的影响。结果:MDSCs的比例无论在外周血、脾脏还是肿瘤组织中都显著高于Tregs。MDSCs的比例与CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、NK细胞、NKT细胞呈负相关。下调MDSCs的比例可以显著延长小鼠存活期。结论:小鼠H22原位种植性肝癌中主要的免疫抑制性细胞是MDSCs。MDSCs的高表达预示着不良的小鼠存活期。