多种代谢物与巨噬细胞极性调节研究进展

巨噬细胞是最重要的一类固有免疫细胞,功能多样性和极化可塑性是其重要特征。从极化角度,巨噬细胞可大致分为具有杀伤病原体和肿瘤细胞,并具有较强促炎因子生成能力的M1型;或以表达抑炎因子、促进组织修复和血管生成为主要特征的M2型。并且,巨噬细胞能够根据生理变化或疾病演进过程主动调节自身信号,使其向不同方向极化或重塑,从而趋向形成不同功能和不同表型的巨噬细胞。代谢物是最重要的基本生理病理活动特征的外部因素之一,然而生理变化或疾病演进过程中,代谢物对巨噬细胞极性重塑的影响还有待归纳总结。因此,本综述以外泌代谢物或外泄的胞内代谢物为切入点,系统地总结不同代谢物对巨噬细胞极化的影响和作用机制,并梳理出多种疾病病理微环境存在的代谢物变化对巨噬细胞极化的影响及其对疾病进展的作用,旨在从多因素、多维度角度探讨细胞代谢物、巨噬细胞极化信号和疾病发生之间的联系。

骨质疏松诊断标志物的筛选及其与免疫浸润的关系

目的寻找潜在的骨质疏松(OP)诊断标志物,并分析免疫浸润在OP发展中的作用。方法使用源自基因表达综合数据库(GEO)的基因表达谱数据集来鉴定OP的差异表达基因(DEGs),并通过富集分析揭示DEGs的潜在机制;采用最小绝对值收敛和选择算法(LASSO)逻辑回归分析和支持向量机递归特征剔除算法(SVM-RFE)筛选和验证OP的诊断标志物;使用CIBERSORT评价OP组织中免疫细胞的浸润情况,分析诊断标志物与免疫细胞浸润的相关性。结果本研究共筛选出5个诊断相关基因为关键基因:SKAP2、SLC30A3、TDRD12、RPL10和CSPP1。SKAP2、SLC30A3、TDRD12、RPL10和CSPP1被确定为OP的诊断标志物。SKAP2、SLC30A3、TDRD12、RPL10联合CSPP1诊断OP的效能较高。22种免疫细胞的相关热图显示,活化的肥大细胞与浆细胞呈正相关,静息肥大细胞与嗜酸性粒细胞呈正相关。此外,活化的CD4记忆T细胞与调节性T细胞呈负相关,巨噬细胞与记忆B细胞呈负相关。结论免疫细胞浸润在OP的发生和发展中至关重要,静息CD4记忆T细胞和M2巨噬细胞可能参与了OP的发病机制,这些结果有助于为OP的诊断和治疗提供新的思路。

长链非编码RNA ZIM2-AS1在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据探讨长链非编码RNA(lncRNA)ZIM2-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义和诊断价值。方法:从TCGA数据库下载374例HCC组织样本和50例癌旁组织样本的转录组测序(RNA-seq)数据及相关临床资料,基于R语言进行相关生物信息学分析,以解析ZIM2-AS1在HCC中的表达模式及其与临床病理特征、预后及免疫细胞浸润的相关性,并评估其在HCC中的诊断价值;采用qRT-PCR检测ZIM2-AS1在人正常肝细胞及不同HCC细胞系中的表达情况。结果:ZIM2-AS1在HCC组织中的表达呈升高趋势(P<0.001),其表达水平与患者年龄、性别、肿瘤N分期、组织学分级和AFP水平显著相关(P均<0.05),且高表达患者的总生存期(OS)和疾病相关生存期(DSS)显著短于低表达患者(P<0.05),是影响HCC患者OS的独立危险因素。肿瘤免疫细胞浸润分析显示,ZIM2-AS1与Th2细胞、CD56brightNK细胞、滤泡辅助性T细胞(Tfh)、中性粒细胞和浆细胞样树突状细胞(pDC)的浸润水平显著相关(|Spearman's r|>0.1,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示ZIM2-AS1表达水平对HCC、N0分期、组织学分级G1和G2期、OS及DSS均具有一定诊断价值(AUC均>0.50)。qRT-PCR结果显示ZIM2-AS1在HCC细胞系中的表达水平显著高于人正常肝细胞(P均<0.05)。结论:LncRNA ZIM2-AS1的高表达是HCC预后不良的独立危险因素,具有成为HCC诊断、预后判断及肿瘤免疫微环境评估生物标志物的潜在应用价值。

复方大黄素黄芩素及其拆方对大鼠重症急性胰腺炎的治疗作用

目的探讨复方大黄素黄芩素组方的合理性,分析方中二组分对全方治疗重症急性胰腺炎(SAP)作用的影响。方法SPF级雄性SD大鼠120只,采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法制备大鼠重症急性胰腺炎模型,根据拆方分析实验设计,设正常对照组、假手术组、单纯SAP组、阳性对照药单倍剂量大黄素组(A组,大黄素3.2 mg/kg)、阳性对照药2倍剂量大黄素组(2A组,大黄素6.4 mg/kg)、单倍剂量黄芩素组(B组,黄芩素7 mg/kg)、2倍剂量黄芩素组(2B组,黄芩素14 mg/kg)、复方低剂量组(1/2AB组,大黄素1.6 mg/kg+黄芩素3.5 mg/kg)、复方中剂量组(AB组,大黄素3.2 mg/kg+黄芩素7 mg/kg)、复方高剂量组(2AB组,大黄素6.4 mg/kg+黄芩素14 mg/kg)进行实验,各组均12只大鼠。各组干预药物均于模型复制后立即依次尾静脉注射不同剂量药物溶液(2 mL/kg),正常对照组、假手术组、单纯SAP组尾静脉注射等量生理盐水。各组大鼠分别于给药后12 h全部处死,收集胰腺组织、血清,分别进行胰腺组织病理学评分、血清ɑ-淀粉酶活性测定。结果胰腺组织病理学评分和血清α-淀粉酶活性,各治疗组均明显低于单纯SAP组(P<0.05),AB组均明显低于2A和2B组(P<0.05)。各复方组(1/2AB、AB、2AB组)随着剂量增加,胰腺组织病理学评分降低。结论复方大黄素黄芩素的疗效好于2倍剂量大黄素,也好于2倍剂量黄芩素,组方中大黄素、黄芩素之间为协同作用,复方大黄素黄芩素组方合理。

视神经病变诱导反应蛋白在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的研究视神经病变诱导反应蛋白(optineurin,OPTN)基因在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中的表达情况,探讨OPTN基因参与MM发生发展的机制和临床价值。方法利用3个基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)数据集(GSE6477、GSE136324和GSE24080),分析OPTN在MM中的表达;通过收集MM患者临床骨髓标本,利用qRT-PCR实验进一步验证OPTN在MM患者中的表达情况。使用Kaplan-Meier生存曲线、受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析OPTN在MM预后和诊断中的价值。同时利用癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载MM转录组数据,根据OPTN mRNA表达水平中位数界,将MM患者分为OPTN高、低表达组,用R语言limma包筛选差异表达基因后,对差异基因进行富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)从而挖掘OPTN在MM中的潜在临床意义及其可能参与的分子机制。结果OPTN在MM组织中表达显著低于正常组织(P<0.05);OPTN表达变化与MM患者的国际分期体系(International Staging System,ISS)显著相关(P<0.05);ROC结果显示OPTN表达变化可区分正常人和MM患者。生存分析显示OPTN低表达患者总生存率(overall survival,OS)显著低于高表达患者(P<0.05)。GO、KEGG和GSEA富集分析结果表明,OPTN可能通过调控NOD样受体、NF-κB、TNF及RAS/MAPK等通路进而影响细胞凋亡、自噬及调节细胞免疫反应等参与MM的进程。结论OPTN在多发性骨髓瘤中低表达,与患者预后不良相关,可能作为MM诊断及治疗的重要潜在生物标志物。

双病毒共感染的人脐带间充质干细胞多重靶向肝癌细胞的治疗体系的建立

目的基于间充质干细胞(MSC)向肿瘤部位归巢的能力,利用E1A基因修饰的人脐带间充质干细胞(HUMSC)包装出携带人端粒酶逆转录启动子(hTERTp),以驱动抑癌基因的腺病毒,并感染HepG2肝癌细胞系。方法利用组织块贴壁法从脐带Wharton’s jelly(WJ)分离培养HUMSC。以pGL3-basic、pCDH1-MSC1-EF1-Ds Red、pAd-Track等载体为基础,用聚合酶链反应(PCR)、overlap PCR、酶切、连接等技术构建pGL3-hTERTp报告基因载体、pLentiR.E1A慢病毒表达载体、pAd-hTERTp腺病毒表达载体,经测序验证其正确性。利用双荧光素酶的方法鉴定hTERTp的特异性。利用实时定量PCR的方法分别检测MSC.pLentiR+pAd-Track(共转染腺病毒及对照慢病毒的MSC)和MSC.pLentiR.E1A+pAdTrack中不同时间点的病毒相对拷贝数,用电子显微镜观察HUMSC中病毒颗粒的产生。流式细胞术检测由双病毒共感染的HUMSC包装出的腺病毒对HepG2细胞系的感染效率。Transwell方法研究双病毒感染对HUMSC向HepG2细胞趋化的影响。结果成功从脐带WJ组织中分离培养HUMSC。成功构建载体pGL3-hTERTp、pLentiR.E1A、pAd-hTERTp。双荧光素酶方法证明hTERTp在不同肿瘤细胞中具有较高的转录活性,而在正常细胞中转录活性极低。Ad-Track及LentiR.E1A共同感染HUMSC后,随着腺病毒早期复制基因E1A逐渐表达,Ad-Track启动复制程序,最终将MSC裂解并释放具有感染能力的病毒颗粒,进一步感染HepG2细胞。感染双病毒的HUMSC与对照组一致在LentiR.E1A感染后32 h内可以穿过Transwell小室,向培养HepG2细胞的下室迁移。结论经过E1A修饰的HUMSC可包装出携带hTERTp肿瘤特异启动子的复制缺陷型腺病毒,并进一步感染肿瘤细胞的多重靶向治疗系统,为肿瘤的靶向基因治疗提供了新思路。

p16INK4a蛋白可作为乳腺癌特异性分子标志

目的探讨p16INK4a蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法收集2014年～2015年间手术切除的132例乳腺癌标本,采用罗氏全自动免疫组化染色仪进行免疫组织化学染色,检测ER、PR、Her-2、Ki67、CK5/6、和p16INK4a表达,并按照不同表达模式进行结果判读和分子分型,观察p16INK4在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌免疫表型、分子亚型及临床指标的相关性。结果 132例浸润性乳腺癌中Luminal A型58例、Luminal B型32例、Her-2型21例、basal-like（BLBC）型12例、Normal-like型9例。p16INK4a蛋白表达阴性（0）、弱阳性（1＋）、阳性（2＋）和强阳性（3＋）表达样本分别占总数的5.30%（7/132）、11.36%（15/132）、30.30%（40/132）、53.03%（70/132）。按照p16INK4a表达强度,将阴性（0）和弱阳性（1＋）病例合并为阴性组（≤1＋）、将阳性（2＋）和强阳性（3＋）病例合并为阳性组（≥2＋）,p16INK4a阴性（≤1＋）表达率为16.67%（22/132）、p16INK4a阳性（≥2＋）表达率为83.33%（110/132）。按照构成比进行统计分析,发现p16INK4a蛋白的表达强度除在不同年龄分组中具有统计学差异（P〈0.05）之外,与ER、PR、Her-2及分子分型和是否存在转移之间均无统计学差异（P〉0.50）。结论 p16INK4A代偿性高表达是浸润性乳腺癌细胞周期异常的主要机制,且p16INK4A可作为浸润性乳腺癌细胞特异性的分子标志,采用IHC技术检测p16 INK4a的表达不仅为乳腺癌诊断提供了一种重要方法,也为乳腺癌的机制研究提供有价值的信息。

基于权重配方法的复方大黄素黄芩素治疗重症急性胰腺炎的组分配伍优化研究

目的探讨复方大黄素黄芩素组分配比的最优方案。方法健康雄性Sprague Dawley大鼠,随机分成正常组、假手术组、重症急性胰腺炎(SAP)组及治疗组。SAP组及治疗组模型制备均采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法。各组观察至12h分别处死取材,检测胰腺组织病理学评分和血清α-淀粉酶活性;筛选大黄素和黄芩素治疗SAP的有效剂量范围;研究大黄素、黄芩素联用治疗SAP的最佳剂量、配比和复方大黄素黄芩素量效关系。结果与正常组比较,SAP组病理学评分和α-淀粉酶活性均明显升高(P<0.05)。与SAP组比较,各配比治疗组病理学评分和α-淀粉酶活性均明显下降(P<0.05)。配比一组(大黄素3.24mg/kg+黄芩素7.12mg/kg)病理学评分下降最为明显,且优于二、三、四、五、六配比组(P<0.05)。配比一组α-淀粉酶活性明显优于二、四配比组(P<0.05),三、五、六配比组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经大型药理学软件DAS分析,组方中大黄素的标化剂量为0.126,黄芩素的标化剂量为0.107。结论复方大黄素黄芩素的最优组方剂量为大黄素3.24mg/kg和黄芩素7.12mg/kg,最佳配比为1∶2.2。

p16INK4a蛋白在人恶性肿瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨p16INK4a蛋白在多种人恶性肿瘤组织中的表达及临床意义。方法收集2014年至2015年手术切除的肿瘤标本642例。免疫组化染色检测并分析p16INK4在肿瘤组织中的表达。结果 642例肿瘤样本中良性肿瘤120例、恶性肿瘤522例。免疫组化检测p16INK4a在恶性肿瘤组织中表达阴性(-)、弱阳性(+)、中等阳性(++)和强阳性(+++)表达率分别为17.43%(91/522)、11.11%(58/522)、19.16%(100/522)和52.30%(273/522),而在良性病变中表达率分别为34.17%(41/120)、23.33%(28/120)、26.67%(32/120)和15.83%(19/120),差异具有统计学意义(P<0.05)。在不同组织来源的肿瘤中p16INK4a蛋白阳性表达率也并不相同(P<0.05)。分别以阳性免疫组化染色"++"和"+++"作为p16INK4A阳性表达界值,则p16INK4A蛋白作为恶性肿瘤分子标志的灵敏度、特异度和阳性预测值分别为71.46%、57.50%、87.97%和52.30%、84.17%和93.49%。结论 p16INK4A代偿性高表达是人恶性肿瘤特异性的免疫表型,可作为恶性肿瘤诊断、鉴别诊断和分子分型的分子标志。

miR-143-5p靶向AGR2在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的探讨miR-143-5p在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法qRT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞(BEL-7402、HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H和Hep3B)中的miR-143-5p表达。选取肝癌细胞BEL-7402和HepG2,将每株肝癌细胞分别分为:mimics-NC组(转染阴性对照mimics-NC)和miR-143-5p mimics组(转染miR-143-5p mimics)。采用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot分别检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡率和凋亡相关基因(Bax、Caspase-3和Bcl-2)的表达。通过靶基因预测网站RNA22预测miR-143-5p的靶基因。双荧光素酶报告基因验证miR-143-5p和靶基因前梯度蛋白2(AGR2)关系。qRT-PCR和Western blot检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组肝癌细胞BEL-7402和HepG2中AGR2的表达水平。再将肝癌细胞BEL-7402和HepG2分别分为:si-NC组和si-AGR2组,分别转染阴性对照si-NC和si-AGR2。采用MTT、克隆形成实验和流式细胞术分别检测si-NC组和si-AGR2组细胞增殖能力、克隆形成能力和凋亡率。结果肝癌细胞BEL-7402、HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H和Hep3B中的miR-143-5p表达明显低于正常肝细胞HL-7702(P<0.01)。与mimics-NC组相比,miR-143-5p mimics组BEL-7402和HepG2细胞增殖能力和克隆形成能力明显降低(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01)。与mimics-NC组相比,miR-143-5p mimics组BEL-7402和HepG2中Bax和Caspase-3表达明显上升(P<0.01),Bcl-2表达明显下降(P<0.01)。靶基因预测网站和双荧光素酶报告基因验证AGR2是miR-143-5p的靶基因。与mimics-NC组相比,miR-143-5p mimics组靶基因AGR2的表达明显下降(P<0.01)。与si-NC组相比,si-AGR2组BEL-7402和HepG2细胞增殖能力和克隆形成能力明显下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01)。结论miR-143-5p可能通过靶向AGR2抑制肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的凋亡。

采用CRISPR/Cas9技术构建新品系HBeAg转基因小鼠

目的培育一种HBeAg转基因小鼠新品系。方法克隆乙型肝炎病毒HBeAg基因;采用CRISPR/Cas9技术,通过同源重组的方式分别在Rosa26基因位点定点插入pliver-HBeAg表达框,获得含有HBeAg基因的表达载体pliver-HBeAg,经酶切得到含有HBeAg基因的线性DNA片段,将Cas9mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,再将其移植入C57BL/6J雌性代孕小鼠子宫,获得F0代建系小鼠;采用长片段PCR对出生小鼠进行鉴定,共获得HBeAg基因正确同源重组的F0代建系小鼠;F0代阳性小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配,繁育获得F1代小鼠,经PCR鉴定及测序确认阳性F1代小鼠;将携带HBeAg基因的F1代转基因小鼠再次回交,对子代小鼠进行PCR基因型鉴定,直至获得纯合子子代转基因小鼠;采用全自动化学发光免疫分析仪、胶体金法和免疫组织化学方法分别检测HBeAg转基因鼠血浆和肝组织中HBeAg和HBeAb的表达。结果采用CRISPR/Cas9技术共获得56只F0代小鼠,其中2只为正确同源重组的F0代小鼠;F1代小鼠中6只阳性F1代小鼠。截至目前,共获得22只F2代纯合子和29只杂合子HBeAg转基因小鼠。所有HBeAg转基因小鼠外周血中均可检出高浓度的HBeAg蛋白,但未检出HBeAb的表达。而且免疫组化结果显示HBeAg转基因小鼠肝脏肝细胞中可特异性表达HBeAg蛋白。结论采用CRISPR/Cas9技术成功构建了能在肝脏肝细胞中稳定表达HBeAg蛋白且对HBeAg免疫耐受的新品系HBeAg转基因小鼠,为HBV的研究提供了新的实验动物模型。

面开孔直径对种植修复系统及周围皮质骨影响的有限元分析

目的:探索牙冠面开孔直径对种植修复系统及周围皮质骨应力状况的影响。方法:建立第一磨牙缺失的下颌骨有限元模型,模拟植入Bego种植体1枚。建立不同开孔直径的牙冠模型(Φ=0、1、2、3、4 mm),于面施加200 N垂直力及100 N、45°侧向力,分析各部件的最大等效应力。结果:开孔直径≤3 mm时,牙冠咬合面所受应力保持平稳并集中在咬合力加载区。开孔直径在4 mm时应力增长达到峰值,垂直载荷下应力集中区转变至开孔边缘处。开孔直径≤1 mm时,中央螺丝在垂直载荷下可以维持在较低的应力水平。其余部位未见明显应力改变。结论:在后牙区行单牙种植修复时,若不考虑体外粘接,建议将面开孔直径设置为1 mm。

种植牙冠面开孔直径对粘接剂流动的计算流体力学分析

目的:利用计算流体力学(CFD)方法分析不同种植牙冠面开孔直径下,粘接剂的内部充盈及外部溢出情况,旨在为粘接固位式种植义齿提供合理的开孔方案。方法:应用ICEM 17.0软件建立面不开孔(NH)及开孔直径分别为1～3mm(OH1～OH3)共4组实验模型,利用Fluent 17.0软件中流体体积(VOF)模型对空气、粘接剂两相流进行模拟,并输出结果云图。结果:NH组中粘接剂内部充盈不全并伴有大量颈部溢出,OH组中粘接剂均可保证良好的充盈效果,且颈部溢出量明显减少。但OH1～OH3亚组之间粘接剂流动状态未见明显差异。结论:面开孔可以明显改善粘接剂的运动状态,实现良好的内部充盈并减少颈部溢出。增大开孔直径后粘接剂流动状态未见明显改变,故临床中建议采用使用1mm的开孔直径,从而更大限度的保持牙冠完整性。

肝癌小鼠脾脏免疫细胞的变化及其意义

目的:观察小鼠H22细胞原位种植性肝癌模型中,脾脏正性免疫细胞和负性免疫细胞比例的变化,并且观察脾脏切除后外周血和肿瘤组织免疫细胞比例的变化以及对肿瘤生长的影响。方法:建立小鼠H22细胞原位种植性肝癌模型,在荷瘤的不同时期,用流式细胞术检测脾脏中负性免疫细胞(MDSC、Treg)和正性免疫细胞(总CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、NK细胞、NKT细胞)比例的变化。荷瘤1 w后切除脾脏,用流式细胞术检测外周血及肿瘤组织中免疫细胞比例的变化,并比较切脾前后肿瘤重量、腹水量、荷瘤小鼠生存期的变化。结果:荷瘤小鼠脾脏MDSC细胞的比例一直高于正常组;Treg细胞在荷瘤2 w时显著升高;总CD3^+T细胞和CD4^+T细胞在荷瘤1 w时显著升高,2 w时显著下降;CD8^+T细胞在荷瘤2 w时明显下降;NK细胞在荷瘤3 w时明显下降;NKT细胞无显著变化。脾脏切除后外周血和肿瘤组织MDSC的比例下降,CD8^+T细胞的比例升高;肿瘤重量和荷瘤小鼠生存期无显著变化,腹水量在荷瘤2 w时显著减少,腹水发生率明显降低。结论:小鼠肝脏种植H22细胞株后,脾脏中正性免疫细胞的比例下降,负性免疫细胞的比例升高,脾脏的负性免疫状态逐渐占主导地位,从而促进了肝癌的发展。

人肝癌细胞系中miR-20a-5p的表达及对肝癌细胞Bel-7402增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-20a-5p在人肝癌细胞系中表达及其对肝癌细胞Bel-7402增殖及凋亡的影响。方法通过反转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)考察miR-20a在肝细胞L-02和7种肝癌细胞中的表达;构建过表达或沉默miR-20a-5p的人肝癌Bel-7402细胞株;通过噻唑蓝(MTT)实验考察过表达或沉默miR-20a-5p后对细胞增殖的影响;通过AnnexinV-FITC/PI流式实验考察对细胞凋亡的影响,并进一步通过蛋白质免疫印迹试验考察对凋亡相关基因蛋白表达水平的影响。结果与人肝细胞L-02相比,6种细胞系的miR-20a-5p表达水平较低。过表达miR-20a-5p后细胞增殖能力显著下降(P=0.011),沉默后显著上升(P=0.007)。高表达miR-20a-5p后细胞凋亡和早期凋亡比例均显著增加(P=0.009、0.017),沉默miR-20a-5p均明显降低(P=0.012、0.007)。高表达miR-20a-5p后细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、Survivin、Bcl-2表达下调,凋亡促进蛋白Bax表达上调;沉默miR-20a-5p后XIAP、Survivin、Bcl-2表达上调,Bax表达下调。结论 miR-20a-5p在6种肝癌细胞中低表达,可促进肝癌细胞Bel-7402凋亡,抑制细胞增殖能力。

髓源性抑制细胞(MDSC)相关趋化因子MIP-1γ及其受体CCR1在肝癌荷瘤小鼠脾脏的表达及意义

目的检测髓源性抑制细胞(MDSC)相关趋化因子在肝癌小鼠脾脏中的表达及其意义。方法用流式细胞术检测脾脏MDSC的比例,并采用流式细胞术分选出脾脏MDSC,与活化的脾细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IFN-γ的表达水平。制备小鼠原位种植性肝癌模型,用蛋白芯片检测正常小鼠和荷瘤小鼠脾脏的细胞因子差异表达,并用ELISA对脾脏MDSC相关趋化因子进行验证。最后用流式细胞术检测脾脏MDSC表面的趋化因子受体的表达。结果荷瘤小鼠脾脏MDSC的比例显著升高,并且具有免疫抑制功能。蛋白芯片筛选出10个上调的细胞因子和9个下调的细胞因子。在上调的细胞因子中,5个趋化因子是B淋巴细胞趋化因子(BLC)、CXC趋化因子配体16(CXCL16)、巨噬细胞/单核细胞趋化蛋白5(MCP-5)、巨噬细胞炎性蛋白1γ(MIP-1γ)和巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)。脾脏MDSC相关趋化因子MIP-1γ在荷瘤小鼠脾脏中显著升高,并且脾脏MDSC表面有其受体CC趋化因子受体1(CCR1)的表达。结论用蛋白芯片筛选出脾脏MDSC相关趋化因子MIP-1γ及其受体CCR1,可能与荷瘤小鼠脾脏MDSC聚集有关。

脾切除小鼠肝脏和外周血免疫细胞的动态变化

目的探讨脾切除小鼠肝脏和外周血免疫细胞的动态变化。方法32只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、脾切除1周组、脾切除2周组、脾切除4周组,每组8只。于术后第1周、2周、4周检测小鼠肝脏质量和肝指数,用流式细胞术检测外周血和肝脏免疫细胞(CD3-CD19+B细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD11b+Ly6C hi单核细胞、CD11b+Ly6C med单核细胞、CD11b+Ly6G+粒细胞、CD11c+MHCⅡ+DC细胞、CD11b int F4/80 hi枯否细胞、CD11b hi F4/80 int巨噬细胞、CD11b hi F4/80 int Ly6C hi巨噬细胞、CD11b hi F4/80 int Ly6C low巨噬细胞)的比例。结果与假手术组相比,脾切除1周、2周、4周组小鼠肝脏质量与肝指数均无显著差异(P>0.05);脾切除1周组肝脏CD11b+Ly6G+粒细胞显著升高(t=-2.339,P<0.01);脾切除4周组肝脏CD3+CD8+T细胞显著升高(t=-5.092,P<0.01);脾切除1周、2周、4周组肝脏CD3+CD4+/CD3+CD8+均显著降低(t=2.785,2.45,-3.549,均P<0.05);脾切除1周组外周血CD11b+Ly6C hi单核细胞(t=-3.321,P<0.05)、CD11b+Ly6G+粒细胞(t=-2.845,P<0.05)显著升高;其余细胞均无显著变化。结论脾切除术后肝脏和外周血免疫细胞比例发生变化,提示脾脏在维持肝脏区域免疫稳态中具有重要作用。

小鼠脾脏和外周血免疫细胞及部分细胞因子的增龄性变化

目的探索不同年龄小鼠脾脏和外周血免疫细胞、细胞因子的变化。方法24只雄性C57BL/6J小鼠分为幼年(1月龄)组7只、青年(2月龄)组7只、中年(12月龄)组7只、老年(17月龄)组3只。分别用流式细胞术和ELISA检测小鼠脾脏和外周血免疫细胞(CD3^(-)CD19^(+)B细胞、CD3^(+)CD4^(+)T细胞、CD3^(+)CD8^(+)T细胞、CD3^(-)CD49b^(+)NK细胞、CD11b-CD11c^(+)DC细胞、CD11b^(+)Ly6C^(med) Ly6G^(+)粒细胞、CD11b^(+)Ly6C^(hi) Ly6G^(-)单核细胞)的比例和细胞因子(IL-1β、IL-6、IFN-γ)的水平。结果中年组小鼠脾脏CD3^(-)CD19^(+)B细胞比例比幼年组、青年组显著降低(P<0.05),同样,老年组小鼠脾脏CD3^(-)CD19^(+)B细胞比例比幼年组、青年组显著降低(P<0.05);青年组小鼠脾脏CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例比幼年组小鼠升高(P<0.01);中年组小鼠脾脏CD11b^(+)Ly6C^(hi) Ly6G^(-)单核细胞比例比幼年组、青年组小鼠明显升高(P<0.05)。外周血中,中年组小鼠CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例比幼年组、青年组小鼠降低(P<0.05),同样,老年组小鼠CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例比幼年组、青年组小鼠降低(P<0.05);中年组小鼠外周血CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例比幼年组、青年组小鼠明显升高(P<0.05);中年组小鼠外周血CD11b^(+)Ly6C^(hi) Ly6G^(-)单核细胞比例比幼年组、青年组小鼠显著升高(P<0.01),老年组小鼠外周血CD11b^(+)Ly6C^(hi) Ly6G^(-)单核细胞比例比幼年组、青年组小鼠显著升高(P<0.01)。中年组、老年组小鼠脾脏IL-1β水平比青年组小鼠明显降低(P<0.05)。而中年组小鼠血清IL-6水平比幼年组、青年组鼠显著升高(P<0.01),同样,老年组小鼠血清IL-6水平均比幼年组、青年组鼠显著升高(P<0.05)。其余免疫细胞与细胞因子随月龄增长差异无统计学意义。结论随着月龄增长,脾脏中CD3^(-)CD19^(+)B细胞比例、IL-1β水平逐渐降低,外周血中CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例逐渐降低、CD11b^(+)Ly6C^(hi) Ly6G^(-)单核细胞比例IL-6水平也逐渐升高,可能与不同月龄机体免疫状态相关。

妊娠合并肾综合征出血热患者临床特征的多中心研究

目的探讨妊娠合并肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)患者的临床特点及预后。方法纳入2009年11月至2019年2月西安交通大学第二附属医院(4例)、空军军医大学第二附属医院(4例)、西安交通大学第一附属医院(1例)和咸阳市中心医院(2例)收治的11例妊娠合并HFRS患者作为病例组,将同期收治年龄匹配的24例非妊娠女性HFRS患者作为对照组。回顾性分析两组患者的年龄、合并症、临床分型、实验室指标等临床资料,并随访病例组孕妇及其胎儿的临床结局。统计学比较采用曼-惠特尼U检验和χ^(2)检验。结果11例病例组患者年龄为29(22,33)岁,其中7例为重型和危重型;24例对照组患者年龄为32(24,37)岁,其中4例(16.7%)为重型和危重型;两组患者的临床分型差异有统计学意义(χ^(2)=7.722,P=0.015)。病例组中,有10例出现高血容量综合征,10例出现肺水肿,6例出现多期重叠,均高于对照组[2例(8.3%)、2例(8.3%)和2例(8.3%)],差异均有统计学意义(χ^(2)=22.828、22.828、9.135,均P<0.01)。与对照组比较,病例组患者住院期间尿素氮最高值和血清肌酐最高值均较高,差异均有统计学意义(Z=-2.453、-2.336,均P<0.05);血清白蛋白最低值、血红蛋白最高值和最低值均较低,差异均有统计学意义(Z=-3.742、-3.350、-4.034,均P<0.01)。所有妊娠合并HFRS患者治疗后均痊愈,9例患者治愈后足月分娩9名健康婴儿,婴儿出生时均未发现畸形,均接受母乳喂养,喂养时间为6~20个月,平均随访3年均未发现生长发育异常。结论妊娠合并HFRS的患者病程中易出现多期重叠,合并高血容量综合征和急性肺水肿的风险高。患者治愈后可继续妊娠至足月分娩。

载脂蛋白A-Ⅳ在代谢综合征中的应用前景

代谢综合征的日益增多,已成为一重大的公共健康问题和社会问题。代谢综合征是一组以肥胖、高血糖、血脂异常以及高血压等聚集发病的临床征候群。大量实验研究证明,代谢性炎症和其导致的胰岛素抵抗既是过度营养所致肥胖的结果,又是代谢综合征发生发展的重要原因。研究发现小肠分泌的载脂蛋白A–IV(Apo A-IV)具有抑制食欲、抗炎、抗氧化、促脂代谢及降血糖作用,已成为代谢综合征研究新热点而受到关注。最新实验结果显示,Apo A-IV降血糖的作用部分是通过刺激胰岛素释放和抑制肝糖合成实现的。笔者发现,Apo A-IV可增加胰岛素敏感性,但抑制炎症信号传导通路。因此,预测Apo A-IV可能在代谢症候群的发生和发展过程中起抑制和保护作用。本文将根据代谢综合征的发病机制,结合以往研究报道和作者的最新实验结果对Apo A-IV的作用进行评述,并预测其在代谢综合征中的应用前景。